本文關(guān)鍵詞：GABA-谷氨酸系統(tǒng)、糖皮質(zhì)激素受體相關(guān)基因與自殺行為的關(guān)聯(lián)研究　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：自殺是世界性的重大公共衛(wèi)生問題。在美國,每年大約有30,000人死于自殺,而全世界范圍來看,每年大約有100萬人死于自殺。自殺行為是一種自主的、以死亡為目的的復(fù)雜行為障礙,它的預(yù)測、評估、治療及預(yù)防不僅僅是精神疾病學(xué)界,也是全社會的難題之一。自殺的主要風(fēng)險因素是精神障礙。據(jù)估計,90%的自殺行為與某種形式的精神障礙相關(guān)聯(lián)。而在這些精神障礙中,大約60%為抑郁癥,抑郁癥與雙相情感障礙出現(xiàn)自殺行為的終生風(fēng)險相似。由于自殺行為是多因素影響的行為障礙,除精神障礙以外,許多其他的危險因素如心理因素,都與自殺有關(guān)。雖然大部分自殺行為發(fā)生在有精神障礙的個體,但是有精神障礙的病人中卻只有少數(shù)人出現(xiàn)過自殺未遂,出現(xiàn)自殺死亡的更少。抑郁癥患者中僅有不足10%有自殺未遂史,而10%的自殺死亡者從未診斷過精神障礙。精神病學(xué)家認為,自殺行為并不是精神疾病的一種癥狀,而是某種獨立的特質(zhì),當有這種特質(zhì)的人群患有某些精神科疾病或受到重大刺激時,才會出現(xiàn)自殺行為。目前自殺行為僅能通過量表來評估,而高危人群由于害怕受到歧視、或被強制住院、或怕自己的自殺計劃被別人阻礙等原因,而不愿意將自殺意念或計劃透露出來,導(dǎo)致評估結(jié)果不可靠,故而將內(nèi)在的、主觀的量表評估和外在的、客觀的生物檢測結(jié)合在一起才能準確評估自殺行為。最初對自殺的研究主要針對有自殺行為人群的流行病學(xué)調(diào)查以及對最終出現(xiàn)自殺死亡患者的跟蹤報導(dǎo),這些研究提供了重要的初始數(shù)據(jù)。隨后的研究采用死亡患者腦組織分析有自殺行為人群大腦的共同異常表現(xiàn)。腦組織收藏方法的改進為研究大腦的詳細的神經(jīng)生物學(xué)參數(shù)提供了機會,腦組織研究為自殺行為的發(fā)病機制提供了重要的神經(jīng)生物學(xué)數(shù)據(jù)。目前,許多研究認為自殺與血清素能系統(tǒng)、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)和其它神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的異常有關(guān),其中涉及基因多態(tài)性、基因表達及表觀遺傳機制等各方面。研究最多的是血清素系統(tǒng),自殺人群的血清素及其信號傳遞水平改變,且有獨特的基因型和表達模式。總的看來,雖然目前已經(jīng)取得很多研究成果,但是由于靶器官活體組織無法取得、缺乏有用的動物模型以及倫理道德等方面的制約,導(dǎo)致自殺行為的分子機制還不明確。近年來,γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)-谷氨酸系統(tǒng)和糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid receptor,GR)系統(tǒng)在自殺行為分子機制中的作用逐漸受到重視,出現(xiàn)了許多有意義的發(fā)現(xiàn),但目前還缺乏系統(tǒng)的研究綜合分析基因多態(tài)性、基因表達等與自殺行為的關(guān)系。GABA和谷氨酸分別是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的抑制性和興奮性神經(jīng)遞質(zhì),GABA-谷氨酸通路是保證中樞神經(jīng)系統(tǒng)里有足夠的神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的一系列生化過程。神經(jīng)元不能直接通過葡萄糖合成GABA或谷氨酸,突觸前神經(jīng)元釋放GABA或谷氨酸,吸收進入星形膠質(zhì)細胞,然后星形膠質(zhì)細胞再釋放谷氨酰胺作為前體在神經(jīng)元內(nèi)合成GABA或谷氨酸,這就是常見的谷氨酰胺-谷氨酸/GABA循環(huán)。在神經(jīng)元中,谷氨酰胺不僅能產(chǎn)生能源和合成蛋白質(zhì),而且是氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)生物合成的必需前體。既往許多研究提示,GABA-谷氨酸系統(tǒng)與自殺行為有緊密聯(lián)系。精神分裂癥自殺死亡患者聽覺皮層的GABA神經(jīng)元密度降低。絕大部分GABA-谷氨酸系統(tǒng)的組成成分都與自殺行為有某種形式的關(guān)聯(lián)。除此之外,幾乎自殺行為的所有候選內(nèi)表型(沖動-攻擊特質(zhì)、神經(jīng)認知功能損害、應(yīng)激下的皮質(zhì)醇改變等)均與GABA能系統(tǒng)有密切的關(guān)系。許多研究表明,沖動及攻擊特質(zhì)與腦內(nèi)特定區(qū)域的GABA水平有關(guān);也有許多研究發(fā)現(xiàn),GABA能系統(tǒng)功能受損會導(dǎo)致神經(jīng)認知功能損害包括工作記憶、決策能力及反應(yīng)抑制等;還有一系列研究表明,GABA能系統(tǒng)可調(diào)節(jié)HPA軸,改變機體的應(yīng)激反應(yīng)。因此GABA-谷氨酸系統(tǒng)基因可能會參與自殺行為的形成機制。應(yīng)激反應(yīng)系統(tǒng)也和自殺行為有緊密的聯(lián)系,研究發(fā)現(xiàn)HPA軸相關(guān)基因與自殺行為有關(guān)。