本文選題：TLE4 + 結(jié)直腸癌��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：研究背景和目的:結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一。據(jù)報道,全球結(jié)直腸癌每年新發(fā)病例數(shù)約120萬,發(fā)病率居所有惡性腫瘤中的第3位,病死率居第4位。此外,隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢,且發(fā)病年齡呈年輕化特點。轉(zhuǎn)移是引起CRC患者死亡的首要原因,大多數(shù)病人在確診時就已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠處轉(zhuǎn)移。因此,深入探討結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的分子機制,尋找早期診斷、早期治療和預(yù)防的有效途徑,始終是結(jié)直腸癌研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容。TLE4基因是Groucho/Tle基因家族的重要成員之一,Groucho/Tle蛋白在胚胎發(fā)育和形態(tài)發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用,可調(diào)控相關(guān)關(guān)鍵信號通路的活性,包括受體酪氨酸激酶/Ras/MAPK、Notch、Wnt、Hedgehog、JNK等信號通路。據(jù)報道,TLE4在造血功能、骨發(fā)育過程中起著重要作用,有研究提示TLE4在急性髓性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)中起著抑制作用。在白血病細胞株中下調(diào)TLE4表達可以增加白血病細胞的分裂,過表達TLE4可引起細胞凋亡的增加。然而,關(guān)于TLE4在包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的實體腫瘤中的作用知之甚少。我們前期的生物信息學(xué)分析顯示,TLE4在結(jié)直腸癌組織中表達水平顯著高于配對的癌旁正常腸粘膜組織;但是,TLE4在結(jié)直腸癌發(fā)生和演進過程中的作用及分子機制目前尚不清楚。本課題擬檢測TLE4蛋白在結(jié)直腸癌中的表達情況,分析其表達與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后之間的關(guān)系,并通過多種體內(nèi)外實驗研究TLE4在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)分子機制,以期為結(jié)直腸癌的個體化診療和靶向藥物的開發(fā)提供一定的理論依據(jù)。方法:1.運用公共數(shù)據(jù)庫(GEO)數(shù)據(jù)分析TLE4在結(jié)直腸癌中的表達情況;2.利用Western blot和實時定量PCR技術(shù)檢測TLE4在新鮮結(jié)直腸癌和配對癌旁正常組織標本中的表達情況;通過免疫組化技術(shù)檢測結(jié)直腸癌患者石蠟組織標本中TLE4的表達,分析其與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征及預(yù)后間的相關(guān)性;3.通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建TLE4穩(wěn)定過表達和干擾表達的結(jié)直腸癌細胞株,并通過實時定量PCR和Western blot技術(shù)檢測TLE4和相關(guān)信號通路蛋白在穩(wěn)定細胞株中mRNA和蛋白水平的表達情況;4.通過平板克隆形成實驗、軟瓊脂克隆形成實驗、MTT實驗體外檢測TLE4穩(wěn)定過表達和干擾對結(jié)直腸癌細胞增殖能力的影響,通過Transwell實驗體外檢測TLE4穩(wěn)定過表達和干擾對結(jié)直腸癌細胞遷移能力的影響;利用裸鼠皮下成瘤模型,并運用免疫組化實驗體內(nèi)檢測TLE4穩(wěn)定過表達和干擾對結(jié)直腸癌細胞增殖能力的影響;5.實時定量PCR和Western blot技術(shù)檢測TLE4穩(wěn)定過表達和干擾后結(jié)直腸癌細胞中JNK/c-Jun通路及其相應(yīng)靶點分子的變化;6.使用 JNK 抑制劑 SP600125 處理 SW480/TLE4 和 HT29/TLE4 細胞 24 小時后,進一步通過Western blot檢測JNK/c-Jun通路及其相應(yīng)靶點分子的變化,通過MTT實驗、平板克隆形成實驗、軟瓊脂克隆形成實驗和Transwell實驗檢測結(jié)直腸癌細胞的增殖及遷移能力。結(jié)果:(數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0 for Windows統(tǒng)計軟件進行分析)1.TLE4在結(jié)直腸癌組織中表達水平較配對癌旁正常組織顯著升高;其表達水平與患者Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間呈正相關(guān)關(guān)系:2.Kaplan-Meier法分析結(jié)果顯示,TLE4高表達組的總體生存率顯著低于低表達組,與患者的生存預(yù)后呈負相關(guān)關(guān)系;3.TLE4的過表達促進結(jié)直腸癌細胞的增殖、遷移和裸鼠皮下成瘤能力,而干擾TLE4表達后則抑制結(jié)直腸癌細胞的增殖、遷移和裸鼠皮下成瘤能力;4.TLE4能激活JNK/c-Jun分子信號通路的活性,使用JNK/c-Jun分子信號通路阻滯劑SP600125能夠抵消TLE4促進結(jié)直腸癌細胞增殖和遷移的作用。TLE4可能通過激活JNK/c-Jun分子信號通路促進結(jié)直腸癌細胞增殖和遷移。結(jié)論:TLE4在結(jié)直腸癌組織中顯著上調(diào),其表達上調(diào)能夠通過激活JNK/c-Jun信號通路促進結(jié)直腸癌細胞的增殖及遷移。
[Abstract]:Background and purpose: colorectal cancer (CRC) is one of the most common malignant tumors of the digestive system. It is reported that the number of new cases of colorectal cancer is about 1 million 200 thousand in the world, the incidence is the third in all malignant tumors, and the fatality rate is fourth. In addition, the incidence of the disease is with the change of lifestyle and diet structure. There is a trend of increasing trend year by year, and the age of onset is young. Metastasis is the primary cause of death in CRC patients. Most patients have lymph node metastasis or distant metastasis at the time of diagnosis. Therefore, the molecular mechanism of the development and metastasis of colorectal cancer is explored, and the effective ways to find early diagnosis, early treatment and prevention are always sought. .TLE4 gene is one of the important members of the field of colorectal cancer research. The gene is one of the important members of the Groucho/Tle gene family. Groucho/Tle protein plays an important role in the process of embryonic development and morphogenesis. It can regulate the activity of related key signaling pathways, including receptor tyrosine kinase / Ras/MAPK, Notch, Wnt, Hedgehog, JNK and other signaling pathways. It is reported that TLE4 plays an important role in hematopoiesis and bone development. Studies have suggested that TLE4 plays an inhibitory role in acute myelogenous leukemia (acute myelogenous leukemia, AML). The downregulation of TLE4 in leukemia cell lines can increase the division of leukemia cells, and the over expression of TLE4 may cause an increase in apoptosis. However, TLE4 The role of TLE4 in colorectal cancer tissue is