TWEAK-p38MAPK信號(hào)通路在人工關(guān)節(jié)假體周?chē)侨芙庵械淖饔醚芯?/H1>
發(fā)布時(shí)間：2017-12-29 23:30
本文關(guān)鍵詞：TWEAK-p38MAPK信號(hào)通路在人工關(guān)節(jié)假體周?chē)侨芙庵械淖饔醚芯?/strong> 出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文 論文類(lèi)型：學(xué)位論文
更多相關(guān)文章： 腫瘤壞死因子樣弱凋亡誘導(dǎo)因子 p38絲裂原活化蛋白激酶 假體周?chē)侨芙?/b> 假體松動(dòng) 磨損微粒
【摘要】：研究背景假體周?chē)仔怨侨芙馐侨斯りP(guān)節(jié)置換術(shù)后的嚴(yán)重并發(fā)癥。目前,大量研究提示無(wú)菌性松動(dòng)主要與假體長(zhǎng)期磨損或腐蝕產(chǎn)生的微粒所誘導(dǎo)的生物學(xué)反應(yīng)有關(guān)。早在1977年Willert等人首先提出了假體無(wú)菌性松動(dòng)是巨噬細(xì)胞對(duì)磨損微粒反應(yīng)的結(jié)果。磨損微粒誘導(dǎo)人工關(guān)節(jié)周?chē)M織內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和滑膜細(xì)胞釋放炎性細(xì)胞因子,引起一系列體內(nèi)持續(xù)性炎性反應(yīng),促使局部破骨細(xì)胞增加,發(fā)生骨質(zhì)吸收破壞,并最終導(dǎo)致假體的無(wú)菌性松動(dòng)。近年來(lái)的研究提示,這些炎性細(xì)胞因子主要通過(guò)骨保護(hù)素/核因子κB受體活化因子配體/核因子κB受體活化因子(OPG/RANKL/RANK, Osteoprotegerin /Receptor Actibator of Nuclear Factor Kb Ligand /Receptor Actibator of NuclearFactor κB)信號(hào)系統(tǒng)激活破骨細(xì)胞,導(dǎo)致了假體周?chē)橇康膩G失,產(chǎn)生骨溶解。腫瘤壞死因子樣弱凋亡誘導(dǎo)因子(tumor necrosis factor like weak inducer of apoptosis, TWEAK)是1997年新發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子配體超家族中的一員。TWEAK在人體多種組織中均有表達(dá),是一種廣泛表達(dá)的腫瘤壞死因子家族的配體。多種免疫細(xì)胞(單核-巨噬細(xì)胞,樹(shù)狀突細(xì)胞,活化的T細(xì)胞等)均可產(chǎn)生其可溶性的細(xì)胞因子形式。在急慢性炎癥或損傷的情況下,TWEAK表達(dá)顯著增加。已經(jīng)越來(lái)越多研究發(fā)現(xiàn),TWEAK通過(guò)與其受體相結(jié)合,發(fā)揮各種各樣的生物學(xué)效應(yīng),包括釋放促炎性因子、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、刺激細(xì)胞凋亡以及調(diào)節(jié)組織修復(fù)與再生。TWEAK能促激活經(jīng)典的核轉(zhuǎn)錄因子κB (Nuclear Factor κ BNF-κB)通路,除此之外,研究發(fā)現(xiàn),TWEAK還可激活非經(jīng)典的NF-κB通路以及絲氨酸/蘇氨酸絲裂原激活蛋白(mitogen-ativated protein kinase, MAPK)激酶通路。MAPKs信號(hào)通路具有生物進(jìn)化的高度保守性,廣泛存在于細(xì)胞內(nèi),其主要功能是將細(xì)胞外刺激信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi),并引起細(xì)胞的一系列生物學(xué)反應(yīng)。目前已發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有多條MAPK通路：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK1/ERK2)通路、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase, JNK)通路(又稱(chēng)為應(yīng)激活化蛋白激酶stress-activated protein kinase.SAPK).p38MAPK(p38α, p38β, p38γ and p38δ)通路和ERK3/ERK4/ERK5通路。其中p38 MAPK是MAPK家族的重要成員,當(dāng)他們受到環(huán)境應(yīng)激或細(xì)胞因子刺激時(shí),能使效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生增殖、分化、遷移、浸潤(rùn)和炎癥等生命活動(dòng)。