本文選題：配對相關(guān)同源框蛋白1 + A549細(xì)胞�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：第一部分 PRRX1在非小細(xì)胞肺癌中的組織學(xué)表達(dá)特征及臨床意義目的:通過檢測PRRX1在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)情況,結(jié)合患者臨床資料,了解PRRX1在肺癌中臨床價(jià)值。方法:利用免疫組化法檢測52例非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本和28例癌旁正常肺組織標(biāo)本中PRRX1表達(dá)情況,結(jié)合患者的臨床病理資料和預(yù)后情況,應(yīng)用Kaplan-Meier生存分析法和COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析PRRX1與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果顯示PRRX1在癌旁正常肺組織中呈現(xiàn)穩(wěn)定中度表達(dá);在非小細(xì)胞肺癌組織中PRRX1高度表達(dá)存在高分化的肺癌組織中,PRRX1中低表達(dá)存在中度分化的肺癌組織中,PRRX1低表達(dá)或者表達(dá)缺失存在于低分化的肺癌組織中。2.低表達(dá)PRRX1與患者的腫瘤大小分期,疾病分期和腫瘤分化程度相關(guān)(P=0.002,P=0.019和P=0.001)。3.COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型多因素分析顯示淋巴結(jié)分期、疾病分期和PRRX1表達(dá)水平是患者預(yù)后的獨(dú)立因素(Cox回歸分析:P=0.048,P=0.008和P=0.035)。4.PRRX1低表達(dá)患者生存周期較高表達(dá)者縮短(log-rank檢驗(yàn),P=0.010)。結(jié)論:PRRX1的表達(dá)情況與非小細(xì)胞肺癌患者的疾病分期、細(xì)胞分化、預(yù)后相關(guān)。低表達(dá)的PRRX1提示患者預(yù)后差。第二部分 沉默PRRX1誘導(dǎo)A549細(xì)胞經(jīng)歷EMT和獲得CSCs特性目的:構(gòu)建PRRX1基因沉默的PRRX1-shRNA-A549細(xì)胞模型,進(jìn)一步研究在A549細(xì)胞中沉默PRRX1與EMT和CSCs特性的關(guān)系。方法:通過shRNA技術(shù)沉默A549細(xì)胞中PRRX1表達(dá),構(gòu)建PRRX1-shRNA-A549細(xì)胞模型。Western blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證模型構(gòu)建情況,應(yīng)用MTT和軟瓊脂克隆生長實(shí)驗(yàn)觀察模型細(xì)胞的增殖能力,相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。Transwell體外侵襲、入侵實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)檢測模型細(xì)胞的侵襲和移動(dòng)能力。Western blot實(shí)驗(yàn)和免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察模型細(xì)胞的上皮和間質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)情況。流式細(xì)胞儀分選模型細(xì)胞上肺癌CSCs標(biāo)志物比例。結(jié)果:1.Western blot檢測結(jié)果顯示A549細(xì)胞中PRRX1為高表達(dá),可以應(yīng)用基因沉默技術(shù)構(gòu)建細(xì)胞模型。2.成功構(gòu)建PRRX1-shRNA-A549、Mock-shRNA-A549細(xì)胞模型,Western blot實(shí)驗(yàn)顯示PRRX1表達(dá)明顯抑制在基因沉默細(xì)胞模型中。3.MTT和軟瓊脂克隆生長實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,沉默PRRX1后,細(xì)胞貼壁和非貼壁增殖情況明顯受到增強(qiáng)。4.相差顯微鏡下可見,沉默PRRX1后,A549細(xì)胞形態(tài)向間質(zhì)細(xì)胞表型特征轉(zhuǎn)化。5.Transwell體外侵襲、入侵實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)顯示,沉默PRRX1后,細(xì)胞的移動(dòng)和侵襲能力增強(qiáng)。6.沉默PRRX1后,A549細(xì)胞的間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin和N-cadherin表達(dá)上調(diào),上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin下調(diào),并且免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到相一致的結(jié)果。7.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果,細(xì)胞沉默PRRX1后,肺癌干細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物(CD133、CD44、ALDH1)細(xì)胞比例提高,分別為77.6%、4.1%、1.5%。結(jié)論:敲除PRRX1誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞經(jīng)歷EMT,獲得CSCs特性,增強(qiáng)了細(xì)胞增殖、侵襲的能力。第三部分 沉默PRRX1通過干擾caspase-3凋亡通道激活抑制順鉑誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡目的:通過已經(jīng)建立的PRRX1-shRNA-A549細(xì)胞模型,觀察PRRX1沉默后,順鉑誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡和凋亡通道的變化,探討PRRX1在順鉑誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制。方法:通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測PRRX1沉默后順鉑對于細(xì)胞增殖抑制情況,并選擇最佳順鉑實(shí)驗(yàn)濃度。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況。線粒體膜電位檢測線粒體體外膜電位的變化情況。Western blot實(shí)驗(yàn)檢測凋亡相關(guān)蛋白(caspase-3,caspase-9,cytochrome C和Apaf-1)的表達(dá)情況,判斷PRRX1沉默后細(xì)胞凋亡通道。MTT實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中添加caspase-3激活劑PAC-1,反向驗(yàn)證PRRX1沉默干擾的細(xì)胞凋亡通道。結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PRRX1沉默后阻止了順鉑誘導(dǎo)的A549細(xì)胞增殖抑制,順鉑濃度為20μg/ml是后續(xù)實(shí)驗(yàn)最佳濃度。2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PRRX1沉默后,細(xì)胞凋亡明顯受到抑制。3.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PRRX1沉默后,細(xì)胞周期阻滯在G2期。4.線粒體膜電位檢測結(jié)果顯示,PRRX1沉默后,順鉑誘導(dǎo)的線粒體膜電位下降受到抑制。5.PRRX1沉默后凋亡相關(guān)蛋白caspase-3,caspase-9,cytochrome C和Apaf-1表達(dá)下降。6.添加PAC-1的MTT試驗(yàn)和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,細(xì)胞增殖受到明顯抑制,細(xì)胞凋亡明顯增加。結(jié)論:沉默PRRX1通過抑制線粒體膜電位下降和干擾caspase-3凋亡通道的激活,抑制順鉑誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Part 1 the histological features and clinical significance of PRRX1 in non-small cell lung cancer: by detecting the expression of PRRX1 in patients with non-small cell lung cancer and combining the clinical data of the patients, the clinical value of PRRX1 in lung cancer was understood. Methods: 52 cases of non-small cell lung cancer were detected by immunohistochemistry and 28 cases of para cancer were detected by immunohistochemistry. PRRX1 expression in normal lung tissue specimens, combined with the patients' clinicopathological data and prognosis, Kaplan-Meier survival analysis and COX proportional risk regression model were used to analyze the relationship between PRRX1 and patients' prognosis. Results: 1. the results of immunohistochemistry showed that PRRX1 showed stable medium expression in normal lung tissue adjacent to cancer; in non small cell lung cancer. PRRX1 highly expressed in highly differentiated lung cancer tissues, low expression of PRRX1 in moderately differentiated lung cancer tissues, PRRX1 low expression or expression deletion existed in low differentiated lung cancer tissues with.2. low