本文選題：晚期氧化蛋白產物　切入點：痛覺過敏　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：痛覺過敏是一種由神經系統(tǒng)受損或者功能障礙引起的機體對疼痛刺激的感覺閾值下降,輕微刺激便引起疼痛感覺的臨床常見癥狀。痛覺過敏明顯降低患者的生活質量,帶給患者乃至整個社會巨大的經濟和精神負擔。痛覺過敏的發(fā)病機制十分復雜,其中最主要的致病因素就是體內氧化應激反應失代償后產生的活性氧自由基(Reactive Oxygen Species,ROS)。晚期氧化蛋白產物(Advanced Oxidation Protein Products,AOPPs)在體內的最主要來源是血漿白蛋白與氧化應激所形成的含氯氧化物反應而成,是一類含有二酪氨酸的蛋白產物。AOPPs不僅被認為是氧化應激導致蛋白質損傷的標記物,同時也是引起氧化應激和炎癥反應的重要介質。目前尚無相關研究表明AOPPs是否參與痛覺過敏病理生理過程。本研究旨在觀察AOPPs是否會誘導SD大鼠出現(xiàn)痛覺過敏并探究其中的分子機制。為了驗證AOPPs參與SD大鼠痛覺過敏模型,本研究利用經典的完全弗氏佐劑(Complete Freund' sAdjuvant,CFA)誘導SD大鼠痛覺過敏動物模型,通過氯胺-T法檢測SD大鼠血漿中AOPPs的含量為對照組SD大鼠的1.6倍。此外,給予正常SD大鼠靜脈注射體外配制的AOPPs溶液,利用電子Von Frey測痛儀檢測SD大鼠機械縮足閾值明顯下降。對AOPPs誘導痛覺過敏的SD大鼠背根神經節(jié)(Dorsal Root Ganglia,DRG)組織進行免疫熒光染色和蛋白免疫印跡檢測,結果表明AOPPs明顯上調組織中NADPH氧化酶1(Nox1)、NADPH氧化酶 4(Nox4)、瞬時感受器電位(Transient Receptor Potential,TRP)Vanilloid 1 通道(TRPV1)和降鈣素基因相關肽(Calcitonin Gene-Related Peptide,CGRP)的表達。將原代培養(yǎng)的背根神經節(jié)神經元細胞作為體外研究的對象,利用DCFH-DA熒光染料通過多功能酶標儀和激光共聚焦掃描顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)AOPPs誘導DRG神經元細胞產生大量的ROS,并且通過小干擾RNA技術,發(fā)現(xiàn)細胞內大量的ROS來自于AOPPs對細胞中Noxl蛋白和Nox4蛋白的激活。除此之外,利用細胞蛋白免疫印跡的方法發(fā)現(xiàn)AOPPs可以明顯激活TRPV1離子通道,并且促進DRG神經元細胞合成和釋放大量神經肽類物質CGRP,同時引起鈣離子大量流入DRG神經元細胞質中,擾亂細胞的穩(wěn)態(tài)。綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)AOPPs在CFA誘導痛覺過敏的大鼠血漿中明顯升高,并且成功地建立了體外配制的AOPPs誘導大鼠痛覺過敏動物模型。通過一系列體內外實驗,明確了 AOPPs通過激活Noxl和Nox4蛋白產生大量的ROS,進一步激活TRPV1離子通道,從而導致DRG神經元細胞分泌CGRP和大量鈣離子流入細胞質內,最終導致痛覺過敏發(fā)生。
[Abstract]:Hyperalgesia is a common clinical symptom of pain stimulation caused by nervous system damage or dysfunction, which is caused by a decrease in the body's threshold for pain stimulation. Hyperalgesia can significantly reduce the quality of life of patients. Bring patients and even the whole society a huge economic and mental burden. The pathogenesis of hyperalgesia is very complicated. The main pathogenic factor is reactive Oxygen species produced by oxidative stress decompensation in vivo. The main source of advanced Oxidation Protein products AOPPs in vivo is plasma albumin and oxidative stress. Formed by the reaction of chlorinated oxides, AOPPs are a class of protein products containing dityrosine. AOPPs are not only considered to be markers of protein damage caused by oxidative stress. At the same time, it is also an important medium to cause oxidative stress and inflammation. There is no relevant study on whether AOPPs is involved in the pathophysiological process of hyperalgesia. This study was designed to observe whether AOPPs could induce hyperalgesia in SD rats. To investigate the molecular mechanisms involved, AOPPs was involved in a hyperalgesia model in SD rats. In this study, the hyperalgesia animal model of SD rats was induced by the classical complete Freundte Freundte's Adjuvant CFA. the plasma AOPPs content in SD rats was measured by chloramine-T method, which was 1.6 times as high as that in the control group. Normal SD rats were given intravenous injection of AOPPs solution prepared in vitro, The mechanical foot contraction threshold of SD rats was detected by electronic Von Frey. The tissue of dorsal root ganglion of SD rats induced by AOPPs was detected by immunofluorescence staining and Western blotting. The results showed that AOPPs upregulated the expression of NADPH oxidase 1 (Nox1), transient Receptor potential (TRP) and calcitonin Gene-Related Peptidee (CGRP1) in tissues. The primary cultured neurons of dorsal root ganglion (DRG) were used as primary cultured neurons of dorsal root ganglion (DRG). Object of study in vitro, DCFH-DA fluorescence dye was used to detect ros in DRG neurons by multifunctional enzyme labeling instrument and confocal laser scanning microscope. AOPPs induced a large number of ROSs in DRG neurons, and small interference RNA technique was used to detect ROSs in DRG neurons. It was found that a large amount of ROS in cells was derived from the activation of Noxl protein and Nox4 protein by AOPPs. In addition, we found that AOPPs could activate TRPV1 ion channel by cell Western blot. It also promotes the synthesis and release of a large number of neuropeptides from DRG neuron cells, and causes calcium ions to flow into the cytoplasm of DRG neurons in large quantities, thus disrupting the steady-state of the cells. In this study, we found that AOPPs increased significantly in the plasma of CFA induced hyperalgesia rats, and successfully established an in vitro AOPPs induced hyperalgesia animal model in rats. It is clear that AOPPs activates a large number of ros by activating Noxl and Nox4 proteins, and further activates the TRPV1 ion channel, which leads to the release of CGRP and a large number of calcium ions into the cytoplasm by DRG neurons, leading to hyperalgesia.
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R402

