本文選題：Nlp　切入點：中心體　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：中心體相關(guān)蛋白Nlp是一個細胞周期和有絲分裂中重要的調(diào)控蛋白,其在中心體成熟、微管生發(fā)成核、有絲分裂過程中紡錘體形成、前中期/后期轉(zhuǎn)換、后期/末期轉(zhuǎn)換和胞質(zhì)分裂等過程中發(fā)揮著重要作用。Nlp表達異常導(dǎo)致有絲分裂異常和細胞周期紊亂,導(dǎo)致染色體異常分離及異倍體核型的產(chǎn)生,從而加劇染色體不穩(wěn)定性,在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。Nlp高表達能促進腫瘤發(fā)生,在多種人類癌癥如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、頭頸癌、腎癌、甲狀腺癌等中均存在高表達現(xiàn)象,且在肺癌中有明顯基因擴增現(xiàn)象。然而,異常低水平的Nlp也會導(dǎo)致異倍體核型,已有前期研究發(fā)現(xiàn)其在人淋巴瘤組織中呈低表達。人源Nlp轉(zhuǎn)基因小鼠模型不僅自發(fā)乳腺癌、卵巢癌、睪丸癌等多種腫瘤,而且對化學(xué)誘癌因素7,12-二甲基苯并(a)蒽(DMBA)和物理誘癌因素IR均更加敏感。體外培養(yǎng)其MEF細胞,不僅發(fā)現(xiàn)細胞生長與抗凋亡能力均增強,還發(fā)現(xiàn)廣泛的中心體擴增現(xiàn)象。盡管Nlp在有絲分裂中的功能和高表達促癌的研究已較為充分,而Nlp功能缺失對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響及其在有絲分裂調(diào)控之外的生物學(xué)功能還亟待研究。為深入研究Nlp基因功能與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,在本研究中,我們構(gòu)建了Nlp基因缺陷小鼠模型,發(fā)現(xiàn)其易自發(fā)淋巴瘤。我們對收集到的Nlp基因缺陷小鼠自發(fā)淋巴瘤標(biāo)本進行免疫組化實驗,結(jié)果顯示其為B細胞來源。我們進一步對Nlp基因缺陷小鼠進行血液學(xué)研究,結(jié)果顯示其各型造血細胞比例未受影響,但相對正常野生型小鼠,缺陷小鼠的造血重建B細胞能力較弱,并且骨髓中pre-B細胞和外周血中B細胞比例降低。隨后我們檢測了 Nlp基因缺陷小鼠中多種免疫細胞因子的分泌,結(jié)果顯示Nlp-/-小鼠骨髓中IL-13、IL-17和IL-21分泌量均顯著降低。研究結(jié)果提示Nlp基因缺陷除造成染色體不穩(wěn)定性之外,還可能通過調(diào)控免疫細胞因子影響B(tài)細胞發(fā)育,從而特異性自發(fā)B細胞淋巴瘤。另一方面,為研究Nlp基因缺陷小鼠在化學(xué)誘癌因素下的腫瘤發(fā)生,我們利用經(jīng)典的化學(xué)致癌物DMBA通過腹腔注射的方式構(gòu)建誘癌模型。對一共234只小鼠的誘癌實驗中,我們發(fā)現(xiàn),小鼠在DMBA誘導(dǎo)下發(fā)生肝癌、卵巢癌等多種腫瘤,Nlp基因缺陷小鼠肝癌發(fā)生率和肝癌惡性程度均高于野生型,其肝臟重量及器官系數(shù)、肝癌結(jié)節(jié)數(shù)、最大肝癌結(jié)節(jié)體積均高于野生型。Nlp基因缺陷引起的染色體不穩(wěn)定性導(dǎo)致小鼠肝臟對DMBA誘導(dǎo)腫瘤更為敏感。為尋找Nlp蛋白的新功能,我們通過查閱文獻并結(jié)合實驗室前期對Nlp功能的研究,此次還探究了 Nlp在細胞內(nèi)囊泡運輸系統(tǒng)中的作用。囊泡運輸系統(tǒng)是胞內(nèi)分子貨物的運輸網(wǎng)絡(luò),通過調(diào)控包裹著蛋白質(zhì)等其它分子的內(nèi)體在胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運,以完成蛋白分子的加工、降解及細胞的內(nèi)吞和外排等生物學(xué)過程。囊泡運輸系統(tǒng)不僅對細胞內(nèi)物質(zhì)和信息交流至關(guān)重要,還與細胞自噬、免疫應(yīng)答、細胞因子分泌等過程息息相關(guān)。本研究中,我們首先通過免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)Nlp與細胞晚期內(nèi)體標(biāo)志物L(fēng)AMP2共定位,提示其可能與晚期內(nèi)體相關(guān)。為研究Nlp對晚期內(nèi)體的調(diào)控,我們重點觀察Nlp與晚期內(nèi)體分選蛋白Rab7的相互作用。免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)Nlp不僅與Rab7在細胞漿內(nèi)存在共定位,而且Nlp可以促進Rab7與其下游效應(yīng)蛋白FYCO1相互作用,從而驅(qū)動晚期內(nèi)體沿微管正向移動。免疫共沉淀實驗也證實Nlp與Rab7和FYCOI確實存在相互作用,同時Nlp高表達可以促進Rab7與FYCO1結(jié)合。研究結(jié)果表明Nlp是一個新的囊泡運輸中晚期內(nèi)體轉(zhuǎn)運調(diào)控蛋白,Nlp與Rab7結(jié)合并調(diào)控其功能,影響晚期內(nèi)體轉(zhuǎn)運。本研究發(fā)現(xiàn)了 Nlp基因缺陷對腫瘤的發(fā)生發(fā)展有促進作用并探討了其發(fā)病機制,這對于中心體蛋白相關(guān)動物模型的研究有重要意義。另一方面,本研究首次發(fā)現(xiàn)Nlp是一個新的囊泡運輸調(diào)控蛋白,從而為中心體和囊泡運輸之間的關(guān)聯(lián)研究打開新的思路,對進一步完善胞內(nèi)物質(zhì)信息調(diào)控網(wǎng)絡(luò)有重要意義。
[Abstract]:Centrosome associated protein Nlp is a cell cycle and has an important regulatory protein in mitosis, the centrosome maturation, germinal microtubule nucleation, a spindle formation during mitosis, before the mid / late anaphase / telophase conversion, conversion and cytokinesis process play an important role in the abnormal expression of.Nlp in mitosis abnormal cell cycle disorder, lead to abnormal chromosome separation and aneuploid karyotype, thereby increasing chromosome instability in tumor development plays an important role in the high expression of.Nlp can promote tumorigenesis in many human cancers such as lung cancer, breast cancer, ovarian cancer, head and neck cancer, renal cell carcinoma, high expression phenomenon presence of thyroid cancer, and obvious gene amplification phenomenon in lung cancer. However, abnormally low levels of Nlp will lead to aneuploid karyotype, previous research has found that in human lymphoma tissues Low expression. Human Nlp transgenic mice model not only spontaneous breast cancer, ovarian cancer, testicular cancer and other tumors, and the chemical carcinogen 7,12- two methyl benzo (a) anthracene (DMBA) and physical factors were more sensitive to IR induced cancer. The MEF cells were cultured in vitro, not only found that cell growth and anti apoptosis the ability was enhanced, also found widespread phenomenon. Although Nlp centrosome amplification in mitosis function and high expression of cancer has been fully, and