expression PRRX1 and tumor size and staging of patients, disease staging and degree of swelling differentiation (P=0.002, P=0.019 and P=0.001).3. Multifactor analysis of the COX proportional risk regression model showed that lymph node staging, disease staging and PRRX1 expression were independent factors for patients' prognosis (Cox regression analysis: P=0.048, P=0.008 and P=0.035) with low expression of.4.PRRX1 in patients with low expression of.4.PRRX1 (log-rank test, P=0.010). Conclusion: the expression of PRRX1 and non small cell lung cancer The patient's disease staging, cell differentiation and prognosis are related. Low expression of PRRX1 suggests that the patient has a poor prognosis. Second silent PRRX1 induces A549 cells to undergo EMT and obtain CSCs characteristics: to construct a PRRX1-shRNA-A549 cell model of PRRX1 gene silencing, and to further study the relationship between the silence of PRRX1 and EMT and CSCs in A549 cells. Methods: The expression of PRRX1 in A549 cells was silenced by shRNA technique, and the construction of PRRX1-shRNA-A549 cell model.Western blot was constructed. The proliferation ability of the model cells was observed by MTT and soft agar clone growth experiments. The phase microscope observation of cell morphology changes of cell morphology changes in.Transwell in vitro, invasion experiment and wound healing test test. Measurement of cell invasion and mobility of the model cells.Western blot experiment and immunofluorescence test to observe the expression of epithelial and interstitial markers in the model cells. Flow cytometry was used to determine the proportion of CSCs markers on the lung cancer cells on the model cells. Results: the results of 1.Western blot detection showed that PRRX1 in A549 cells was highly expressed, and gene silencing technique could be applied. The cell model.2. was constructed successfully to construct PRRX1-shRNA-A549, Mock-shRNA-A549 cell model, and Western blot experiment showed that the expression of PRRX1 expression was obviously inhibited in the gene silencing cell model, the results of.3.MTT and soft agar clonal growth showed that the cell adherence and non adherent colonization of the cells were obviously enhanced by the enhanced.4. phase microscope after the silencing of PRRX1. After the silence of PRRX1, the phenotype of A549 cells transformed into.5.Transwell in vitro, and the invasion experiment and wound healing experiment showed that after the silence of PRRX1, the cell movement and invasion ability enhanced.6. silent PRRX1, the expression of Vimentin and N-cadherin in the interstitial cell markers of A549 cells was up, and the epithelial marker E-cadher was E-cadher. In was down, and the results of immunofluorescence test were consistent with the results of.7. flow cytometry. After cell silencing of PRRX1, the proportion of lung cancer stem cell standard (CD133, CD44, ALDH1) cells increased, respectively, 77.6%, 4.1%, 1.5%. conclusion: knockout of PRRX1 induced lung adenocarcinoma cells experienced EMT, acquired CSCs characteristics, enhanced cell proliferation, invasion. Ability. Third silence PRRX1 inhibits the apoptosis of A549 cells induced by cisplatin by interfering with caspase-3 apoptosis pathway: through the established PRRX1-shRNA-A549 cell model, the changes in apoptosis and apoptosis of A549 cells induced by cisplatin are observed after PRRX1 silencing, and the role of PRRX1 in the apoptosis of A549 cells induced by cisplatin is discussed. Methods: MTT test was used to detect the proliferation inhibition of cisplatin after PRRX1 silencing, and the optimal concentration of cisplatin was selected. Flow cytometry was used to detect cell cycle and apoptosis. Mitochondrial membrane potential was used to detect the changes in the epicardial potential of mitochondria..Western blot was used to detect apoptosis related protein (caspase-3, caspase-9,) The expression of cytochrome C and Apaf-1, the caspase-3 activator PAC-1 was added to the apoptosis channel.MTT experiment and the apoptosis experiment after PRRX1 silence, and the apoptosis channel of PRRX1 silencing interference was reversed. The results of 1.MTT experiment showed that the PRRX1 silence prevented the inhibition of cisplatin induced A549 cell proliferation, and the concentration of cisplatin was 2. 0 mu g/ml was the best concentration of.2. flow cytometry to detect cell apoptosis. After PRRX1 silencing, apoptosis was obviously inhibited by.3. flow cytometry. After PRRX1 silencing, cell cycle arrest in G2 phase.4. mitochondrial membrane potential detection results showed that after PRRX1 was silent, cisplatin was induced. The decrease of mitochondrial membrane potential was inhibited by inhibition of.5.PRRX1 silencing, apoptosis related protein Caspase-3, caspase-9, cytochrome C and Apaf-1 expression decreased.6. adding PAC-1 in MTT test and apoptosis experiment results showed that cell proliferation was obviously inhibited and cell apoptosis increased significantly. And interfere with the activation of Caspase-3 apoptosis channel, inhibit cisplatin induced apoptosis in A549 cells.