p38 MAPK的抑制劑SB203580,為吡啶咪唑類(lèi)衍生物,能特異性地作用于p38 ATP結(jié)合活性位點(diǎn)Thr106,使p38失去了與ATP結(jié)合的能力,從而使其失去激酶活性。白介素-6(Interleukin 6, IL-6)是一種多功能的細(xì)胞因子,主要由單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等分泌,發(fā)揮一系列的免疫效應(yīng)。單核細(xì)胞趨化蛋白-1(Monocyte chemiattractant protein 1.MCP-1)屬于趨化因子超家族的一員,其主要功能是通過(guò)趨化作用,使單核細(xì)胞離開(kāi)血流而分化成為分布于組織中的巨噬細(xì)胞,參與著機(jī)體的免疫和炎癥反應(yīng)。研究表明這些因子都參與著關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體周?chē)鸁o(wú)菌性松動(dòng)的病理過(guò)程隨著對(duì)炎性骨溶解研究的深入,特別是在溶骨性因子,受體／配體家族成員及其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)破骨前體細(xì)胞分化、成熟及破骨細(xì)胞活化、功能影響方面研究的進(jìn)展,針對(duì)骨溶解機(jī)制中某一環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)成為可能。目前已有少量文獻(xiàn)報(bào)道,p38 MAPK信號(hào)通道參與了磨損微粒誘導(dǎo)的骨溶解這一病理過(guò)程,Zwerina等人通過(guò)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的小鼠模型研究,不僅發(fā)現(xiàn)p38MAPK對(duì)于炎性骨破壞起著重要作用,同時(shí)還發(fā)現(xiàn)抑制p38MAPK是減輕炎性骨破壞的重要手段。此外,在臨床上對(duì)狼瘡腎炎、肌炎等疾病的研究中發(fā)現(xiàn),p38 MAPK信號(hào)通道能被TWEAK激活,并發(fā)揮致病作用。但是p38 MAPK信號(hào)通道在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體松動(dòng)的界膜組織中如何表達(dá),尚存在爭(zhēng)議。而TWEAK作為T(mén)NF配體超家族的成員是否也參與假體周?chē)鸁o(wú)菌性松動(dòng)的發(fā)生和發(fā)展,尚未見(jiàn)文章報(bào)道。基于以上的理論支撐,本研究擬通過(guò)組織形態(tài)學(xué)觀察及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,探討人工關(guān)節(jié)假體周?chē)侨芙獾南嚓P(guān)問(wèn)題。1.在松動(dòng)假體周?chē)缒そM織中,TWEAK和p38 MAPK表達(dá)情況,探討其表達(dá)與假體松動(dòng)的相關(guān)性。2.用鈦微粒刺激體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞(RAW246.7),通過(guò)p38 MAPK抑制劑進(jìn)行干預(yù),觀察TWEAK及p38 MAPK的表達(dá),探討TWEAK-p38 MAPK信號(hào)通過(guò)在其中可能的作用機(jī)制。3.制備小鼠顱骨骨溶解的動(dòng)物模型,用p38MAPK抑制劑進(jìn)行干預(yù),觀察TWEAK及p38MAPK的表達(dá),探討TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信號(hào)通道在炎性骨溶解中的作用,以及p38 MAPK抑制劑對(duì)人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)靶向治療的可能性。一. TWEAK及p38 MAPK在關(guān)節(jié)松動(dòng)假體周?chē)缒そM織中的表達(dá)及臨床意義方法：研究不同來(lái)源的滑膜組織及松動(dòng)假體周?chē)缒そM織(正�；ぁ⒐顷P(guān)節(jié)炎滑膜、界膜),通過(guò)HE染色和免疫組織化學(xué)染色,對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行定性觀察。通過(guò)RT-PCR和Western Blot等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)組織中TWEAK及p38MAPK的表達(dá),對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行定量觀察。