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張楊;參與機械性痛覺過敏的皮層結構[J];中國疼痛醫(yī)學雜志;2005年05期

2 呂興業(yè);;痛覺過敏與其發(fā)生機制的相關因子[J];醫(yī)學綜述;2011年01期

3 劉高明;;1例麻醉手術后痛覺過敏患者的護理[J];當代護士(專科版);2011年05期

4 苗傳龍,王紹;痛覺過敏的中樞機理[J];白求恩醫(yī)科大學學報;1997年05期

5 唐有為,陳淑紅;人體皮膚繼發(fā)痛覺過敏發(fā)生機制的探討[J];國外醫(yī)學(中醫(yī)中藥分冊);1997年01期

6 張粒子;張婧;姜珊;徐世元;;α_2腎上腺素受體激動劑防治術后痛覺過敏的相關機制[J];實用醫(yī)學雜志;2014年08期

7 王捍國,肖明振,劉軍;神經生長因子與痛覺過敏[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2000年06期

8 俞紅麗;于布為;;麻醉手術后痛覺過敏的研究進展[J];上海醫(yī)學;2009年06期

9 呂興業(yè);;痛覺過敏的研究進展[J];河北醫(yī)藥;2011年15期

10 李桐楠;降鈣素基因相關肽在脊髓痛覺信息傳遞及痛覺過敏產生中的作用[J];河北醫(yī)科大學學報;2003年03期

相關會議論文 前10條

1 方軍;;抑制痛覺過敏完善術后鎮(zhèn)痛[A];2012年浙江省疼痛學學術年會論文集[C];2012年

2 張?zhí)靷?馮宇峰;廖瑞哲;劉風;;辣椒素與痛覺過敏[A];2008年第七次華東六省一市麻醉學學術會議暨浙江省麻醉學術年會論文匯編（上冊）[C];2008年

3 魯顯福;官學海;張紅星;武進茹;袁艷;鮑琪;凌地洋;曹君利;;外周ephrinBs-EphBs信號激活參與PI3K介導的痛行為[A];全國第一次麻醉藥理學術會議暨中國藥理學會麻醉藥理專業(yè)委員會籌備會論文匯編[C];2010年

4 薛慶生;于布為;;阿片類藥物鎮(zhèn)痛治療的困惑-痛覺過敏作用及其機制研究進展[A];2006年中華醫(yī)學會全國麻醉學術年會知識更新講座[C];2006年

5 康芳;王瑞婷;方才;楊佳;;小劑量氯胺酮預防瑞芬太尼麻醉后痛覺過敏的臨床探討[A];2008年第七次華東六省一市麻醉學學術會議暨浙江省麻醉學術年會論文匯編（下冊）[C];2008年

