發(fā)布時間：2017-12-28 03:01

  本文關鍵詞：ATF-2的表達對非小細胞肺癌細胞增殖和不良預后的影響　出處：《南昌大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 激活轉錄因子-2 磷酸化激活轉錄因子-2 非小細胞肺癌 細胞增殖 不良預后

【摘要】：非小細胞肺癌是全世界最常見的癌癥,全球每年新增病例超120萬。激活轉錄因子-2(activating transcription factor 2,ATF-2)屬于轉錄因子ATF家族蛋白,是轉錄復合體的不可缺少的組成部分。在細胞核或細胞質ATF2的亞細胞定位不同,呈現(xiàn)出雙功能活性致癌或抑癌基因,ATF2的核定位和其致癌功能相關,細胞質定位與其發(fā)揮腫瘤抑制功能相關。本研究主要探討非小細胞肺癌組織中ATF2表達及臨床分期、無病生存率的關聯(lián)情況,同時研究了ATF2在人類非小細胞肺癌細胞系的表達與細胞增殖的相關性,并初步確定ATF2可以成為非小細胞肺癌預后的潛在預測標志物。目的:探討ATF-2蛋白表達水平對非小細胞肺癌細胞增殖和預后的影響。方法:1、采集86例非小細胞肺癌患者的病理切片,免疫組化檢測肺癌組織及癌旁組織ATF-2和pATF-2蛋白的表達情況,并統(tǒng)計分析ATF-2與患者臨床病理學參數(shù)的相關性。2、采集10例非小細胞肺癌術后新鮮肺癌組織和癌旁組織標本,通過qRT-PCR、Western Blot等方法檢測其ATF-2 mRNA和ATF-2蛋白的表達水平。3、shRNA轉染H1975和H1299肺癌細胞系,使其干擾ATF-2基因表達,轉染48h后Western Blot法檢測肺癌細胞系的ATF-2蛋白表達,并檢測H1975和H1299的增殖活性變化。4、通過質粒轉染技術構建穩(wěn)定表達ATF-2蛋白的HBE細胞株,并采用集落形成試驗和WST-8試驗檢測其增殖活性的變化。結果:1.ATF2 mRNA在腫瘤組織比癌旁組織有明顯上調,腫瘤的ATF2蛋白質含量高于癌旁組織。2.ATF2表達與非小細胞肺癌臨床分期有顯著相關性,ATF2表達水平越高,分期越晚。3.ATF2和pATF2在淋巴結轉移的非小細胞癌中的標本和沒有伴隨淋巴轉移的標本組織中陽性表達差別是有顯著性,ATF2和pATF2的高表達是與淋巴結的轉移有密切關系的。4.在非小細胞肺癌標本中存在ATF2高表達的患者,其無病生存時間顯著縮短,ATF2低表達和較長的無病生存時間相關,高p-ATF2表達和生存時間縮短呈顯著相關,和無病生存時間存在極顯著相關。5.ATF2和pATF2表達與患者的年齡、性別、組織大小無顯著相關性。6.pATF2表達主要出現(xiàn)在非小細胞肺癌的細胞核中。細胞質也能夠觀察到分散染色的p-ATF2的表達。在86例患者腫瘤組織中,有65例屬于pATF2高表達(75.6%)。在細胞質和細胞核中,ATF2的表達沒有顯著性差異。腫瘤癌旁正常組織中,ATF2和pATF2的表達沒有顯著性差異(P=0.056)。ATF2對于非小細胞肺癌的預后被觀測到有預測意義,ATF2陽性表達和臨床病理因素如年齡,性別和轉移之間的相關性沒有統(tǒng)計學意義。NSCLC患者細胞核高表達pATF2與腫瘤晚期,腫瘤大小和轉移具有顯著相關性。7.ATF2在非小細胞肺癌細胞株表達陽性,在細胞系H446、H1975H1650,H1299,PC9的陽性表達明顯增高。8.ATF2的siRNA被證實能夠有效的對ATF2的表達進行下調,利用MTT實驗分析,顯示在H1299和H1975細胞中,低表達的ATF2能夠導致細胞生存能力的降低,ATF2的陽性表達能夠促進細胞增殖,而下調ATF2則能夠抑制細胞增殖。9.在HBE細胞株中,ATF2表達水平升高可以促進HBE細胞的增殖生長。結論:ATF2在非小細胞肺癌組織中存在過表達,并與患者的預后存在一定的相關性,有可能成為潛在的預后指標。體外實驗中,ATF2表達上調可以促進肺癌細胞系的增殖,而下調ATF2表達后肺癌細胞系的增殖能力明顯減弱。該研究初步提示ATF2有望成為非小細胞肺癌新的預后因素,尚需進一步的深入研究。
[Abstract]:Non - small cell lung cancer (non-small cell lung cancer) is the most common cancer in the world, with more than 1 million 200 thousand new cases in the world each year. The activation of transcription factor -2 (activating transcription factor 2, ATF-2) belongs to the transcription factor ATF family protein, which is an indispensable component of the transcription complex. The subcellular location of ATF2 in nuclei or cytoplasm is different, showing a bifunctional active carcinogen or tumor suppressor gene. ATF2's nuclear localization is related to its carcinogenesis function. Cytoplasmic localization is related to its tumor inhibition function. This study focuses on non small cell lung cancer ATF2 expression and clinical stage, no correlation between survival rate, and study the correlation between the expression of ATF2 in human NSCLC cell lines and cell proliferation, and determined ATF2 can become a potential predictive biomarkers of non small cell lung cancer prognosis. Objective: To investigate the effect of ATF-2 protein expression on the proliferation and prognosis of non-small cell lung cancer cells. Methods: 1. 86 cases of non-small cell lung cancer were collected for pathological sections. Immunohistochemistry was used to detect the expression of ATF-2 and pATF-2 protein in lung cancer tissues and adjacent tissues. The correlation between ATF-2 and clinicopathological parameters was analyzed statistically. 2. We collected 10 cases of fresh lung cancer and adjacent tissues after operation, and detected the expression level of ATF-2 mRNA and ATF-2 protein by qRT-PCR and Western Blot. 3, shRNA transfected H1975 and H1299 lung cancer cell lines to interfere with ATF-2 gene expression. After transfection of 48h, Western ATF-2 method was used to detect ATF-2 protein expression in lung cancer cell lines, and the proliferation activity of H1975 and H1299 was detected. 