本文關(guān)鍵詞：高滲鹽水通過EGFR信號通路減輕血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞缺血缺氧損傷的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景:各種原因如顱腦疾病以及全身性疾病導(dǎo)致腦水腫是急危重癥患者的重要致殘和死亡原因。高滲鹽水(HS)與甘露醇均已被《ASA/AHA2007自發(fā)性腦出血治療指南》明確推薦為一線降顱壓藥物。但證據(jù)顯示,甘露醇有惡化腎功能、低容量反應(yīng)和腦水腫“反彈”現(xiàn)象。近年研究發(fā)現(xiàn),HS在治療腦水腫顱高壓方面比傳統(tǒng)的甘露醇更有優(yōu)勢,效果更好,作用更持久,也無顱內(nèi)壓“反彈現(xiàn)象”。HS減輕腦水腫的機(jī)制未完全明了。產(chǎn)生腦水腫的主要原因是血腦屏障(Blood Brain Barrier,BBB)的破壞,而作為構(gòu)成BBB基礎(chǔ)的內(nèi)皮細(xì)胞,則是關(guān)鍵。內(nèi)皮細(xì)胞以及由其形成的緊密連接位于血管腔內(nèi)側(cè),是HS治療腦水腫最直接、也是最先接觸的部位。因此,保護(hù)BBB的內(nèi)皮細(xì)胞是防治腦水腫的重要靶點(diǎn)。我們已發(fā)現(xiàn),HS可通過減少腦梗死灶周圍小膠質(zhì)細(xì)胞釋放炎癥因子TNF-α、IL-1β等非滲透性機(jī)制減輕腦水腫,但HS是否具有保護(hù)BBB內(nèi)皮細(xì)胞的效應(yīng)以及其作用機(jī)制如何,目前尚未清楚。目的:研究HS是否可減輕缺血缺氧導(dǎo)致BBB內(nèi)皮細(xì)胞損傷并探討其作用機(jī)制。方法:本研究將采用測定腦組織Evans藍(lán)、PCR、MTS、Western blot、流式、TUNEL、免疫熒光、免疫組化、透射電鏡以及腺病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)等技術(shù),通過動物體內(nèi)和細(xì)胞培養(yǎng)兩個層面探討HS對BBB內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng),并進(jìn)一步利用基因測序等方法研究HS減輕缺血缺氧導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的信號傳導(dǎo)通路。結(jié)果:首先,通過構(gòu)建大鼠腦缺血再灌注損傷模型,分假手術(shù)組,模型組,生理鹽水組和HS組(10%的HS)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與腦缺血組和生理鹽水組比較,10%的HS組的腦組織Evans藍(lán)定量顯著減少(P0.05),但仍然較假手術(shù)組增加(P0.05);而缺血組與生理鹽水組之間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過透射電鏡發(fā)現(xiàn),缺血組的BBB的緊密連接、內(nèi)皮細(xì)胞皺縮、細(xì)胞空泡形成等結(jié)構(gòu)明顯破壞,但HS處理后,以上破壞顯著減輕。其次,體外構(gòu)建糖氧剝奪模型(OGD),以40mmol/L的HS干預(yù)bEnd.3內(nèi)皮細(xì)胞,通過細(xì)胞活力測定、流式和TUNEL檢測細(xì)胞凋亡、透射電鏡等技術(shù)發(fā)現(xiàn):與ODG組相比,HS組顯著改善內(nèi)皮細(xì)胞活力(P0.05),減少細(xì)胞凋亡(P0.05),IL-1β表達(dá)降低(P0.05);透射電鏡發(fā)現(xiàn),HS干預(yù)OGD損傷的bEnd.3內(nèi)皮細(xì)胞后,可顯著減少線粒體破壞與溶解、細(xì)胞核皺縮等超微結(jié)構(gòu)。綜合上述的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)提示,HS對缺血缺氧損傷的BBB內(nèi)皮細(xì)胞具有明顯的保護(hù)效應(yīng)。為進(jìn)一步探討HS保護(hù)BBB內(nèi)皮細(xì)胞的非滲透性分子機(jī)制,我們通過高通量測序的方法發(fā)現(xiàn):與對照組相比,OGD組中bEnd.3內(nèi)皮細(xì)胞的表皮生長因子受體(EGFR)基因的表達(dá)量顯著上調(diào)(P0.05),并通過q-PCR驗(yàn)證了這一表達(dá)譜結(jié)果。按照這一測序結(jié)果,將bEnd.3內(nèi)皮細(xì)胞予40mmol/L的HS干預(yù)并作OGD處理,通過Western Blot、免疫組化以及免疫熒光等方法分析顯示,與OGD組相比,內(nèi)皮細(xì)胞的EGFR顯著下降(P0.05),同時細(xì)胞凋亡率和IL-1β表達(dá)明顯降低(P0.05);另外,通過慢病毒載體轉(zhuǎn)染過表達(dá)EGFR,予OGD處理后可顯著增加bEnd.3內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)IL-1β(P0.05),并增加凋亡率(P0.05),但令人意外的是,HS并未顯著減少EGFR過表達(dá)后bEnd.3內(nèi)皮細(xì)胞的p-EGFR、IL-1β表達(dá)和凋亡率,原因可能為過表達(dá)EGFR后的BBB內(nèi)皮細(xì)胞的自我調(diào)節(jié)功能受損,導(dǎo)致HS對內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)效應(yīng)喪失。結(jié)論:本研究通過體內(nèi)、體外研究發(fā)現(xiàn),HS可減輕缺血缺氧導(dǎo)致血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞的損傷;這一效應(yīng)與HS抑制EGFR和IL-1β的表達(dá)有關(guān),但過表達(dá)EGFR的內(nèi)皮細(xì)胞可使HS的保護(hù)性效應(yīng)失效。
[Abstract]:Background: a variety of reasons such as brain diseases and systemic diseases cause cerebral edema is critically ill patients with important causes disability and death. Hypertonic saline (HS) and mannitol have been recommended as first-line treatment guidelines > clear intracranial pressure drugs of spontaneous hemorrhage of
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R742

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