本文選題：抑郁 + 針刺�。� 參考：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景抑郁癥已經(jīng)嚴(yán)重影響到人類的生存質(zhì)量。2017年2月23日,世界衛(wèi)生組織(WHO)網(wǎng)站發(fā)布:全球抑郁癥發(fā)病率占總?cè)丝诘?.3%,已經(jīng)達(dá)到3.22億;2005-2015年間,患者數(shù)量增加了 18.4%;我國抑郁障礙患病率為4.2%,總傷殘損失健康生命年(YLD)為8,981,401人年。抑郁癥的發(fā)病機(jī)理較復(fù)雜,涉及多系統(tǒng)的功能紊亂,與社會-心理-生理密切相關(guān),其發(fā)病機(jī)制仍存在許多未知領(lǐng)域。與抑郁癥關(guān)系密切的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路---JNK(c-Jun N terminal kinase,JNK)信號通路,由于外界應(yīng)激刺激和/或細(xì)胞因子的作用,能夠激活機(jī)體JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,JNK通路的激活可引起海馬腦神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。其特異性阻斷劑SP600125能夠選擇性抑制JNK,對JNK的阻斷具有高度專一性。有研究結(jié)果顯示,SP600125與電針和氟西汀兩種治療方法對大鼠強(qiáng)迫游泳急性應(yīng)激狀態(tài)的影響具有協(xié)同作用,在阻斷劑條件下,對慢性應(yīng)激模型大鼠的針刺治療機(jī)制將于本研究中進(jìn)一步探討。研究目的本研究旨在通過對抑郁癥的臨床與實驗研究現(xiàn)狀的分析和探討,闡述阻斷劑條件下針刺與氟西汀對CUMS大鼠JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用機(jī)制。采用側(cè)腦室注射方法,對比觀察阻斷劑SP600125通過不同給藥方式的異同;通過與前期研究的比較,觀察實驗中各因子在蛋白水平、基因水平以及在不同腦區(qū)關(guān)鍵因子分布的形態(tài)學(xué)變化,探討針刺對JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮的效應(yīng),以期為臨床提供有價值的實驗數(shù)據(jù)。研究方法動物分組:清潔級SD大鼠,適應(yīng)性喂養(yǎng)后,隨機(jī)分為8組:空白組、模型組、模型+針刺組、模型+氟西汀組,模型+DMSO組、模型+阻斷劑組、模型+針刺+阻斷劑組、模型+氟西汀+阻斷劑組(n=9)。造模方法:孤養(yǎng)結(jié)合公認(rèn)的CUMS模型大鼠---7種不可預(yù)知刺激方法(斷食12h,斷水24h,水平震蕩30min,斷食24h,晝夜顛倒24h,夾尾3min,束縛2h)連續(xù)刺激21天,平均每種方法各應(yīng)用3次。干預(yù)方法:除空白對照組、模型組、模型+針刺組、模型+氟西汀組外,其余4組均行側(cè)腦室手術(shù),并埋置套管,術(shù)后恢復(fù)1周(前3天每日腹腔注射青霉素抗感染)�？瞻讓φ战M不給予任何干預(yù),自由飲食水;模型組:每日隨機(jī)選取1種應(yīng)激刺激方法,1次/日;模型+DMSO組:造模前1/2h,側(cè)腦室注射溶劑DMSO 10ul/日;模型+SP600125組:應(yīng)激前1/2h,側(cè)腦室注射SP600125溶液10ul/日;模型+針刺組:應(yīng)激前1h,針刺百會、印堂和足三里,20min/日;模型+針刺+SP600125組:應(yīng)激前1h給予針刺,應(yīng)激前1/2h,側(cè)腦室注射SP600125 10ul/日;模型+氟西汀組:應(yīng)激前1h,以10ml/kg灌胃給藥,1次/日;模型+氟西汀+SP600125組:應(yīng)激前1h給予氟西汀灌胃,應(yīng)激前1/2h,側(cè)腦室注射SP600125 10ul/日.檢測指標(biāo)與方法:體重及行為學(xué)共4次(實驗前1天,造模第7天,第14天,第21天);ELISA 法檢測模型大鼠海馬組織中 Caspase-3、HSP70、JNK、p-MKK4、p-MKK7蛋白表達(dá)的含量變化;血清中Caspase-3和HSP70蛋白表達(dá)的含量變化;Western Blot法檢測模型大鼠海馬組織中JNK和p-JNK蛋白表達(dá)的含量變化;實時熒光定量PCR法檢測模型大鼠海馬組織中MKK4、MKK7、JNK基因水平的含量變化;免疫組化法觀測模型大鼠海馬組織的JNK和c-Jun分布的形態(tài)學(xué)變化。研究結(jié)果1.