結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示,與正常滑膜組比較,骨關(guān)節(jié)炎滑膜組基質(zhì)和纖維細(xì)胞較多,少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn),鏡下見(jiàn)滑膜細(xì)胞,但其增生不明顯。而在界膜組中滑膜細(xì)胞增生明顯伴有局灶性炎性細(xì)胞浸潤(rùn),顯微鏡下可見(jiàn)有大量的單核細(xì)胞,在細(xì)顆粒狀物周?chē)葹槊黠@。TWEAK的免疫組化染色結(jié)果顯示,界膜組中可見(jiàn)大量胞質(zhì)呈棕黃色的單核細(xì)胞(陽(yáng)性細(xì)胞)；骨關(guān)節(jié)炎滑膜組中可見(jiàn)散在的胞質(zhì)呈棕黃色的單核細(xì)胞；正�；そM中陽(yáng)性細(xì)胞更少。p-p38 MAPK的免疫組化染色結(jié)果與TWEAK鏡下觀察結(jié)果類(lèi)似。在界膜組的TWEAK mRNA以及蛋白的表達(dá)要明顯高于正常滑膜組及骨關(guān)節(jié)炎滑膜組,并且骨關(guān)節(jié)炎滑膜組的TWEAK mRNA以及蛋白表達(dá)水平亦高于正常的滑膜組。p-p38MAPK蛋白表達(dá)情況與TWEAK表達(dá)類(lèi)似,在界膜組中最高,關(guān)節(jié)炎組次之,正�；そM最少,兩兩比較均由統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。TWEAK和p-p38MAPK表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論：TWEAK可能是炎性骨溶解的啟動(dòng)因素之一,p38 MAPK可能是參與調(diào)控磨損微粒誘導(dǎo)骨溶解的中心環(huán)節(jié),進(jìn)一步探索TWEAK及P38MAPK在假體周?chē)仔怨侨芙庵械淖饔脵C(jī)制,對(duì)臨床防治人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)具有重要意義。二. p38 MAPK抑制劑對(duì)鈦微粒刺激巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響方法：體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞(RAW246.7),分組：A組：對(duì)照組(細(xì)胞單純培養(yǎng)組),B組：A+SB203580(特異性p38MAPK阻斷劑),C組：A+TiPs,D組：A+TiPs+SB203580.將上述各組分別加入24孔培養(yǎng)板,在5%CO2,37℃,95%濕度條件下孵育48小時(shí)候收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)上清。采用Western Blot分別檢測(cè)TWEAK及p-p38MAPK的蛋白表達(dá)水平。采用ELISA法分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6, MCP-1表達(dá)水平。結(jié)果：TWEAK蛋白的表達(dá)：C組較A組、B組和D組明顯增加(P0.05)。且D組較A組B組明顯增加(P0.05)。p-p38MAPK蛋白表達(dá)：C組明顯高于A組,B組及D組(P0.05)。A組明星高于B組、D組(P0.05),B組,D組兩組間沒(méi)有明顯差異。細(xì)胞培養(yǎng)上清中,IL-6和MCP-1的表達(dá)：C組較A組、B組和D組明顯增加(P0.05),A組,B組兩組間沒(méi)有明顯差異。結(jié)論：鈦微粒能刺激巨噬細(xì)胞通過(guò)激活p38 MAPK信號(hào)通路分泌炎性因子,而SB203580能通過(guò)抑制p38 MAPK,減輕巨噬細(xì)胞的炎性因子分泌,因此推測(cè)TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信號(hào)通道在微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解中發(fā)揮著重要作用。進(jìn)一步探索p38 MAPK信號(hào)通路,對(duì)臨床防治人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)具有重要意義。三. p38 MAPK抑制劑對(duì)鈦微粒誘導(dǎo)炎性骨溶解的實(shí)驗(yàn)研究方法：雄性C57BL/J6小鼠體重18-22g,12-14周齡。