significantly higher than that of normal paracancerous intestinal mucosa in colorectal cancer. However, the role and molecular mechanism of TLE4 in the development and evolution of colorectal cancer is not clear. To examine the expression of TLE4 protein in colorectal cancer, analyze the relationship between its expression and the clinicopathological parameters and prognosis of colorectal cancer patients, and to study the role of TLE4 in the process of colorectal cancer, development and metastasis through a variety of in vivo and in vivo experiments, as well as the related molecular mechanism, in order to be an individualized diagnosis and target for colorectal cancer. To provide some theoretical basis for the development of drugs. Methods: 1. the expression of TLE4 in colorectal cancer was analyzed by using public database (GEO) data. 2. the expression of TLE4 in normal tissue specimens of fresh colorectal cancer and paired cancerous tissues was detected by Western blot and real-time quantitative PCR technique; and the colorectal cancer was detected by immunohistochemical technique. The expression of TLE4 in paraffin tissue specimens of cancer patients was analyzed, and the correlation between the clinicopathological features and prognosis of colorectal cancer patients was analyzed. 3. the colorectal cancer cell lines with TLE4 stable overexpression and interference expression were constructed by molecular cloning technique, and the stability of TLE4 and related signal pathway proteins was determined by real-time quantitative PCR and Western blot technique. The expression of mRNA and protein levels in cell lines; 4. through the formation of flat clones, the formation of soft agar cloning, and the effect of TLE4 stable overexpression and interference on the proliferation of colorectal cancer cells in vitro, and the stability of TLE4 over expression and interference to the migration of colorectal cancer cells in vitro by the Transwell test. Effect; using the subcutaneous tumor model of nude mice, and the effect of TLE4 stable overexpression and interference on the proliferation of colorectal cancer cells in the immuno histochemical experiment; 5. real-time quantitative PCR and Western blot techniques for detecting the changes of JNK/ c-Jun pathway and the corresponding target molecules in colorectal cancer cells after the stable overexpression and interference of TLE4; 6. After treating SW480/TLE4 and HT29/TLE4 cells with JNK inhibitor SP600125 for 24 hours, the changes in the JNK/c-Jun pathway and the corresponding target molecules were detected by Western blot. The proliferation and migration ability of the colorectal cancer cells were detected by MTT experiment, the formation of flat clones, the cloning of soft agar and the ability to detect the migration of the colorectal cancer cells. Fruit: (data was analyzed using SPSS 20 for Windows statistical software) the expression level of 1.TLE4 in colorectal cancer tissues was significantly higher than that of normal para cancerous tissue, and the expression level was positively correlated with the clinicopathological parameters such as Dukes staging and lymph node metastasis. The results of 2.Kaplan-Meier analysis showed that the high expression group of TLE4 was found. The overall survival rate was significantly lower than that of the low expression group, which had a negative correlation with the survival prognosis of the patients. The overexpression of 3.TLE4 promoted the proliferation, migration and subcutaneous tumor formation of the colorectal cancer cells, while the interference of TLE4 expression inhibited the proliferation of colorectal cancer cells, migration and subcutaneous tumor formation ability of nude mice; 4.TLE4 could activate the JNK/c-Jun molecular signal. The activity of the pathway, the use of the JNK/c-Jun molecular signaling pathway blocker SP600125 can counteract the effect of TLE4 on the proliferation and migration of colorectal cancer cells..TLE4 may promote the proliferation and migration of colorectal cancer cells by activating the JNK/c-Jun molecular signaling pathway. Conclusion: TLE4 is significantly up-regulated in the colorectal cancer group, and its up regulation can be induced by excitation. Living JNK/c-Jun signaling pathway promotes proliferation and migration of colorectal cancer cells.

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.3

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本文編號：1897521