應(yīng)激引起兒茶酚胺和糖皮質(zhì)激素的分泌,進而激活GR或鹽皮 質(zhì)激素受體。GR通常位于細胞質(zhì)中,但與配體結(jié)合后能被轉(zhuǎn)運到細胞核,參與炎癥反應(yīng)、細胞增殖和靶組織分化。GR激活以后可以快速調(diào)控轉(zhuǎn)錄、活化下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA),以及當皮質(zhì)醇水平在壓力刺激下升高時,介導(dǎo)HPA軸的負反饋調(diào)節(jié)。GR受多種調(diào)控因素的調(diào)節(jié),其中基因單核苷酸多態(tài)性、分子伴侶是兩個重要因素。目前已有研究結(jié)果顯示糖皮質(zhì)激素受體基因(nuclear receptor subfamily 3 group C member 1,NR3C1)的單核苷酸多態(tài)性、分子伴侶FK506結(jié)合蛋白5(FK506 binding protein 5,FKBP5)等導(dǎo)致GR功能障礙的機制包括改變GR的表達、GR與糖皮質(zhì)激素的結(jié)合力、GR的轉(zhuǎn)核活性、GR與目標基因DNA的結(jié)合能力、糖皮質(zhì)激素受體α亞型和糖皮質(zhì)激素受體β亞型的比率等,從而影響HPA軸功能、神經(jīng)可塑性和抑郁行為。FKBP5基因位于人類6號染色體(6p21.31),是GR活動的一個重要的負調(diào)控因子。它是調(diào)節(jié)GR靈敏度的熱休克蛋白90的分子伴侶。FKBP5過度表達可以降低皮質(zhì)醇與GR的親和力,并影響GR的核轉(zhuǎn)運。作為反饋回路的一部分,GR的激活將會增加FKBP5的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達。此外,FKBP5可以通過促進GR的非活性β-異構(gòu)體的核轉(zhuǎn)運而進一步降低GR信號。總體而言,FKBP5是應(yīng)激反應(yīng)的重要基因調(diào)節(jié)器,并能抑制GR活性。近年來,有絲分裂相關(guān)蛋白 2(Spindle and kinetochore-associated protein 2,SKA2;又名 Family with sequence similarity 33,member A,FAM33A)對糖皮質(zhì)激素受體功能的影響也有初步報導(dǎo)。SKA2位于17q22,是一個最近發(fā)現(xiàn)的SKA復(fù)合物成分,是染色體正確分離所必需的成分。SKA2的過度表達可導(dǎo)致GR轉(zhuǎn)錄增加,而降低SKA2的表達將顯著抑制GR轉(zhuǎn)錄,提示了這兩種蛋白之間的功能性相互作用。由于自殺行為和應(yīng)激之間存在密切關(guān)系,而FKBP5、SKA2以及NR3C1是應(yīng)激反應(yīng)體系的重要調(diào)節(jié)劑,因此上述基因在自殺行為中也可能起到重要作用。目前有很多研究發(fā)現(xiàn)GABA-谷氨酸系統(tǒng)及糖皮質(zhì)激素受體系統(tǒng)相關(guān)基因的多態(tài)性及表達水平與自殺行為有關(guān),但基因多態(tài)性是否通過調(diào)節(jié)基因表達影響自殺行為還不清楚�；谧詺⑿袨榈膰鴥�(nèi)外研究現(xiàn)狀,本研究從分子遺傳學(xué)角度對GABA-谷氨酸系統(tǒng)及糖皮質(zhì)激素受體系統(tǒng)相關(guān)基因與自殺行為的關(guān)系進行了初步分析,并分析基因表達在基因多態(tài)性影響自殺行為中的中介作用,同時篩選與自殺行為有關(guān)的平行證據(jù)最多的基因,并擬在后續(xù)研究中將這些生物標記物與臨床評定量表相結(jié)合,用于預(yù)測及評估精神科患者的自殺行為、篩查自殺高危人群,并為藥物治療提供生物靶標。目的:探索GABA能和谷氨酸能信號系統(tǒng)的24種基因及與糖皮質(zhì)激素受體相關(guān)的3個基因FKBP5、SKA2及NR3C1的基因型、基因表達與自殺行為的關(guān)系,分析是否存在表達數(shù)量性狀位點(Expression quantitative trait locus,eQTL),初步篩查自殺行為的生物標記物。方法:第一部分,在276例活體樣本(86例自殺未遂、190非自殺未遂)及209例死亡樣本(121例自殺死亡、88例非自殺死亡)中,采用Logistic回歸分析探索GABA-谷氨酸系統(tǒng)的24種基因(4種轉(zhuǎn)運體、4種酶、16種受體)的119個候選單核苷酸多態(tài)性(SNP)以及糖皮質(zhì)激素受體相關(guān)基因FKBP5、SKA2和NR3C1的98個SNP的基因型與自殺行為之間的關(guān)系,均經(jīng)年齡和性別調(diào)整;第二部分,在59例死亡樣本(21例抑郁癥+自殺、9例抑郁癥及29例對照)的腦組織背外側(cè)前額葉皮層,采用Robust回歸分析探索每個基因的RNA表達水平在自殺vs非自殺的差異,均經(jīng)年齡、性別和RNA完整性(RNA Integrity Number,RIN)調(diào)整;第三部分,在網(wǎng)上數(shù)據(jù)(腦eQTL年鑒)中(www.braineac.org),查找本研究第一部分中與自殺行為有關(guān)的SNP與相應(yīng)基因的前額葉皮層RNA表達水平之間的關(guān)系。結(jié)果:1、在GABA-谷氨酸系統(tǒng)及糖皮質(zhì)激素受體系統(tǒng)中,7個基因的8個多態(tài)性位點與自殺死亡相關(guān)。