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 任忠梅,楊秋安,張玉晶;晚期非小細(xì)胞肺癌患者外周血TNF-α檢測的臨床意義[J];山東醫(yī)藥;2000年18期

2 許運(yùn)龍,郭昭揚(yáng),張?jiān)婆d,許賢榮;血管內(nèi)皮生長因子在人非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床研究[J];中華腫瘤雜志;2000年05期

3 王繼營,高珊,崔黎,黃麗春,宋立友;“雙異”聯(lián)合治療晚期非小細(xì)胞肺癌37例[J];中國肺癌雜志;2000年02期

4 田靜,李蓓蘭;老年晚期非小細(xì)胞肺癌的化療:一種新趨勢[J];中國肺癌雜志;2000年05期

5 張世雯,周清華;不同的分割方案與化療聯(lián)合治療非小細(xì)胞肺癌[J];中國肺癌雜志;2000年05期

6 胡發(fā)明,華波;血清白介素-10水平是晚期非小細(xì)胞肺癌病人的一項(xiàng)預(yù)后因素[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);2000年11期

7 于亮,王梅,張燦灼;微血管在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年04期

8 朱建英;預(yù)計(jì)2009年非小細(xì)胞肺癌藥物市場將達(dá)20億美元[J];國外醫(yī)藥(合成藥 生化藥 制劑分冊);2001年02期

9 張利偉,劉樹秋,陳海英,萬錦華;立體定向適形放療配合常規(guī)放療治療非小細(xì)胞肺癌近期療效分析[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2001年05期

10 王肇炎;晚期非小細(xì)胞肺癌的解救化療[J];腫瘤研究與臨床;2001年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 張新民;唐蜜;李代強(qiáng);;磷酸化酪氨酸蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

2 胡旭東;楊國仁;霍宗偉;方永存;陳鳴陸;;~(99m)Tc-MIBI SPECT顯像觀察非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥的研究[A];首屆全國腫瘤核醫(yī)學(xué)新技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

3 秦慶亮;熊海健;王愛;邊海蓉;盧振國;楊培英;朱斌耀;王蕓;;立體定向放射治療放療后復(fù)發(fā)非小細(xì)胞肺癌[A];2007第六屆全國放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

