本文選題：晚期氧化蛋白產(chǎn)物　切入點(diǎn)：痛覺過(guò)敏　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：痛覺過(guò)敏是一種由神經(jīng)系統(tǒng)受損或者功能障礙引起的機(jī)體對(duì)疼痛刺激的感覺閾值下降,輕微刺激便引起疼痛感覺的臨床常見癥狀。痛覺過(guò)敏明顯降低患者的生活質(zhì)量,帶給患者乃至整個(gè)社會(huì)巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。痛覺過(guò)敏的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜,其中最主要的致病因素就是體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)失代償后產(chǎn)生的活性氧自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)。晚期氧化蛋白產(chǎn)物(Advanced Oxidation Protein Products,AOPPs)在體內(nèi)的最主要來(lái)源是血漿白蛋白與氧化應(yīng)激所形成的含氯氧化物反應(yīng)而成,是一類含有二酪氨酸的蛋白產(chǎn)物。AOPPs不僅被認(rèn)為是氧化應(yīng)激導(dǎo)致蛋白質(zhì)損傷的標(biāo)記物,同時(shí)也是引起氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)。目前尚無(wú)相關(guān)研究表明AOPPs是否參與痛覺過(guò)敏病理生理過(guò)程。本研究旨在觀察AOPPs是否會(huì)誘導(dǎo)SD大鼠出現(xiàn)痛覺過(guò)敏并探究其中的分子機(jī)制。為了驗(yàn)證AOPPs參與SD大鼠痛覺過(guò)敏模型,本研究利用經(jīng)典的完全弗氏佐劑(Complete Freund' sAdjuvant,CFA)誘導(dǎo)SD大鼠痛覺過(guò)敏動(dòng)物模型,通過(guò)氯胺-T法檢測(cè)SD大鼠血漿中AOPPs的含量為對(duì)照組SD大鼠的1.6倍。此外,給予正常SD大鼠靜脈注射體外配制的AOPPs溶液,利用電子Von Frey測(cè)痛儀檢測(cè)SD大鼠機(jī)械縮足閾值明顯下降。對(duì)AOPPs誘導(dǎo)痛覺過(guò)敏的SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal Root Ganglia,DRG)組織進(jìn)行免疫熒光染色和蛋白免疫印跡檢測(cè),結(jié)果表明AOPPs明顯上調(diào)組織中NADPH氧化酶1(Nox1)、NADPH氧化酶 4(Nox4)、瞬時(shí)感受器電位(Transient Receptor Potential,TRP)Vanilloid 1 通道(TRPV1)和降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin Gene-Related Peptide,CGRP)的表達(dá)。將原代培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞作為體外研究的對(duì)象,利用DCFH-DA熒光染料通過(guò)多功能酶標(biāo)儀和激光共聚焦掃描顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AOPPs誘導(dǎo)DRG神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生大量的ROS,并且通過(guò)小干擾RNA技術(shù),發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)大量的ROS來(lái)自于AOPPs對(duì)細(xì)胞中Noxl蛋白和Nox4蛋白的激活。除此之外,利用細(xì)胞蛋白免疫印跡的方法發(fā)現(xiàn)AOPPs可以明顯激活TRPV1離子通道,并且促進(jìn)DRG神經(jīng)元細(xì)胞合成和釋放大量神經(jīng)肽類物質(zhì)CGRP,同時(shí)引起鈣離子大量流入DRG神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)中,擾亂細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)AOPPs在CFA誘導(dǎo)痛覺過(guò)敏的大鼠血漿中明顯升高,并且成功地建立了體外配制的AOPPs誘導(dǎo)大鼠痛覺過(guò)敏動(dòng)物模型。通過(guò)一系列體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),明確了 AOPPs通過(guò)激活Noxl和Nox4蛋白產(chǎn)生大量的ROS,進(jìn)一步激活TRPV1離子通道,從而導(dǎo)致DRG神經(jīng)元細(xì)胞分泌CGRP和大量鈣離子流入細(xì)胞質(zhì)內(nèi),最終導(dǎo)致痛覺過(guò)敏發(fā)生。
[Abstract]:Hyperalgesia is a common clinical symptom of pain stimulation caused by nervous system damage or dysfunction, which is caused by a decrease in the body's threshold for pain stimulation. Hyperalgesia can significantly reduce the quality of life of patients. Bring patients and even the whole society a huge economic and mental burden. The pathogenesis of hyperalgesia is very complicated. The main pathogenic factor is reactive Oxygen species produced by oxidative stress decompensation in vivo. The main source of advanced Oxidation Protein products AOPPs in vivo is plasma albumin and oxidative stress. Formed by the reaction of chlorinated oxides, AOPPs are a class of protein products containing dityrosine. AOPPs are not only considered to be markers of protein damage caused by oxidative stress. At the same time, it is also an important medium to cause oxidative stress and inflammation. There is no relevant study on whether AOPPs is involved in the pathophysiological process of hyperalgesia. This study was designed to observe whether AOPPs could induce hyperalgesia in SD rats. To investigate the molecular mechanisms involved, AOPPs was involved in a hyperalgesia model in SD rats. In this study, the hyperalgesia animal model of SD rats was induced by the classical complete Freundte Freundte's Adjuvant CFA. the plasma AOPPs content in SD rats was measured by chloramine-T method, which was 1.6 times as high as that in the control group. Normal SD rats were given intravenous injection of AOPPs solution prepared in vitro, The mechanical foot contraction threshold of SD rats was detected by electronic Von Frey. The tissue of dorsal root ganglion of SD rats induced by AOPPs was detected by immunofluorescence staining and Western blotting. The results showed that AOPPs upregulated the expression of NADPH oxidase 1 (Nox1), transient Receptor potential (TRP) and calcitonin Gene-Related Peptidee (CGRP1) in tissues. The primary cultured neurons of dorsal root ganglion (DRG) were used as primary cultured neurons of dorsal root ganglion (DRG). Object of study in vitro, DCFH-DA fluorescence dye was used to detect ros in DRG neurons by multifunctional enzyme labeling instrument and confocal laser scanning microscope. AOPPs induced a large number of ROSs in DRG neurons, and small interference RNA technique was used to detect ROSs in DRG neurons. It was found that a large amount of ROS in cells was derived from the activation of Noxl protein and Nox4 protein by AOPPs. In addition, we found that AOPPs could activate TRPV1 ion channel by cell Western blot. It also promotes the synthesis and release of a large number of neuropeptides from DRG neuron cells, and causes calcium ions to flow into the cytoplasm of DRG neurons in large quantities, thus disrupting the steady-state of the cells. In this study, we found that AOPPs increased significantly in the plasma of CFA induced hyperalgesia rats, and successfully established an in vitro AOPPs induced hyperalgesia animal model in rats. It is clear that AOPPs activates a large number of ros by activating Noxl and Nox4 proteins, and further activates the TRPV1 ion channel, which leads to the release of CGRP and a large number of calcium ions into the cytoplasm by DRG neurons, leading to hyperalgesia.
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R402

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本文編號(hào)：1601065