the loss of function of Nlp on the occurrence and development of tumor and its effect in the biological functions of mitotic regulation can also be studied. For the function of Nlp gene and tumor development study on the relationship between occurrence and development, in this study, we constructed the Nlp gene deficient mice, found its easy spontaneous lymphoma Nlp gene deficient mice. We collected the spontaneous lymphoma specimens were immunohistochemically experimental results. The display from B cell. We further in Nlp gene deficient mice were hematologic studies, the results showed that the proportion of each type of hematopoietic cells was not affected, but relatively normal wild-type mice and mice deficient in B cells of hematopoietic reconstitution ability is weak, and the B cells and pre-B cells in peripheral blood decreased. Then the percentage of bone marrow we examined the secretion of various cytokines in Nlp deficient mice, the results showed that IL-13 Nlp-/- mice bone marrow, IL-17 and IL-21 secretion were significantly decreased. The results suggest that the Nlp gene defects in addition to cause chromosomal instability, possibly through the regulation of immune cell factors affecting the development of B cells, and the specific spontaneous B cell lymphoma on the other hand, for the tumor in the chemical carcinogenesis factors of Nlp deficient mice, we use the classical chemical carcinogen DMBA by intraperitoneal injection. To construct the induced cancer model induced cancer. A total of 234 experiments on mice, we found that mice liver cancer induced by DMBA, ovarian cancer and other tumors, Nlp deficient mice liver cancer and liver malignancy rate was higher than the wild type, the liver weight and organ coefficient of liver nodules number, maximum liver nodules the volume is higher than that of wild type.Nlp gene defects caused by chromosomal instability in mice liver induced by DMBA tumor is more sensitive. For finding new functions of Nlp protein, we combined the previous research on the function of Nlp and through literature, this also explores Nlp global transportation system role in cell vesicle internal capsule. The transport system is the intracellular molecular cargo transportation network, through the regulation of proteins and other molecules wrapped in intracellular transport within the body, to complete the processing of the protein molecule, and endocytosis and degradation Efflux and other biological processes. Vesicular transport system not only on cellular material and information exchange is essential, and autophagy, immune response, cytokine secretion is closely related to the process. In this study, we first by immunofluorescence test showed that Nlp cells with late endosome marker co localization of LAMP2, suggesting that it may be associated with late within the body. For the regulation of Nlp on the late endosomes, we focus on the interaction effect of Nlp and the late endosomal sorting protein Rab7. Immunofluorescence test showed that Nlp and Rab7 not only in the cytoplasm were colocalized, and Nlp can promote the Rab7 and its downstream effector protein FYCO1 interactions, thus driving the late endosome along microtubule migration. Experiments also confirmed that Nlp and Rab7 and FYCOI exist the interaction of CO immunoprecipitation, and high expression of Nlp can promote the Rab7 combined with FYCO1. The results show that Nlp is a The new body transport vesicles transport in advanced regulatory proteins, Nlp binds to Rab7 and regulate its function and influence of the late endosomal transport. This study found Nlp gene defects on the development of the cancer promoting effect and discuss its pathogenesis, it is important to study the centrosomal protein related animal model. On the other on the one hand, this is the first study found that Nlp is a new regulation of vesicle transport protein, which opens up a new way of association study between centrosome and vesicle transport, to further improve the regulatory network of intracellular material information has important significance.

