本文關鍵詞： PKM2 結直腸癌 CCL2 巨噬細胞　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：一、前言結直腸癌是消化道中常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和病死率僅次于胃癌、食管癌和原發(fā)性肝癌。因此,深入研究結腸直腸癌分子機制及其關鍵信號通路分子的鑒定,對進一步提高結腸直腸癌的治療水平具有重要意義。研究證實結腸直腸癌的發(fā)生進展是一個眾多因素相互共同作用的過程。腫瘤微環(huán)境是腫瘤生長的內環(huán)境。而巨噬細胞具有促腫瘤血管新生和重塑腫瘤微環(huán)境等功能作用,但其如何募集到腫瘤部位及其發(fā)揮相關功能作用機理至今尚不完全清楚。丙酮酸激酶M2(PKM2)是糖酵解過程中一個關鍵限制酶,同時也是一個重要的轉錄輔助因子,其PKM2在癌癥發(fā)生發(fā)展過程中的非糖酵解功能和作用日益得到人們的關注。在結直腸癌微環(huán)境中,PKM2是如何塑造腫瘤微環(huán)境,進而促進結直腸癌的生長和存活,其機制尚不清楚。二、研究目的探討結直腸癌細胞中PKM2在結直腸癌微環(huán)境中對巨噬細胞募集的作用及其機制。三、研究方法本研究主要通過siRNA干擾等方法探討PKM2對巨噬細胞募集的相關趨化因子表達的影響;通過實時熒光定量PCR等方法證實丙酮酸激酶對巨噬細胞募集相關趨化因子表達和活性影響的分子機制,進而逆造腫瘤炎癥微環(huán)境,進而促進結直腸癌發(fā)生發(fā)展進程。研究結果1.臨床組織標本免疫組化的結果顯示:相對于正常的對照組而言,在結直腸癌組織中丙酮酸激酶M2型表達量明顯增多,同時巨噬細胞的數(shù)量和分布也集中在腫瘤腺體周邊,同時,蛋白質印跡的結果也表明丙酮酸激酶M2在結直腸癌細胞中的表達量相對于正常腸上皮細胞的含量明顯增多2.條件培養(yǎng)基對巨噬細胞的趨化實驗結果顯示,與對照組相比,利用特異性siRNA敲低PKM2的表達,明顯降低巨噬細胞的趨化和遷移。為了進一步避免脫靶,我們利用已證實具有干擾效果的shPKM2慢病毒感染細胞并收集其條件培養(yǎng)基,隨后進行趨化實驗,其結果與上述的一致。3.Real-time PCR實驗結果顯示:相對于對照組而言,干擾結直腸癌細胞中PKM2的表達能夠明顯降低CCL2在mRNA水平上的表達,同時酶聯(lián)免疫吸附實驗結果也進一步表明,PKM2能夠影響CCL2的表達和分泌4.腸上皮細胞中內源性的PKM2與IKKβ相互作用,然而,敲低PKM2的表能夠明顯抑制p65(Ser276)的磷酸化活性。5.p65的過表達可拯救敲低PKM2而引起的結直腸癌細胞CCL2的轉錄活性的降低,且可恢復PKM2敲低引起的細胞侵襲能力的降低巨噬細胞趨化作用五、結論1.證實了結直腸癌組織中PKM2的表達量與巨噬細胞的數(shù)目和分布成正相關。2.PKM2調節(jié)結直腸癌細胞CCL2的表達和分泌促進巨噬細胞的趨化作用3.PKM2與p65相互作用,并調節(jié)p65 Ser276位點的磷酸化。4.敲掉結直腸癌細胞的PKM2的表達明顯抑制p65結合到CCL2的啟動子區(qū)域進而降低其轉錄活性
[Abstract]:1. Colorectal cancer is one of the most common malignant tumors in the digestive tract. Its morbidity and mortality are second only to gastric cancer, esophageal cancer and primary liver cancer. It is important to further improve the treatment level of colorectal cancer. It is confirmed that the progression of colorectal cancer is a process of interaction of many factors. The tumor microenvironment is the internal environment of tumor growth. Macrophages have the function of promoting tumor angiogenesis and remodeling tumor microenvironment. However, it is still unclear how it can recruit the tumor site and how it functions. Pyruvate kinase M2PKM2 is a key restriction enzyme in glycolysis, and it is also an important transcriptional cofactor. The non-glycolytic function and role of PKM2 in carcinogenesis and development have attracted more and more attention. In the microenvironment of colorectal cancer, PKM2 is responsible for shaping the tumor microenvironment and promoting the growth and survival of colorectal cancer. The mechanism is not clear. Second, the purpose of this study was to investigate the role of PKM2 in the microenvironment of colorectal cancer and its mechanism of macrophage recruitment. Methods siRNA interference was used to investigate the effect of PKM2 on the expression of chemokines in macrophage recruitment. The effects of pyruvate kinase on the expression and activity of chemokines associated with macrophage recruitment were confirmed by real-time fluorescence quantitative PCR, and then the inflammatory microenvironment of tumor was reversed. The immunohistochemical results of clinical tissues showed that the expression of pyruvate kinase M2 was significantly increased in colorectal cancer tissues compared with the normal control group. 2. At the same time, the number and distribution of macrophages are also concentrated around the tumor glands, at the same time, The results of Western blot also showed that the expression of pyruvate kinase M2 in colorectal cancer cells was significantly higher than that in normal intestinal epithelial cells 2. The chemotactic effect of conditioned medium on macrophages showed that the expression of pyruvate kinase M2 in colorectal cancer cells was significantly higher than that in control group. The expression of specific siRNA knockout PKM2 was used to significantly reduce the chemotaxis and migration of macrophages. In order to further avoid miss, we used shPKM2 lentivirus, which has been proved to have interference effect, to infect cells and collect its conditioned medium. The chemotaxis experiment was carried out, and the results were consistent with the results of .3. Real-time PCR experiment. The results showed that interfering the expression of PKM2 in colorectal cancer cells could significantly reduce the expression of CCL2 at the mRNA level compared with the control group. At the same time, the results of enzyme-linked immunosorbent assay further showed that PKM2 could affect the expression and secretion of CCL2. 4. Endogenous PKM2 interacts with IKK 尾 in intestinal epithelial cells. Knockout of PKM2 could significantly inhibit the phosphorylation activity of p65 ser276. 5. P65 could save the decrease of CCL2 transcription in colorectal cancer cells induced by knock down PKM2. And can restore the PKM2 knockdown induced cell invasion ability to reduce macrophage chemotaxis. It is confirmed that the expression of PKM2 is positively correlated with the number and distribution of macrophages. 2. PKM2 regulates the expression and secretion of CCL2 in colorectal cancer cells and promotes the chemotaxis of macrophages 3.PKM2 and p65 interact with each other. The phosphorylation of p65 Ser276 site was regulated. 4. The expression of PKM2 in knock out colorectal cancer cells significantly inhibited p65 binding to the promoter region of CCL2 and decreased its transcriptional activity.
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 陸漢明,邵正才;青年人結直腸癌83例臨床分析[J];中國胃腸外科雜志;2000年04期