體重及行為學(xué)結(jié)果:實驗前各組大鼠體重及行為學(xué)檢測不存在顯著差異,造模后模型各組大鼠行為學(xué)的組間差異說明了造模成功。2.ELISA 結(jié)果2.1 Caspase-3是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵因子海馬與正常組比較,模型+針刺+SP組升高有極顯著差異(P0.01);與模型組比較,模型+氟西汀+SP組升高有顯著差異(P0.05),模型+針刺+SP組升高有極顯著差異(P0.01);與模型+針刺組比較,模型+針刺+SP組升高有顯著差異(P0.05);與模型+氟西汀組比較,模型+針刺+SP組升高有顯著差異(P0.05)。血清與模型+針刺組比較,模型+氟西汀+SP組升高有顯著差別(P0.05),其他各組無明顯組間差異。2.2 HSP70是應(yīng)激刺激反應(yīng)因子海馬與正常組比較,模型+針刺組、模型+針刺+SP組降低有極顯著差異(P0.01);與模型組比較,模型+針刺組、模型+針刺+SP組降低有極顯著差異(P0.01);與模型+針刺組比較,正常組、模型組、模型+SP、模型+氟西汀組升高有極顯著差異(P0.01);與模型+氟西汀組比較,模型+針刺組、模型+針刺+SP組降低有極顯著差異(P0.01)。血清與正常組比較,模型+氟西汀組降低有顯著差異(P0.05);與模型+氟西汀組比較,正常組、模型+SP組升高有顯著差異(P0.05)。2.3 JNK是信號通路中的關(guān)鍵因子海馬與模型+針刺組比較,模型+SP、模型+氟西汀、模型+氟西汀+SP組減少有極顯著差異(P0.01);與模型+氟西汀組比較,模型+針刺組增加有極顯著差異(P0.01)。2.4 p-MKK4是JNK信號通路的上游關(guān)鍵因子海馬組間數(shù)據(jù)顯著性=0.6990.05,說明組間不存在顯著差異。2.5 p-MKK7是JNK信號通路的上游關(guān)鍵因子海馬與正常組比較,模型組、模型+針刺+SP組降低有顯著差異(P0.05);與模型組比較,正常組升高有顯著差異(P0.05)。3.Western Blot 結(jié)果3.1 JNK是信號通路中的關(guān)鍵因子海馬各組間無明顯差別(P0.05)。3.2 p-JNK是JNK的激活形式(即磷酸化的JNK)海馬與正常組比較,模型組、模型+D組升高有極顯著差異(P0.01),模型+氟西汀組升高有顯著差異(P0.05);與模型組比較,正常組降低有極顯著差異(P0.01),模型+氟西汀+SP、模型+針刺+SP組降低有顯著差異(P0.05);與模型+氟西汀組比較,正常組降低有顯著差異(P0.05)。4.Rt-PCR 結(jié)果4.1 MKK4是信號通路的上游關(guān)鍵因子海馬與正常組比較,模型組、模型+SP、模型+D、模型+氟西汀組均升高有極顯著差異(P0.01);與模型組比較,正常組、模型+氟西汀+SP、模型+針刺組、模型+針刺+SP組均降低有極顯著差異(P0.01),模型+SP、模型+氟西汀組降低有顯著差異(P0.05);與模型+針刺組比較,模型組、模型+D組升高有極顯著差異(P0.01);與模型+氟西汀組比較,正常組降低有極顯著差異(P0.01),模型組升高有顯著差異(P0.05)。4.2 MKK7是信號通路的上游關(guān)鍵因子海馬與正常組比較,模型組、模型+D組均升高有極顯著差異(P0.01);與模型組比較,正常組、模型+SP、模型+氟西汀、模型+氟西汀+SP、模型+針刺組、模型+針刺+SP組均降低有極顯著差異(P0.01);與模型+針刺組比較,模型組升高有極顯著差異(P0.01);與模型+氟西汀組比較,模型組升高有極顯著差異(P0.01)。4.3 JNK是信號通路中的關(guān)鍵因子海馬與正常組比較,模型組、模型+D、模型+氟西汀、模型+針刺組均升高有極顯著差異(P0.01),模型+SP組升高有顯著差異(P0.05);與模型組比較,正常組、模型+氟西汀+SP、模型+針刺+SP組降低有極顯著差異(P0.01);與模型+針刺組比較,正常組降低有極顯著差異(P0.01),模型+氟西汀+SP、模型+針刺+SP組均降低有顯著差異(P0.05);與模型+氟西汀組比較,正常組降低有極顯著差異(P0.01)。5.免疫組化結(jié)果5.1 JNK是信號通路中的關(guān)鍵因子海馬CA1區(qū)與模型+氟西汀組比較,模型+D組升高有顯著差異(P0.05),模型+針刺+SP組有極顯著差異(P0.01);海馬CA3區(qū)與模型+針刺組比較,模型+D組有顯著差異(P0.05);與模型+氟西汀組比較,模型+D組升高有極顯著差異(P0.01)。5.2 c-Jun是信號通路中關(guān)鍵下游因子海馬CA1區(qū)與正常組比較,模型+氟西汀組升高有極顯著差異(P0.01);海馬CA3區(qū)各組間無顯著差異(P0.05)。結(jié)論1.慢性溫和不可預(yù)知性應(yīng)激大鼠抑郁模型建立成功;2.阻斷劑SP600125能夠特異性阻斷針刺對JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(JMK、p-JNK、MKK4、MKK7、Caspase-3)等關(guān)鍵蛋白和mRNA的調(diào)節(jié),對治療有協(xié)同作用;3.針刺可通過抑制海馬內(nèi)JNK信號通路激活、減少海馬CA1區(qū)、CA3區(qū)神經(jīng)元凋亡發(fā)揮抗抑郁作用;4.針刺可通過外周血與海馬內(nèi)JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路共同作用實現(xiàn)抗抑郁的作用。
