本文選題：SIRT1 + PGC-1Α�。� 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景腦出血((intracerebralhemorrhage,ICH)是中老年人常見(jiàn)的急性腦血管疾病,具有高病死率和高致殘率,是我國(guó)腦血管疾病中死亡率最高的臨床類型。雖歷經(jīng)多年研究,但至今發(fā)病機(jī)制不甚清楚,治療手段有限。近年來(lái)研究表明,血腫周圍帶能量代謝障礙在腦出血繼發(fā)性損傷中起著重要的作用。腦出血后能量代謝原料的供應(yīng)中斷,引起能量代謝障礙能量物質(zhì)匱乏,啟動(dòng)腦出血后的損傷級(jí)聯(lián)反應(yīng)。線粒體作為細(xì)胞有氧呼吸和能量供應(yīng)的場(chǎng)所,其結(jié)構(gòu)和功能受損與腦出血所引起的能量代謝障礙密切相關(guān),同時(shí)線粒體功能障礙可啟動(dòng)線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。由此可見(jiàn)線粒體功能障礙及其誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可能是腦出血的重要致病機(jī)制,也有望成為治療腦出血的重要靶點(diǎn)。越來(lái)越多研究顯示,Silent information regulator 1(SIRT1)參與體內(nèi)線粒體功能障礙的修復(fù),并在多種神經(jīng)退行性疾病中具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。然而SIRT1在大鼠腦出血繼發(fā)性損傷的保護(hù)作用及其可能的調(diào)控機(jī)制目前尚不清楚。目的探討sirt1在大鼠腦出血繼發(fā)性損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用及其可能的相關(guān)調(diào)控機(jī)制。方法(1)構(gòu)建大鼠腦出血模型,于建模后腹腔注射sirt1激動(dòng)劑srt17205mg/kg/d直至建模后48h。觀察激動(dòng)sirt1對(duì)大鼠腦出血后神經(jīng)學(xué)功能、腦水腫含量、形態(tài)學(xué)的影響,并通過(guò)電子顯微鏡對(duì)血腫周圍線粒體形態(tài)學(xué)的觀察、線粒體atp和線粒體dna的測(cè)定評(píng)價(jià)激動(dòng)sirt1對(duì)大鼠腦出后繼發(fā)性線粒體功能障礙的神經(jīng)保護(hù)作用。采用real-timeqpcr和westernblot檢查sirt1在大鼠腦出血后核內(nèi)及總蛋白的表達(dá)情況。同時(shí)通過(guò)westernblot檢測(cè)ampk及p-ampk的表達(dá)情況。(2)于構(gòu)建大鼠腦出血模型后激動(dòng)sirt1,采用westernblot檢測(cè)pgc-1α核內(nèi)及總蛋白表達(dá)水平,線粒體電子傳遞鏈相關(guān)蛋白及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。同時(shí)采用免疫共沉淀(ip)檢測(cè)乙酰化pgc-1α的表達(dá)水平。(3)構(gòu)建一條化學(xué)合成的陰性對(duì)照sirna和三條pgc-1αsirna,建立大鼠腦出血模型,建模前24小時(shí)行側(cè)腦室注射sirna,同時(shí)于建模后腹腔注射srt1720。采用real-timeqpcr和westernblot檢測(cè)pgc-1αsirna干擾片段的干擾效率,并選出最有效的pgc-1αsirna干擾片段。檢測(cè)pgc-1α基因干擾后線粒體電子傳遞鏈相關(guān)蛋白及線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。(4)構(gòu)建一條化學(xué)合成陰性對(duì)照sirna和三條sirt1sirna,建立大鼠腦出血模型,建模前24小時(shí)行側(cè)腦室注射sirna。采用real-timeqpcr和westernblot檢測(cè)sirt1sirna干擾片段的干擾效率,并選出最有效的sirt1sirna干擾片段。觀察sirt1基因干擾后對(duì)大鼠腦出血后神經(jīng)學(xué)功能、腦水腫含量、形態(tài)學(xué)的影響。通過(guò)電子顯微鏡檢測(cè)血腫周圍線粒體形態(tài)變化,同時(shí)測(cè)定線粒體atp和線粒體dna含量。westernblot檢測(cè)pgc-1α、線粒體電子傳遞鏈相關(guān)蛋白及線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果(1)激動(dòng)sirt1明顯緩解大鼠腦出血后神經(jīng)功能缺失,減少大鼠腦含水量,減少神經(jīng)細(xì)胞損傷,緩解線粒體水腫,增加線粒體atp含量及線粒體dna含量。激動(dòng)sirt1可引起sirt1總蛋白、sirt1核內(nèi)蛋白及mrna表達(dá)增加。誘導(dǎo)pgc-1α、去乙�；痯gc-1α及線粒體電子傳遞鏈相關(guān)蛋白表達(dá)增高,而凋亡途徑相關(guān)蛋白表達(dá)降低。(2)干擾pgc-1α可抑制由srt1720誘導(dǎo)的pgc-1α及線粒體電子傳遞鏈相關(guān)蛋白表達(dá)增高,同時(shí)引起線粒體凋亡途徑相關(guān)蛋白表達(dá)進(jìn)一步增高。(3)干擾sirt1促進(jìn)大鼠腦出血后神經(jīng)功能缺失,增加大鼠腦含水量,增加神經(jīng)細(xì)胞損傷,增加線粒體水腫,減少線粒體atp含量及線粒體dna含量。同時(shí)減少sirt1蛋白及mrna表達(dá)水平,抑制pgc-1α及線粒體電子傳遞鏈相關(guān)蛋白表達(dá)增高,增加凋亡途徑相關(guān)蛋白表達(dá)。結(jié)論SIRT1通過(guò)恢復(fù)提高線粒體的生物合成(MB),減輕大鼠腦出血繼發(fā)性線粒體功能障礙及神經(jīng)細(xì)胞凋亡。此神經(jīng)保護(hù)作用可能是通過(guò)PGC-1α線粒體途徑實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.34

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本文編號(hào)：1748975