本文選題：糖皮質(zhì)激素　切入點(diǎn)：系統(tǒng)性紅斑狼瘡　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文

【摘要】：研究背景系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種免疫性疾病,涉及復(fù)雜的炎癥性反應(yīng),研究表明SLE可致早發(fā)動脈粥樣硬化,這可能與疾病本身及藥物治療有關(guān)。目前糖皮質(zhì)激素為主要治療藥物之一。大量臨床研究表明糖皮質(zhì)激素具有致動脈粥樣硬化的作用,這與糖皮質(zhì)激素所致的高血壓、血脂異常、糖耐量異常及肥胖等代謝異常有關(guān)。在血脂代謝方面,研究發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素通過降低肝細(xì)胞表明LDLR的方式增高LDL水平。本課題組從前期工作中得出:SLE急性期患者血清前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)較穩(wěn)定期患者顯著升高。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一種與低密度脂蛋白代謝緊密相關(guān)的蛋白,它通過分解肝細(xì)胞表明低密度脂蛋白受體(LDLR)的方式減少LDL的清除,從而增加循環(huán)內(nèi)LDL水平,促進(jìn)動脈粥樣硬化。國內(nèi)外有研究表明小檗堿不僅能通過細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)的途徑促進(jìn)LDLR表達(dá),還能通過降低PCSK9的方式增加LDLR水平,從而起到抗動脈粥樣硬化作用。本實(shí)驗(yàn)選用于中國風(fēng)濕信息共享平臺登記的北京協(xié)和醫(yī)院SLE病人,進(jìn)行病歷資料采集及血清PCSK9水平檢測,并應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。同時(shí)通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn),探究糖皮質(zhì)激素對LDL代謝及PCSK9的影響及其機(jī)制。最后于探究小檗堿對PCSK9的抑制作用。第一部分臨床SLE患者中糖皮質(zhì)激素對血脂及PCSK9的影響研究目的分析不同激素使用量對SLE患者血清TC、TG、HDL、LDL的水平的影響。并探究與PCSK9可能相關(guān)的動脈粥樣硬化危險(xiǎn)因素。研究方法從中國風(fēng)濕信息共享平臺北京協(xié)和醫(yī)院系統(tǒng)中選取對67名年齡處于20-45歲系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者進(jìn)行分析,其中近1月內(nèi)未使用或低劑量使用激素(0.5mg/kg/d潑尼松)者33人,中、大劑量使用者(≥0.5mg/kg/d潑尼松)者34人,通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定患者血清PCSK9水平,同時(shí)從中國風(fēng)濕信息共享平臺系統(tǒng)中查詢患者病歷資料,通過SPSS軟件對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析比較。最后選取動脈粥樣硬化相關(guān)的指標(biāo)與PCSK9進(jìn)行逐步多元線性回歸分析。研究結(jié)果1、近1月內(nèi)使用中、高劑量糖皮質(zhì)激素狼瘡患者總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白水平較未使用或低劑量使用者有顯著升高,而HDL無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2、近1月內(nèi)使用中、高劑量糖皮質(zhì)激素狼瘡患者血清PCSK9水平較未使用或低劑量使用者有顯著升高(455.67±25.62 vs 309.27±11.98 ng/ml)3、經(jīng)多元逐步線性回歸分析,影響PCSK9水平的因素為SLEDAI評分、平均每日糖皮質(zhì)激素使用量和舒張壓。研究結(jié)論1、大劑量激素使用可使SLE患者總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高。2、PCSK9水平可能受疾病活動度、血壓及每日糖皮質(zhì)激素使用量的影響。第二部分體外實(shí)驗(yàn)中探究糖皮質(zhì)激素對LDLR及PCSK9的作用機(jī)制研究目的從細(xì)胞水平上探究糖皮質(zhì)激素對LDLR及PCSK9的作用機(jī)制和吞噬LDL能力的影響。研究方法復(fù)蘇并傳代培養(yǎng)肝癌HepG2細(xì)胞,待傳至所需細(xì)胞量時(shí)進(jìn)行藥物干預(yù)。