本文選題：乳腺癌　切入點(diǎn)：預(yù)后預(yù)測　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景:乳腺癌是女性最常罹患的惡性腫瘤,雖然隨著早期篩查和治療方案的進(jìn)步其發(fā)病率和致死率較多年前已有所下降,但其仍然是威脅著女性身心健康主要疾病。乳腺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)基因的研究有助于發(fā)現(xiàn)新的預(yù)后預(yù)測標(biāo)志和治療靶點(diǎn)。近些年許多研究表明,miRNA的改變對于乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此,miRNA是乳腺癌早期診斷和治療及患者預(yù)后預(yù)測的潛在標(biāo)志物,更有望成為乳腺癌患者應(yīng)用分子靶向治療的潛在靶點(diǎn)。目的:通過檢測mIR-320在乳腺癌中的表達(dá)水平結(jié)合臨床病例研究探討miR-320與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及其作為分子標(biāo)志物預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后的臨床價值。通過細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)探討miR-320對乳腺癌生物學(xué)行為的影響,進(jìn)一步闡明miR-320調(diào)控乳腺癌細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制。方法:1.采用RT-qPCR方法檢測180例乳腺癌組織及其中15例配對的癌旁正常乳腺組織miR-320表達(dá)水平,配對t檢驗(yàn)用來比較miR-320在乳腺癌組織及配對的正常組織中的表達(dá)水平,卡方檢驗(yàn)分析乳腺癌組織中miR-320表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理因素的關(guān)系,Kaplan-Meier生存曲線分析miR-320表達(dá)水平與乳腺癌患者三年無病生存(3-year Disease-Free Survival,DFS)和三年總生存(3-year Overall Survival,OS)的關(guān)系,采用Cox比例風(fēng)險回歸模型分析miR-320作為分子標(biāo)志物的預(yù)后預(yù)測價值;2.采用實(shí)時RT-qPCR方法檢測不同乳腺癌細(xì)胞系中miR-320的表達(dá)水平,分析miR-320表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為和惡性程度的關(guān)系;3.外源轉(zhuǎn)染miR-320 mimcs/inhibitor分別使乳腺癌細(xì)胞過表達(dá)miR-320和沉默內(nèi)源性miR-320表達(dá),通過MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察miR-320對乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響,通過Transwell實(shí)驗(yàn)觀察miR-320對乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-320表達(dá)對乳腺癌細(xì)胞周期分布和凋亡的影響;4.通過生物信息學(xué)預(yù)測miR-320下游調(diào)控的靶基因,通過和雙熒光酶報告系統(tǒng)結(jié)合定點(diǎn)突變技術(shù)分析miR-320對下游潛在靶基因SOX4的調(diào)節(jié)活性,通過RT-qPCR和Western blot檢測miR-320對SOX4表達(dá)水平的影響;5.通過RT-qPCR和Western blot檢測miR-320/SOX4表達(dá)對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)標(biāo)志物E-cadherin和Vimentin表達(dá)水平。結(jié)果:1.miR-320在乳腺癌組織中的表達(dá)低于配對癌旁正常組織(P0.001);miR-320低表達(dá)乳腺癌患者有較高的臨床分期(P=0.043);miR-320低表達(dá)的乳腺癌患者較高表達(dá)患者預(yù)后差(P=0.025),且miR-320表達(dá)水平是預(yù)測乳腺癌患者3年無病生存(disease-free survival,DFS)的獨(dú)立預(yù)測因素;2.miR-320在惡性程度較低的乳腺癌細(xì)胞MCF7和T47D中高表達(dá),在惡性程度較高的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MDA-MB-468和BT549中低表達(dá);3.在MDA-MB-231細(xì)胞中過表達(dá)miR-320能抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力,并促進(jìn)凋亡,在MCF7細(xì)胞中沉默miR-320表達(dá)能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力。流式細(xì)胞術(shù)顯示在MDA-MB-231細(xì)胞中過表達(dá)miR-320能導(dǎo)致細(xì)胞周期G1期阻滯,在MCF7細(xì)胞中沉默miR-320表達(dá)能上調(diào)S期細(xì)胞比例;4.生物信息學(xué)分析miR-320下游調(diào)控的靶基因,結(jié)果顯示SOX4 3’-UTR區(qū)含有miR-320潛在的結(jié)合位點(diǎn);雙熒光報告系統(tǒng)證明miR-320能降低SOX43’-UTR的活性;進(jìn)一步結(jié)合位點(diǎn)突變技術(shù)發(fā)現(xiàn),miR-320不能降低miR-320結(jié)合位點(diǎn)突變的SOX4 3’-UTR活性,在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-320能降低SOX4 m RNA和蛋白的表達(dá)水平,在MCF7乳腺癌細(xì)胞中降表達(dá)miR-320能上調(diào)SOX4 m RNA和蛋白的表達(dá)水平;5.在MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞中過表達(dá)miR-320能下調(diào)間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin,上調(diào)上皮標(biāo)志物E-cadherin(CDH1)表達(dá),在MCF7乳腺癌細(xì)胞中降表達(dá)miR-320能下調(diào)上皮標(biāo)志物E-cadherin,上調(diào)間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin表達(dá);6.TGF-β1作用乳腺癌細(xì)胞系MCF7后,miR-320表達(dá)下調(diào)。此外,過表達(dá)miR-320抑制MCF7乳腺癌細(xì)胞系中TGF-β1導(dǎo)致的促侵襲作用。結(jié)論:1.miR-320表達(dá)下調(diào)是乳腺癌患者早發(fā)轉(zhuǎn)移和分化差的分子標(biāo)志物,且與乳腺癌患者預(yù)后相關(guān),但不是預(yù)后預(yù)測的獨(dú)立因素;2.miR-320通過抑制SOX4表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞增殖和侵襲能力;3.miR-320通過調(diào)控SOX4表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞EMT表型。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1686572