分別為:rs6447520(GABRA4)、rs2808536(GABBR2)、rs424740(GABRG2)、rs6849345(GRIA2)、rs4780886(GRIN2A)、rs1062246(SLC6A1)、rs8082544(SKA2)及 rs7502947(SKA2)。2、在GABA-谷氨酸系統(tǒng)及糖皮質(zhì)激素受體系統(tǒng)中,8個基因的15個多態(tài)性位點與自殺未遂相關(guān)。分別為:rs6447520(GABRA4)、rs10836356(SLC1A2)、rs1529461(SLC1A3)、rs13035504(GLS)、rs2236418(GAD2)、rs9296158(FKBP5)、rs3777747(FKBP5)、rs4713902(FKBP5)、rs7757037(FKBP5)、rs737054(FKBP5)、rs12945875(SKA2)、rs8067682(SKA2)、rs9380529(FKBP5)、rs9911583(SKA2)及rs9324924(NR3C1)。3、因樣本量受限,本研究未能采用mediation analysis證明eQTL的存在。但是,GABRG2基因的轉(zhuǎn)錄本表達降低(P = 0.01)及其SNPrs424740AA基因型(P = 0.03)均與自殺死亡有關(guān),同時其AA基因型攜帶者前額皮層的基因表達降低(p = 0.016、0.04)。該結(jié)論強烈提示了 rs424740是eQTL的可能,也反映了 GABRG2基因與自殺行為的關(guān)系,有必要在更大的樣本中進一步研究。4、3種GABAA受體亞型的RNA轉(zhuǎn)錄本在自殺死亡組表達降低,分別為:GABRB1-001、GABRB3-006、GABRG2-003。5、FKBP5單倍型(結(jié)構(gòu):rs3800373、rs7757037;頻率=47%)與自殺未遂風(fēng)險增加有關(guān)(OR=1.58,T = 6.03,p值=0.014),攜帶單倍型AA的個體有更高的自殺未遂風(fēng)險。6、NR3C1基因的mRNA轉(zhuǎn)錄本ENST00000394466(NR3C1-006)在自殺死亡腦組織中低表達(B =-0.48,SE = 0.12,T =-4.02,多重檢驗調(diào)整后P值=0.004)。結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)了 GABA-谷氨酸系統(tǒng)及糖皮質(zhì)激素受體系統(tǒng)相關(guān)基因中與自殺行為相關(guān)的許多獨立證據(jù),證實了 GABA-谷氨酸系統(tǒng)及糖皮質(zhì)激素受體系統(tǒng)在自殺行為中的重要作用,本研究的初步結(jié)論反映了 GABRG2基因與自殺行為的關(guān)系,而且明確了 FKBP5單倍型與自殺未遂風(fēng)險有關(guān),還發(fā)現(xiàn)NR3C1基因前額皮層表達與自殺有關(guān),進一步證實了自殺行為的HPA軸功能紊亂。
[Abstract]:Suicide is a major public health problem in the world. In the United States, about 30000 people die a year from suicide, and around the world, about 1 million people die a year from suicide. Suicidal behavior is an autonomous and complex behavioral disorder with the purpose of death. Its prediction, evaluation, treatment and prevention are not only the academic field of mental disease, but also one of the difficult problems of the whole society. The main risk factor for suicide is mental disorder. It is estimated that 90% of suicides are associated with some form of mental disorder. Of these mental disorders, about 60% of them are depression, and depression is similar to the lifetime risk of suicide in bipolar disorder. In addition to mental disorders, many other risk factors, such as psychological factors, are associated with suicide because of the multiple factors affected by suicide. Although most suicidal behaviors occur in individuals with mental disorders, only a few people with mental disorders have attempted suicide and fewer suicide cases. Only less than 10% of the patients with depression had a history of attempted suicide, while 10% of those who died of suicide had never diagnosed mental disorders. Psychiatrists believe that suicidal