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R730.2

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8 袁波;;一種罕見癌綜合征的基因缺陷[J];國外醫(yī)學(xué)情報;1991年14期

9 馮松魁;;心臟病與基因缺陷[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1987年02期

10 林森;;三維數(shù)碼成像能及早診斷出兒童基因缺陷[J];健康大視野;2007年11期

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5 戴蘭;趙小娟;白霞;董寧征;王兆鉞;阮長耿;;1例血小板無力癥家系分子缺陷的初步研究[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

6 萬輝;萬謨彬;宋玉;薛建亞;方超平;;攜帶IFN基因的X基因缺陷的HBV DNA質(zhì)粒的構(gòu)建及其在HepG_2細胞中的表達[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

7 梁華;蔡夢茵;嚴(yán)晉華;翁建平;;MODY家系HNF-4α基因啟動子P2區(qū)以及Kir6．2基因缺陷的分子篩查[A];2006年中華醫(yī)學(xué)會糖尿病分會第十次全國糖尿病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

8 黃娟;袁建輝;柯躍斌;;hOGG1和hMTH1基因缺陷細胞模型構(gòu)建及二者作用關(guān)聯(lián)性初步探討[A];全國自由基醫(yī)學(xué)與毒理學(xué)學(xué)術(shù)交流大會論文（摘要）集[C];2011年

9 楊宇豐;;Drosophila models of Parkinson's disease[A];中國遺傳學(xué)會模式生物與人類健康研討會會議論文集[C];2010年

10 朱月春;汪寧;;云南PKU患者PAH基因外顯子6、7、11突變的分析[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

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4 記者　劉向;甲狀腺疾病由基因缺陷造成[N];新華每日電訊;2005年

5 郭輯;甲狀腺疾病由基因缺陷造成[N];經(jīng)濟日報;2006年

6 馮衛(wèi)東　劉霞;基因缺陷修正首次在干細胞中實現(xiàn)[N];科技日報;2009年

7 劉向;基因缺陷使甲狀腺發(fā)病[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

8 記者 李嬋;“喝酒上臉”小心患癌[N];北京科技報;2011年

9 清;耳聾與CX26基因缺陷有關(guān)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

10 聞訊;導(dǎo)致冠心病的罕見基因缺陷被發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

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2 張玉琳;WAS基因缺陷小鼠MCMV急性感染模型的建立及感染特點[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

3 張曉東;免疫基因療法對轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤治療作用的基礎(chǔ)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2003年

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本文編號：1718300