[Abstract]:In this study , the effects of acupuncture and fluoxetine on the signal transduction pathway in rat hippocampus were studied . The results showed that SP600125 had a close relationship with depression . The results showed that SP600125 had a close relationship with depression . It was divided into 8 groups : blank group , model group , model + acupuncture group , model + fluoxetine group , model + DMSO group , model + blocker group , model + acupuncture + blocker group , model + blocker group , model + acupuncture + blocker group , model + fluxitin + blocker group ( n = 9 ) . Methods : 1 / 2 hours before stress , 1 / 2 hours before stress , 10 ul / day injection of SP600125 in the lateral ventricle , 1 / 2 hours before stress , 1 / 2 hours before stress , injection of SP600125 10ul / day in the lateral ventricle . Compared with the model group , there was significant difference between the model and the acupuncture plus SP group ( P0.05 ) . Compared with the model group , the model + acupuncture plus SP group increased significantly ( P0.05 ) . Compared with the model + acupuncture group , the model + acupuncture plus SP group increased significantly ( P0.05 ) . Compared with the model group , there was a significant difference between the model group and the model + D group ( P0.05 ) . Compared with the model group , the model was significantly higher than that in the normal group ( P0.05 ) . Compared with the model + fluoxetine group , there was a significant difference in the model + D group ( P0.01 ) . Compared with the model + fluoxetine group , there was a significant difference in the model + D group ( P0.01 ) . Compared with the model + fluoxetine group , the model + D group had significant difference ( P0.01 ) .
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R245

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2016339