behavior is not a symptom of mental illness, but rather an independent trait. When a person with this trait suffers from certain psychiatric disorders or is subject to major stimulation, suicidal behavior will occur. At present can only be evaluated by Dutch act behavior scale, and high risk population because of fear of discrimination, or forced hospitalization, or if their plan was obstructing others Dutch act reasons, rather than ideas or plans Dutch act revealed, the evaluation result is not reliable, so the internal and subjective scale biological evaluation external, objective and accurate assessment of behavior detection based on Dutch act together to. The research on suicide is mainly focused on the epidemiological survey of suicidal behavior and the follow-up reports of the final suicide deaths. These studies provide important initial data. The subsequent study used the brain tissue analysis of death patients to identify the common abnormal manifestations of the brain in the people who had committed suicide. The improvement of brain tissue collection provides an opportunity to study the detailed neurobiological parameters of brain. Brain tissue research provides important neurobiological data for the pathogenesis of suicidal behavior. At present, many studies believe that suicide is related to the abnormality of serotonin system, neuroendocrine system and other neurotransmitter systems, including gene polymorphism, gene expression and epigenetic mechanism. The most research is the serotonin system, the serotonin and its signal transmission level in the suicide population, and the unique genotypes and expression patterns. Generally speaking, although many research achievements have been achieved, the molecular mechanism of suicidal behavior is not clear due to the fact that target organ organ can not be acquired, lack of useful animal models and ethics. In recent years, GABA (gamma -aminobutyricacid, GABA) - glutamate system and glucocorticoid receptor (Glucocorticoid receptor GR) system in Dutch act behavior of the molecular mechanism for increasing attention, there are many interesting discoveries, but there is still a lack of systematic comprehensive analysis of gene polymorphism and gene expression the relationship between behavior and Dutch act. GABA and glutamate are the major inhibitory and excitatory neurotransmitters in the mammalian central nervous system, respectively. The GABA- glutamate pathway is a series of biochemical processes that ensure enough neurotransmitters in the central nervous