隨機(jī)分成：假手術(shù)組(A組)、SB203580組(B組)、TiPs植入組(C組)和TiPs植入+SB203580組(D組),SB203580以0.1mg/kg/d腹膜內(nèi)注射。術(shù)后兩周取材,采用TRAP染色觀察骨溶解動(dòng)物模型里的破骨細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量,ELISA法檢測(cè)動(dòng)物模型的炎性細(xì)胞因子。結(jié)果：TRAP染色結(jié)果顯示,在C組(TiPs的顱骨模型)可見(jiàn)大量破骨細(xì)胞形成,呈紫紅色,散在或者連續(xù)存在。而沒(méi)加TiPs的A組和B組中,均沒(méi)見(jiàn)到破骨細(xì)胞及骨破壞。在D組(TiPs+SB203580的顱骨模型)中,僅在顱骨溶解邊緣有少量紫紅色細(xì)胞,陽(yáng)性細(xì)胞較C組明顯減少。顱骨骨破壞也較C組明顯減輕。ELISA結(jié)果顯示,C組在鈦微粒的刺激誘導(dǎo)下,TWEAK、p-p38MAPK、IL-6和MCP-1的含量要明顯高于其他三組(P0.05)。而D組由于有SB203580的干預(yù),不僅p-p38MAPK得到了明顯的抑制,TWEAK, IL-6, MCP-1表達(dá)也明顯減少。與C組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余三組之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：SB203580能通過(guò)抑制p38MAPK信號(hào)通路,降低炎性因子的表達(dá),抑制破骨細(xì)胞的生成,減輕鈦微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解。因此,我們認(rèn)為,TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信號(hào)通道在微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解中發(fā)揮著重要作用。抑制p38 MAPK信號(hào)通路可能成為抑制炎性骨溶解的新途徑,進(jìn)一步研究p38MAPK信號(hào)通路對(duì)臨床防治人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)具有重要意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R687.4
，
本文編號(hào)：1352389
本文鏈接：http://sikaile.net/shoufeilunwen/yxlbs/1352389.html
本文關(guān)鍵詞：TWEAK-p38MAPK信號(hào)通路在人工關(guān)節(jié)假體周?chē)侨芙庵械淖饔醚芯?/strong> 出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2015年博士論文 論文類(lèi)型：學(xué)位論文
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【摘要】：研究背景假體周?chē)仔怨侨芙馐侨斯りP(guān)節(jié)置換術(shù)后的嚴(yán)重并發(fā)癥。目前,大量研究提示無(wú)菌性松動(dòng)主要與假體長(zhǎng)期磨損或腐蝕產(chǎn)生的微粒所誘導(dǎo)的生物學(xué)反應(yīng)有關(guān)。早在1977年Willert等人首先提出了假體無(wú)菌性松動(dòng)是巨噬細(xì)胞對(duì)磨損微粒反應(yīng)的結(jié)果。磨損微粒誘導(dǎo)人工關(guān)節(jié)周?chē)M織內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和滑膜細(xì)胞釋放炎性細(xì)胞因子,引起一系列體內(nèi)持續(xù)性炎性反應(yīng),促使局部破骨細(xì)胞增加,發(fā)生骨質(zhì)吸收破壞,并最終導(dǎo)致假體的無(wú)菌性松動(dòng)。近年來(lái)的研究提示,這些炎性細(xì)胞因子主要通過(guò)骨保護(hù)素/核因子κB受體活化因子配體/核因子κB受體活化因子(OPG/RANKL/RANK, Osteoprotegerin /Receptor Actibator of Nuclear Factor Kb Ligand /Receptor Actibator of NuclearFactor κB)信號(hào)系統(tǒng)激活破骨細(xì)胞,導(dǎo)致了假體周?chē)橇康膩G失,產(chǎn)生骨溶解。腫瘤壞死因子樣弱凋亡誘導(dǎo)因子(tumor necrosis factor like weak inducer of apoptosis, TWEAK)是1997年新發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子配體超家族中的一員。