4 馮耘;萬歡英;高蓓莉;項(xiàng)軼;劉嘉琳;;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶二在非小細(xì)胞肺癌腫瘤生長和血管生成中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五屆全國胸部腫瘤及內(nèi)窺鏡學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

5 ;非小細(xì)胞肺癌術(shù)后輔助治療及一線治療[A];天津市抗癌協(xié)會(huì)肺癌專業(yè)委員會(huì)2011年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2011年

6 蔣峰;許林;史美祺;;1560例非小細(xì)胞肺癌患者多因素預(yù)后分析[A];第13屆全國肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

7 張華;;術(shù)前中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞比值對非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的影響[A];第13屆全國肺癌學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2013年

8 王子平;;老年晚期非小細(xì)胞肺癌治療思考[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

9 張沂平;;非小細(xì)胞肺癌個(gè)體化化療[A];2009年浙江省腫瘤學(xué)術(shù)年會(huì)暨腫瘤診治新進(jìn)展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

10 劉嘉湘;施志明;李和根;徐振曄;朱晏偉;趙麗紅;高虹;劉苓霜;朱惠蓉;張暉;;益肺抗瘤飲治療271例非小細(xì)胞肺癌臨床觀察[A];中醫(yī)藥優(yōu)秀論文選（下）[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 李穎;特羅凱對中國非小細(xì)胞肺癌患者效果佳[N];科技日報(bào);2007年

2 曉白;非小細(xì)胞肺癌研究獲重大進(jìn)展[N];人民日報(bào);2008年

3 記者 張文天;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)藥綜合醫(yī)療方案研究進(jìn)展順利[N];科技日報(bào);2009年

4 辛勇　張先穩(wěn);早期非小細(xì)胞肺癌的治療進(jìn)展[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2004年

5 記者高新軍;專家提出 建非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)臨床指南[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2009年

6 上海長海醫(yī)院呼吸科 夏陽 整理 邱志濤;非小細(xì)胞肺癌放虎歸山還是乘勝追擊[N];健康報(bào);2013年

7 記者 王丹;新研究揭示炎癥促非小細(xì)胞肺癌發(fā)生機(jī)制[N];健康報(bào);2014年

8 記者 李穎;凱美納成晚期非小細(xì)胞肺癌治療優(yōu)選方案[N];科技日報(bào);2014年

9 白京麗;非小細(xì)胞肺癌最佳治療方案[N];中國醫(yī)藥報(bào);2000年

10 ;表皮生長因子受體抑制劑在治療非小細(xì)胞肺癌中的作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 朱洪斌;PRRX1下調(diào)對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用及機(jī)制的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

2 白艷（Bai Sally）;整合素αvβ5合并EGFR檢測用于非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后評估的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

3 王筱恬;PLZF和DACH1的異常表達(dá)影響非小細(xì)胞肺癌發(fā)生與發(fā)展的分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

4 洪專;木犀草素治療EGF受體繼發(fā)性突變的非小細(xì)胞肺癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京大學(xué);2014年

5 張沛;ILT4在非小細(xì)胞肺癌中的作用及分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

6 王世坤;RBP2誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌和食管鱗癌表皮間質(zhì)化[D];山東大學(xué);2015年

7 趙世俊;~(18)F-FDG PET/CT在非小細(xì)胞肺癌預(yù)后評估中的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 邱晨;影響非小細(xì)胞肺癌手術(shù)后遠(yuǎn)期生存的相關(guān)因素分析[D];山東大學(xué);2015年

9 姜遠(yuǎn)矚;術(shù)前血液學(xué)指標(biāo)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

10 朱良明;STAT3及其靶基因?qū)Ψ切〖?xì)胞肺癌生物學(xué)行為調(diào)控機(jī)制的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];山東大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王勇;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的臨床意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

2 陳婷;非小細(xì)胞肺癌調(diào)強(qiáng)放射治療預(yù)后因素分析[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 王波;單向式全胸腔鏡下解剖性肺葉切除術(shù)治療早期非小細(xì)胞肺癌的學(xué)習(xí)曲線[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 施桂清;血管內(nèi)皮抑制素聯(lián)合放化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效及安全性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王靜;Eg5、Ki-67在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 覃建穎;IL-21和Tc1細(xì)胞在非小細(xì)胞肺癌患者外周血及癌灶中的變化及相互作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

7 張瑞;ⅢA-N2期非小細(xì)胞肺癌手術(shù)治療和放射治療的療效對比及相關(guān)預(yù)后因素的分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 石姣姣;基于多肽構(gòu)建抗腫瘤靶向藥物的應(yīng)用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

9 胡世霖;非小細(xì)胞肺癌中醫(yī)辨證分型與Napsin A、TTF-1在肺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

10 王婷婷;細(xì)胞因子活化殺傷細(xì)胞治療非小細(xì)胞肺癌臨床研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：1826316