system. Neurons can not directly through the synthesis of glucose GABA or glutamate release from the presynaptic neuron GABA or glutamate, absorbed into astrocytes, and astrocytes to release glutamine as a precursor in the synthesis of GABA or glutamate neurons, which is a common glutamine glutamate /GABA cycle. In neurons, glutamine not only produces energy and synthetic proteins, but also is a necessary precursor for the biosynthesis of amino acid neurotransmitters. Many previous studies have suggested that the GABA- glutamate system is closely associated with suicide. The density of GABA neurons in the auditory cortex was reduced in patients with schizophrenic suicide deaths. Most of the components of the GABA- glutamic acid system are associated with some form of suicide. Besides, almost all candidate phenotypes, including impulse attack trait, neurocognitive impairment, cortisol changes under stress, are closely related to GABA energy system. Many studies show that the specific characteristics and regional brain impulses and attack within the GABA level; many studies have also found that GABA can cause system impaired neurocognitive impairment including working memory, decision-making ability and response inhibition; and a series of studies show that GABA system can regulate the HPA axis, change the body's stress response. Therefore, the gene of GABA- glutamate system may be involved in the formation mechanism of suicidal behavior. The stress response system is also closely related to suicidal behavior, and the study found that the HPA axis related genes are associated with suicide. Stress causes the secretion of catecholamine and glucocorticoid, and then activates GR or corticosteroid receptor. GR is usually located in the cytoplasm, but it can be transported to the nucleus after binding with the ligand and participates in the inflammatory response, cell proliferation and target tissue differentiation. GR activation can regulate transcription and activation of hypothalamus pituitary adrenal axis (HPA) rapidly, and mediate the negative feedback regulation of HPA axis when cortisol level increases under pressure stimulation. GR is regulated by a variety of regulatory factors, in which the single nucleotide polymorphisms of genes and molecular chaperone are two important factors. At present, the results of the study show the glucocorticoid receptor gene (nuclear receptor subfamily 3 group C member)
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R749

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本文編號：1344254