6 孔微微;李軍;曹紅;連慶泉;宋學軍;胡三覺;;小鼠背根節(jié)慢性壓迫致機械熱痛覺過敏和觸誘發(fā)痛模型的建立[A];浙江省醫(yī)學會疼痛學分會成立大會暨首屆浙江省醫(yī)學會疼痛學分會學術年會論文匯編[C];2011年

7 雷洪伊;蔡清香;徐世元;張慶國;許睿;;脊髓磷酸化ERK在大鼠切口痛痛覺過敏中的作用[A];第十五次長江流域麻醉學學術年會暨2010年中南六省麻醉學學術年會暨2010年湖北省麻醉學學術年會論文集[C];2010年

8 張曉琴;彭章龍;于布為;;Non-NMDA受體在術后痛覺過敏中作用的研究進展[A];2008年第七次華東六省一市麻醉學學術會議暨浙江省麻醉學術年會論文匯編（上冊）[C];2008年

9 俞紅麗;于布為;;瑞芬太尼誘發(fā)痛覺過敏作用的臨床觀察[A];2008年第七次華東六省一市麻醉學學術會議暨浙江省麻醉學術年會論文匯編（下冊）[C];2008年

10 孔微微;李軍;曹紅;連慶泉;宋學軍;胡三覺;;頸椎神經根病變模型的痛覺過敏和異位自發(fā)電位的探究[A];浙江省醫(yī)學會疼痛學分會成立大會暨首屆浙江省醫(yī)學會疼痛學分會學術年會論文匯編[C];2011年

相關博士學位論文 前10條

1 張偉;脊髓α7nAChRs在瑞芬太尼痛覺過敏中的作用及其機制的研究[D];南京醫(yī)科大學;2015年

2 王春艷;DOR-GLT-1/GS-NMDA受體通路在瑞芬太尼痛覺過敏中的作用及氫氣治療作用研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

3 周學龍;EphrinB-EphB調控疼痛的信號通路研究[D];浙江大學;2016年

4 俞增貴;帕瑞昔布鈉和右美托咪定預防瑞芬太尼誘發(fā)痛覺過敏的臨床研究[D];南方醫(yī)科大學;2016年

5 顧偉;激活脊髓α7nAChRs對瑞芬太尼誘發(fā)大鼠術后痛覺過敏的時長及脊髓背角BDNF/trkB-KCC2信號通路的影響[D];南京醫(yī)科大學;2017年

6 丁若汀;晚期氧化蛋白產物誘導大鼠痛覺過敏及其機制的研究[D];南方醫(yī)科大學;2017年

7 簡道林;氯胺酮抗痛覺過敏機制的實驗研究[D];華中科技大學;2006年

8 魏慧;細胞骨架對大鼠背根神經節(jié)持續(xù)受壓后痛覺過敏的調控及機制研究[D];山東大學;2013年

9 謝言虎;電針抑制瑞芬太尼誘導痛覺過敏的臨床觀察與動物實驗研究[D];山東大學;2014年

10 俞芳;地佐辛對于緩解開腹手術患者術后瑞芬太尼引起痛覺過敏的有效性和安全性研究[D];上海交通大學;2014年

相關碩士學位論文 前10條

1 吳毅歡;經皮穴位電刺激可以減輕瑞芬太尼誘發(fā)的痛覺過敏[D];福建醫(yī)科大學;2015年

2 石林玉;脊髓水平神經元限制性沉默因子在瑞芬太尼誘發(fā)術后痛覺過敏中的作用[D];南京大學;2015年

3 王府;右美托咪定預處理對瑞芬太尼復合麻醉后痛覺過敏影響的臨床研究[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

4 鄭航;下丘腦弓狀核內CBS參與慢性胰腺炎大鼠腹部痛覺過敏的機制研究[D];蘇州大學;2016年

5 龔欽;右美托咪定或地佐辛預防瑞芬太尼痛覺過敏的臨床觀察[D];廣西醫(yī)科大學;2016年

6 張磊;全麻復合硬膜外麻醉對下腹部手術后痛覺過敏影響的臨床研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

7 戴友愛;損毀炎癥大鼠下丘腦弓狀核對痛覺過敏的影響[D];蘇州大學;2012年

8 曾麗;經硬膜外注入低濃度羅哌卡因復合芬太尼對開腹手術后痛覺過敏的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

9 代培芳;外周組織5-HT引起痛覺過敏的細胞內機制的研究[D];福建師范大學;2005年

10 呂虎;活性氧參與背根神經節(jié)慢性壓迫致鏡像痛的外周機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

，

本文編號：1601065