TWEAK在人體多種組織中均有表達(dá),是一種廣泛表達(dá)的腫瘤壞死因子家族的配體。多種免疫細(xì)胞(單核-巨噬細(xì)胞,樹(shù)狀突細(xì)胞,活化的T細(xì)胞等)均可產(chǎn)生其可溶性的細(xì)胞因子形式。在急慢性炎癥或損傷的情況下,TWEAK表達(dá)顯著增加。已經(jīng)越來(lái)越多研究發(fā)現(xiàn),TWEAK通過(guò)與其受體相結(jié)合,發(fā)揮各種各樣的生物學(xué)效應(yīng),包括釋放促炎性因子、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、刺激細(xì)胞凋亡以及調(diào)節(jié)組織修復(fù)與再生。TWEAK能促激活經(jīng)典的核轉(zhuǎn)錄因子κB (Nuclear Factor κ BNF-κB)通路,除此之外,研究發(fā)現(xiàn),TWEAK還可激活非經(jīng)典的NF-κB通路以及絲氨酸/蘇氨酸絲裂原激活蛋白(mitogen-ativated protein kinase, MAPK)激酶通路。MAPKs信號(hào)通路具有生物進(jìn)化的高度保守性,廣泛存在于細(xì)胞內(nèi),其主要功能是將細(xì)胞外刺激信號(hào)傳遞到細(xì)胞內(nèi),并引起細(xì)胞的一系列生物學(xué)反應(yīng)。目前已發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)有多條MAPK通路：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK1/ERK2)通路、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase, JNK)通路(又稱(chēng)為應(yīng)激活化蛋白激酶stress-activated protein kinase.SAPK).p38MAPK(p38α, p38β, p38γ and p38δ)通路和ERK3/ERK4/ERK5通路。其中p38 MAPK是MAPK家族的重要成員,當(dāng)他們受到環(huán)境應(yīng)激或細(xì)胞因子刺激時(shí),能使效應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生增殖、分化、遷移、浸潤(rùn)和炎癥等生命活動(dòng)。p38 MAPK的抑制劑SB203580,為吡啶咪唑類(lèi)衍生物,能特異性地作用于p38 ATP結(jié)合活性位點(diǎn)Thr106,使p38失去了與ATP結(jié)合的能力,從而使其失去激酶活性。白介素-6(Interleukin 6, IL-6)是一種多功能的細(xì)胞因子,主要由單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等分泌,發(fā)揮一系列的免疫效應(yīng)。單核細(xì)胞趨化蛋白-1(Monocyte chemiattractant protein 1.MCP-1)屬于趨化因子超家族的一員,其主要功能是通過(guò)趨化作用,使單核細(xì)胞離開(kāi)血流而分化成為分布于組織中的巨噬細(xì)胞,參與著機(jī)體的免疫和炎癥反應(yīng)。研究表明這些因子都參與著關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體周?chē)鸁o(wú)菌性松動(dòng)的病理過(guò)程隨著對(duì)炎性骨溶解研究的深入,特別是在溶骨性因子,受體／配體家族成員及其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)破骨前體細(xì)胞分化、成熟及破骨細(xì)胞活化、功能影響方面研究的進(jìn)展,針對(duì)骨溶解機(jī)制中某一環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)成為可能。目前已有少量文獻(xiàn)報(bào)道,p38 MAPK信號(hào)通道參與了磨損微粒誘導(dǎo)的骨溶解這一病理過(guò)程,Zwerina等人通過(guò)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的小鼠模型研究,不僅發(fā)現(xiàn)p38MAPK對(duì)于炎性骨破壞起著重要作用,同時(shí)還發(fā)現(xiàn)抑制p38MAPK是減輕炎性骨破壞的重要手段。此外,在臨床上對(duì)狼瘡腎炎、肌炎等疾病的研究中發(fā)現(xiàn),p38 MAPK信號(hào)通道能被TWEAK激活,并發(fā)揮致病作用。