2 王漢濤 ,Kraemer M.;隨訪危險因素分析:復發(fā)和非復發(fā)結直腸癌的比較[J];中國實用外科雜志;2001年12期

3 蘇森;患結直腸癌婦女后代癌癥的危險性增加[J];中國腫瘤;2001年06期

4 汪一虹;在確定的法國人群中年齡<45歲結直腸癌病人與≥45歲結直腸癌病人的比較[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2002年01期

5 李會晨;結直腸癌解剖位置的連續(xù)性右向遷移[J];國外醫(yī)學.外科學分冊;2003年03期

6 李志霞;結直腸癌復發(fā)及轉移的綜合治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年06期

7 何建苗,蒲永東,曹志宇,劉衛(wèi)平;老年人結直腸癌186例的外科治療[J];中華胃腸外科雜志;2003年05期

8 保紅平,方登華,高瑞崗,李奎,張雪松,劉天錫;青年人結直腸癌臨床病理分析[J];中國普外基礎與臨床雜志;2004年01期

9 章江;;監(jiān)測結直腸癌非常必要[J];國外醫(yī)學情報;2004年04期

10 郜文秀,楊艷芳,梁小波,李耀平,李佩珍;細胞粘附分子變異體在結直腸癌中的表達及預后[J];中國公共衛(wèi)生;2005年07期

相關會議論文 前10條

1 鄭樹;;結直腸癌預后與轉移相關因素分析[A];2005年浙江省腫瘤學術會議全國大腸癌轉移與復發(fā)的診治研討會學術論文集[C];2005年

2 鄒一峰;吳小劍;蘭平;;結直腸癌免疫治療新進展[A];第十一次全國中西醫(yī)結合大腸肛門病學術會議論文匯編[C];2006年

3 郁寶銘;;結直腸癌治療的進展及其新理念[A];2006年浙江省肛腸外科學術年會論文匯編[C];2006年

4 王錫山;;結直腸癌治療的困惑之我見[A];第九屆全國腫瘤轉移學術大會暨2011年黑龍江省醫(yī)學會腫瘤學年會報告集[C];2011年

5 秦建平;;未病思想中的結直腸癌預防[A];貴州省中西醫(yī)結合學會肛腸學會第五屆學術交流會暨新技術新進展學習班論文匯編[C];2012年

6 高文慶;陳會林;童蕾;陸松春;;老年梗阻性結直腸癌診療體會(附42例報告)[A];首屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨浙江省中醫(yī)藥學會2011年學術年會論文集[C];2011年