將細(xì)胞消化,鋪至6孔板及12孔板,待24h貼壁后使用乏脂血清(LPDS)培養(yǎng)基進(jìn)行饑餓化處理8h。之后加入不同濃度氫化可的松至HepG2細(xì)胞,24h后部分細(xì)胞提取RNA,通過RT-Q-PCR相對定量的方法測定不同基因mRNA相對表達(dá)量。另一部分細(xì)胞加入Dil熒光標(biāo)記的LDL(Dil-LDL)避光孵育5小時(shí),通過熒光顯微鏡檢測吞噬情況,后將細(xì)胞消化下,通過流式細(xì)胞儀檢測不同處理組的平均熒光強(qiáng)度。研究結(jié)果1、在0-200ng/ml的藥物范圍內(nèi),氫化可的松使HepG2細(xì)胞LDLR mRNA表達(dá)下降,且呈濃度和時(shí)間依賴性。2、在0-200ng/ml的藥物范圍內(nèi),隨氫化可的松濃度升高,HepG2細(xì)胞吞噬LDL能力逐漸下降。3、在0-200ng/ml的藥物范圍內(nèi),氫化可的松使HepG2細(xì)胞PCSK9 mRNA表達(dá)下降。研究結(jié)論1、氫化可的松在轉(zhuǎn)錄水平減少LDLR表達(dá),同時(shí)降低吞噬LDL能力。2、氫化可的松在轉(zhuǎn)錄水平降低PCSK9表達(dá)。第三部分在體外實(shí)驗(yàn)中探究小檗堿對LDL及PCSK9的影響機(jī)制研究目的從細(xì)胞水平上探究小檗堿對PCSK9影響的機(jī)制,同時(shí)研究小檗堿對糖皮質(zhì)激素引起LDL代謝紊亂的調(diào)節(jié)作用。研究方法復(fù)蘇并傳代培養(yǎng)肝癌HepG2細(xì)胞,待傳至所需細(xì)胞量時(shí)進(jìn)行藥物干預(yù)。將細(xì)胞消化,鋪至6孔板及12孔板,待24h貼壁后使用乏脂血清(LPDS)培養(yǎng)基進(jìn)行饑餓化處理8h。之后加入不同濃度小檗堿至HepG2細(xì)胞,24h后部分細(xì)胞提取RNA,通過RT-Q-PCR相對定量的方法測定不同基因mRNA相對表達(dá)量。另一部分細(xì)胞加入Dil熒光標(biāo)記的LDL(Dil-LDL)避光孵育5小時(shí),通過熒光顯微鏡檢測吞噬情況,后將細(xì)胞消化下,通過流式細(xì)胞儀檢測不同處理組的平均熒光強(qiáng)度。在此基礎(chǔ)上再將細(xì)胞鋪板,將不同濃度小檗堿及氫化可的松共同加至HepG2細(xì)胞中,后測定相關(guān)mRNA表達(dá)及Dil-LDL平均熒光強(qiáng)。研究結(jié)果1、小檗堿使HepG2細(xì)胞LDLR mRNA表達(dá)升高,且呈濃度和時(shí)間依賴性。2、小檗堿使HepG2細(xì)胞吞噬LDL能力增強(qiáng)。3、小檗堿使HepG2細(xì)胞PCSK9 mRNA表達(dá)下降,且呈濃度和時(shí)間依賴性。4、小檗堿使PCSK9上游調(diào)控因子SREBP-2及HNF-1 mRNA表達(dá)降低。5、氫化可的松降低HepG2細(xì)胞LDLR mRNA表達(dá)降低,而小檗堿可使這種作用減弱。6、氫化可的松使HepG2細(xì)胞PCSK9 mRNA表達(dá)降低,在次基礎(chǔ)上小檗堿可使這種升高作用進(jìn)一步增強(qiáng)。7、氫化可的松使HepG2細(xì)胞吞噬LDL功能減弱,而小檗堿可使這種作用減弱。研究結(jié)論1、小檗堿可能通過下調(diào)PCSK9上游因子SREBP-2及HNF-1的方式降低PCSK9 表達(dá)。,2、小檗堿從轉(zhuǎn)錄水平上增加LDLR表達(dá),同時(shí)增強(qiáng)LDLR吞噬LDL的功能。3、小檗堿使氫化可的松降低LDLR效應(yīng)減弱并增強(qiáng)其降低PCSK9的效應(yīng)。
[Abstract]:In this study , the effects of glucocorticoid on serum TC , TG , HDL and LDL in patients with SLE were studied . The effects of berberine on LDL and PCSK9 in HepG2 cells were determined by RT - Q - PCR . and 2 , berberine increases the expression of LDLR from the transcription level , and simultaneously enhances the function of the LDLR to swallow LDL , and the berberine can reduce the LDLR effect and enhance the effect of PCSK9 .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R593.241

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本文編號：1683152