但是p38 MAPK信號(hào)通道在人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體松動(dòng)的界膜組織中如何表達(dá),尚存在爭(zhēng)議。而TWEAK作為T(mén)NF配體超家族的成員是否也參與假體周?chē)鸁o(wú)菌性松動(dòng)的發(fā)生和發(fā)展,尚未見(jiàn)文章報(bào)道。基于以上的理論支撐,本研究擬通過(guò)組織形態(tài)學(xué)觀察及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,探討人工關(guān)節(jié)假體周?chē)侨芙獾南嚓P(guān)問(wèn)題。1.在松動(dòng)假體周?chē)缒そM織中,TWEAK和p38 MAPK表達(dá)情況,探討其表達(dá)與假體松動(dòng)的相關(guān)性。2.用鈦微粒刺激體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞(RAW246.7),通過(guò)p38 MAPK抑制劑進(jìn)行干預(yù),觀察TWEAK及p38 MAPK的表達(dá),探討TWEAK-p38 MAPK信號(hào)通過(guò)在其中可能的作用機(jī)制。3.制備小鼠顱骨骨溶解的動(dòng)物模型,用p38MAPK抑制劑進(jìn)行干預(yù),觀察TWEAK及p38MAPK的表達(dá),探討TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信號(hào)通道在炎性骨溶解中的作用,以及p38 MAPK抑制劑對(duì)人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)靶向治療的可能性。一. TWEAK及p38 MAPK在關(guān)節(jié)松動(dòng)假體周?chē)缒そM織中的表達(dá)及臨床意義方法：研究不同來(lái)源的滑膜組織及松動(dòng)假體周?chē)缒そM織(正�；ぁ⒐顷P(guān)節(jié)炎滑膜、界膜),通過(guò)HE染色和免疫組織化學(xué)染色,對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行定性觀察。通過(guò)RT-PCR和Western Blot等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)組織中TWEAK及p38MAPK的表達(dá),對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行定量觀察。結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示,與正常滑膜組比較,骨關(guān)節(jié)炎滑膜組基質(zhì)和纖維細(xì)胞較多,少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn),鏡下見(jiàn)滑膜細(xì)胞,但其增生不明顯。而在界膜組中滑膜細(xì)胞增生明顯伴有局灶性炎性細(xì)胞浸潤(rùn),顯微鏡下可見(jiàn)有大量的單核細(xì)胞,在細(xì)顆粒狀物周?chē)葹槊黠@。TWEAK的免疫組化染色結(jié)果顯示,界膜組中可見(jiàn)大量胞質(zhì)呈棕黃色的單核細(xì)胞(陽(yáng)性細(xì)胞)；骨關(guān)節(jié)炎滑膜組中可見(jiàn)散在的胞質(zhì)呈棕黃色的單核細(xì)胞；正�；そM中陽(yáng)性細(xì)胞更少。p-p38 MAPK的免疫組化染色結(jié)果與TWEAK鏡下觀察結(jié)果類(lèi)似。在界膜組的TWEAK mRNA以及蛋白的表達(dá)要明顯高于正常滑膜組及骨關(guān)節(jié)炎滑膜組,并且骨關(guān)節(jié)炎滑膜組的TWEAK mRNA以及蛋白表達(dá)水平亦高于正常的滑膜組。p-p38MAPK蛋白表達(dá)情況與TWEAK表達(dá)類(lèi)似,在界膜組中最高,關(guān)節(jié)炎組次之,正�；そM最少,兩兩比較均由統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。TWEAK和p-p38MAPK表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論：TWEAK可能是炎性骨溶解的啟動(dòng)因素之一,p38 MAPK可能是參與調(diào)控磨損微粒誘導(dǎo)骨溶解的中心環(huán)節(jié),進(jìn)一步探索TWEAK及P38MAPK在假體周?chē)仔怨侨芙庵械淖饔脵C(jī)制,對(duì)臨床防治人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)具有重要意義。