7 王啟遠;周長江;高云飛;徐巖;李坤;;血管內皮生長因子與結直腸癌[A];《中華急診醫(yī)學雜志》第八屆組稿會暨急診醫(yī)學首屆青年論壇論文匯編[C];2009年

8 巴一;;結直腸癌靶向治療進展[A];第三屆中國腫瘤內科大會教育集暨論文集[C];2009年

9 何超;朱洪波;;結直腸癌的生物治療[A];2009年浙江省腫瘤外科學術年會暨腫瘤外科規(guī)范化診治學習班論文匯編[C];2009年

10 萬德森;;進一步提高結直腸癌療效的思考[A];2009年浙江省腫瘤學術年會暨腫瘤診治新進展學習班論文匯編[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 中華醫(yī)學會腫瘤學分會主任委員 顧晉;分期不精確 致結直腸癌過度治療[N];健康報;2012年

2 本報記者 賈巖;跨線治療成結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

3 本報記者 賈巖;跨線治療構筑結直腸癌最后防線[N];醫(yī)藥經濟報;2012年

4 本報記者 林琳;結直腸癌：可以治愈的癌癥[N];醫(yī)藥經濟報;2013年

5 記者 張妍　通訊員 熊靜帆 朱品磊;深圳結直腸癌發(fā)病高于全國[N];深圳商報;2013年

6 本報記者 孫剛;預防結直腸癌：請管住嘴[N];解放日報;2013年

7 上海市中醫(yī)醫(yī)院腫瘤科 侯鳳剛 副主任醫(yī)師;中醫(yī)藥在結直腸癌治療中的作用和特色[N];上海中醫(yī)藥報;2014年

8 李華虹 孫瑜淼 記者 李麗云 實習生 陰浩;專家呼吁：結直腸癌應多學科規(guī)范化診療[N];科技日報;2014年

9 ;降低結直腸癌復發(fā)有新療法[N];人民日報;2003年

10 韓自力;新化療方案可高效治療結直腸癌[N];健康報;2007年

相關博士學位論文 前10條

1 陳濤;MicroRNA-31/FIH-1調控關系在結直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機制研究[D];復旦大學;2014年

2 任翡;MYBL2基因在結直腸癌的表達及機制的初步探討[D];復旦大學;2014年

3 吳朋;結直腸癌中microRNA-615基因甲基化及其生物學特性探究[D];復旦大學;2014年

4 李澤武;MicroRNA-203靶向ZNF217基因調控結直腸癌生物學行為的研究[D];山東大學;2015年

5 徐興遠;低分子肝素對結直腸癌患者預后的影響及相關機制的研究[D];復旦大學;2014年

6 梁洪亮;miR-454在結直腸癌中的功能及其作用機制[D];山東大學;2015年

7 金鵬;MMR蛋白在雌激素致結腸癌細胞凋亡中的作用及SEPT9檢測結直腸癌的研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

8 珠珠;云南省Lynch綜合征候選基因標志物研究[D];昆明醫(yī)科大學;2014年

9 周智航;SEMA3F通過下調ASCL2-CXCR4軸而抑制結直腸癌轉移的分子機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

10 王林;MiRNA-300對結直腸癌腫瘤侵襲和增殖的影響及其調控機制的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 顏斐斐;術后結直腸癌患者癌因性疲乏與影響因素的研究[D];南方醫(yī)科大學;2009年

2 李斌;結直腸癌患者就診延遲分析[D];中南大學;2009年

3 葉建杰;慈溪市結直腸癌危險因素病例對照研究[D];浙江大學;2008年

4 趙波;結直腸癌危險因素及臨床流行病學特征的調查與分析[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

5 宋艷敏;PAQR3基因甲基化水平與結直腸癌關系的研究[D];河北大學;2015年

6 黎江;Oct4B1在結直腸癌干細胞中的表達及其與Twist的相關性研究[D];遵義醫(yī)學院;2015年

7 楊文婷;PD-L1、SIRT1在結直腸癌組織中的表達及意義[D];福建醫(yī)科大學;2015年

8 羅佳;二代測序分析散發(fā)性結直腸癌和息肉的基因突變[D];福建醫(yī)科大學;2015年

9 崔慧鵬;精氨酸琥珀酸合成酶（ASS1）高表達與結直腸癌惡性進展的相關性研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2015年

10 崔娟娟;p53和nm23在結直腸癌中的表達及其臨床意義[D];河北聯(lián)合大學;2014年

，

本文編號：1495060