4, HBE cell lines expressing ATF-2 protein were constructed by plasmid transfection technique, and colony-forming test and WST-8 test were used to detect the changes of proliferation activity. Results: 1.ATF2 mRNA was significantly up-regulated in tumor tissue than that of para cancer tissue, and the content of ATF2 protein in tumor was higher than that of para cancerous tissue. There is a significant correlation between the expression of 2.ATF2 and the clinical stage of non-small cell lung cancer. The higher the expression of ATF2, the later the stage is. The positive expression of 3.ATF2 and pATF2 in non small cell carcinoma with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis is significant. The high expression of ATF2 and pATF2 is closely related to lymph node metastasis. 4. in patients with non-small cell lung cancer, patients with high expression of ATF2 had significantly shorter disease-free survival time, lower ATF2 expression and longer disease-free survival time. High p-ATF2 expression was significantly correlated with shorter survival time, and had significant correlation with disease-free survival time. There was no significant correlation between the expression of 5.ATF2 and pATF2 and the age, sex and size of the patients. The expression of 6.pATF2 mainly occurs in the nucleus of non small cell lung cancer. The cytoplasm can also be used to observe the expression of the dispersed p-ATF2. Of the 86 patients with tumor tissue, 65 were of high expression of pATF2 (75.6%). There was no significant difference in the expression of ATF2 in the cytoplasm and nucleus. There was no significant difference in the expression of ATF2 and pATF2 (P=0.056) in the normal tissues adjacent to the tumor. ATF2 has a predictive significance for the prognosis of non-small cell lung cancer. There is no significant correlation between ATF2 positive expression and clinicopathological factors, such as age, gender and metastasis. The high expression of pATF2 in the cell nucleus of NSCLC has a significant correlation with the advanced tumor, tumor size and metastasis. The expression of 7.ATF2 was positive in non small cell lung cancer cell lines, and the positive expression of H446, H1975H1650, H1299 and PC9 in the cell lines was significantly higher. 8.ATF2 siRNA proved to be effective on the expression of ATF2 was down regulated by MTT analysis of the experimental results, shown in H1299 and H1975 cells, low expression of ATF2 can reduce the lead to cell viability, the positive expression of ATF2 can promote cell proliferation and downregulation of ATF2 can inhibit cell proliferation. 9. in the HBE cell line, the increase of ATF2 expression level can promote the proliferation and growth of HBE cells. Conclusion: ATF2 is overexpressed in non-small cell lung cancer and has a certain correlation with the prognosis of the patients, and it may be a potential prognostic indicator. In vitro, the up-regulated expression of ATF2 could promote the proliferation of lung cancer cell lines, and the proliferation ability of lung cancer cell lines decreased significantly after the expression of ATF2 was downregulated. This study suggests that ATF2 is expected to be a new prognostic factor for non-small cell lung cancer and needs further in-depth study.
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：1344277