二. p38 MAPK抑制劑對(duì)鈦微粒刺激巨噬細(xì)胞分泌炎性因子的影響方法：體外培養(yǎng)巨噬細(xì)胞(RAW246.7),分組：A組：對(duì)照組(細(xì)胞單純培養(yǎng)組),B組：A+SB203580(特異性p38MAPK阻斷劑),C組：A+TiPs,D組：A+TiPs+SB203580.將上述各組分別加入24孔培養(yǎng)板,在5%CO2,37℃,95%濕度條件下孵育48小時(shí)候收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)上清。采用Western Blot分別檢測(cè)TWEAK及p-p38MAPK的蛋白表達(dá)水平。采用ELISA法分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6, MCP-1表達(dá)水平。結(jié)果：TWEAK蛋白的表達(dá)：C組較A組、B組和D組明顯增加(P0.05)。且D組較A組B組明顯增加(P0.05)。p-p38MAPK蛋白表達(dá)：C組明顯高于A組,B組及D組(P0.05)。A組明星高于B組、D組(P0.05),B組,D組兩組間沒(méi)有明顯差異。細(xì)胞培養(yǎng)上清中,IL-6和MCP-1的表達(dá)：C組較A組、B組和D組明顯增加(P0.05),A組,B組兩組間沒(méi)有明顯差異。結(jié)論：鈦微粒能刺激巨噬細(xì)胞通過(guò)激活p38 MAPK信號(hào)通路分泌炎性因子,而SB203580能通過(guò)抑制p38 MAPK,減輕巨噬細(xì)胞的炎性因子分泌,因此推測(cè)TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信號(hào)通道在微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解中發(fā)揮著重要作用。進(jìn)一步探索p38 MAPK信號(hào)通路,對(duì)臨床防治人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)具有重要意義。三. p38 MAPK抑制劑對(duì)鈦微粒誘導(dǎo)炎性骨溶解的實(shí)驗(yàn)研究方法：雄性C57BL/J6小鼠體重18-22g,12-14周齡。隨機(jī)分成：假手術(shù)組(A組)、SB203580組(B組)、TiPs植入組(C組)和TiPs植入+SB203580組(D組),SB203580以0.1mg/kg/d腹膜內(nèi)注射。術(shù)后兩周取材,采用TRAP染色觀察骨溶解動(dòng)物模型里的破骨細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量,ELISA法檢測(cè)動(dòng)物模型的炎性細(xì)胞因子。結(jié)果：TRAP染色結(jié)果顯示,在C組(TiPs的顱骨模型)可見(jiàn)大量破骨細(xì)胞形成,呈紫紅色,散在或者連續(xù)存在。而沒(méi)加TiPs的A組和B組中,均沒(méi)見(jiàn)到破骨細(xì)胞及骨破壞。在D組(TiPs+SB203580的顱骨模型)中,僅在顱骨溶解邊緣有少量紫紅色細(xì)胞,陽(yáng)性細(xì)胞較C組明顯減少。顱骨骨破壞也較C組明顯減輕。ELISA結(jié)果顯示,C組在鈦微粒的刺激誘導(dǎo)下,TWEAK、p-p38MAPK、IL-6和MCP-1的含量要明顯高于其他三組(P0.05)。而D組由于有SB203580的干預(yù),不僅p-p38MAPK得到了明顯的抑制,TWEAK, IL-6, MCP-1表達(dá)也明顯減少。與C組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余三組之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：SB203580能通過(guò)抑制p38MAPK信號(hào)通路,降低炎性因子的表達(dá),抑制破骨細(xì)胞的生成,減輕鈦微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解。因此,我們認(rèn)為,TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信號(hào)通道在微粒誘導(dǎo)的炎性骨溶解中發(fā)揮著重要作用。抑制p38 MAPK信號(hào)通路可能成為抑制炎性骨溶解的新途徑,進(jìn)一步研究p38MAPK信號(hào)通路對(duì)臨床防治人工關(guān)節(jié)無(wú)菌性松動(dòng)具有重要意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R687.4
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本文編號(hào)：1352389
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