本文關(guān)鍵詞：心速寧膠囊的物質(zhì)基礎(chǔ)研究　出處：《北京中醫(yī)藥大學(xué)》2017年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：心速寧膠囊由黃連、半夏、茯苓、枳實(shí)、常山、蓮子心、苦參、青蒿、人參、麥冬、甘草十一味中藥組成,是臨床用于治療痰熱擾心型心律失常(早搏)的有效驗(yàn)方,是在古方黃連溫膽湯(《六因條辨》)的基礎(chǔ)上化裁而成,2005年被國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)為新藥上市。隨著化藥抗心律失常局限性的凸顯(在抗心律失常的同時(shí)也可能致心律失常),以心速寧膠囊為代表的中藥由于其多離子通道阻滯、非離子通道調(diào)節(jié)方面抗心律失常的顯著療效越來(lái)越得到臨床認(rèn)可。近期開(kāi)展的循證醫(yī)學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)心速寧膠囊治療痰熱擾心型心律失常(早搏)臨床療效確切,但其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機(jī)制和質(zhì)量控制研究尚不深入。本論文以心速寧膠囊為研究對(duì)象,應(yīng)用現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù),開(kāi)展了心速寧膠囊主含化學(xué)成分研究、整體化學(xué)輪廓表征、分子作用機(jī)制推測(cè),并在此基礎(chǔ)上初步建立了關(guān)聯(lián)功效、定性定量結(jié)合的質(zhì)量控制方法。首先,對(duì)心速寧膠囊所含的主含化學(xué)成分進(jìn)行研究。綜合運(yùn)用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、SephadexLH-20柱色譜以及反相HPLC等多種色譜學(xué)分離手段,從中分離獲得22個(gè)單體成分,利用理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜技術(shù)(1H-NMR,13C-NMR等)鑒定了所有22個(gè)化合物的結(jié)構(gòu),分別為:小檗堿,胡蘿卜苷,苦參查爾酮,黃連堿,二氫小檗堿,二氫黃連堿,橙皮苷,藥根堿,異甘草素,苦參新醇O,苦參堿,槐果堿,香豆素,N-反式阿魏�；野�,甘草素,川陳皮素,桔皮素,8-oxyberberrubine,4-(2-hydroxy-vinyl)-benzene-1,2-dio1,5-去甲川陳皮素,東莨菪亭,β-谷甾醇。其中5個(gè)化學(xué)成分來(lái)自組方藥材黃連,4個(gè)化學(xué)成分來(lái)自組方藥材枳實(shí),4個(gè)化學(xué)成分來(lái)自組方藥材苦參,2個(gè)化學(xué)成分來(lái)自組方藥材甘草,還有7個(gè)化學(xué)成分來(lái)自其它組方藥材。針對(duì)方中處方量最低的特色藥味蓮子心開(kāi)展主含化學(xué)成分研究,分離鑒定4個(gè)單體成分,分別為:(1R,1'R)氧化甲基蓮心堿,(1R,1'R)甲基蓮心堿,蓮心堿,異蓮心堿,其中(1R,1'R)氧化甲基蓮心堿為未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的新化合物。應(yīng)用液相色譜-線性離子阱-軌道阱串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS),對(duì)心速寧膠囊的整體化學(xué)輪廓進(jìn)行表征和成分推測(cè)。選用Welch XtimateC18柱(4.6 ×250mm,5 μm),以乙腈-0.2%氨水和0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,電噴霧線性離子阱-軌道阱串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-LTQ-Orbitrap-MS/MS)正、負(fù)離子模式檢測(cè),利用準(zhǔn)分子離子峰、碎片離子等信息,通過(guò)文獻(xiàn)比對(duì),從心速寧膠囊中共識(shí)別了 109個(gè)化合物,其中包括38個(gè)生物堿類(lèi)成分,46個(gè)黃酮類(lèi),12個(gè)三萜皂苷,6個(gè)香豆素類(lèi),1個(gè)倍半萜內(nèi)酯,1個(gè)氨基酸,5個(gè)未知成分。其中16個(gè)成分經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)品直接比對(duì),確切確定了結(jié)構(gòu),驗(yàn)證了基于液相色譜-線性離子阱-軌道阱串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)推斷化學(xué)成分的可行性和可信度。在化學(xué)成分研究和基于HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS技術(shù)表征心速寧膠囊的化學(xué)輪廓基礎(chǔ)上,建立心速寧膠囊化學(xué)成分庫(kù),通過(guò)化學(xué)相似性進(jìn)行靶標(biāo)預(yù)測(cè),提取相似性得分(Similarscore)大于0.6的相似藥物及其對(duì)應(yīng)的靶標(biāo),作為心速寧膠囊作用的潛在靶標(biāo)。同時(shí),通過(guò)DrugBank和OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)等,以心律失常和相關(guān)癥狀(心悸、眩暈、口腔干燥),構(gòu)建疾病與癥狀相關(guān)的靶標(biāo)庫(kù)。再通過(guò)PPI數(shù)據(jù)庫(kù),分別構(gòu)建心速寧膠囊"作用潛在靶標(biāo)-心律失常相關(guān)靶標(biāo)" PPI網(wǎng)絡(luò)、心速寧膠囊"作用潛在靶標(biāo)-心悸相關(guān)靶標(biāo)" PPI網(wǎng)絡(luò)、心速寧膠囊"作用潛在靶標(biāo)-眩暈相關(guān)靶標(biāo)" PPI網(wǎng)絡(luò)、心速寧膠囊"作用潛在靶標(biāo)-口腔干燥相關(guān)靶標(biāo)"PPI網(wǎng)絡(luò)。最后,通過(guò)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)特征(Degree、Closeness、Betweenness、Coreness)進(jìn)行分析,篩選心速寧膠囊能作用于心律失常以及相關(guān)心悸、眩暈、口腔干燥癥狀的35個(gè)關(guān)鍵靶標(biāo)(CHRM1、CYSLTR1、NFKB1、TNF、DRD2、ESR1、HTR1A、OPRK1、OXTR、PPARA、PTGER3、SSTR2、SSTR3、ANXAI、AR、BCL2、AGTR1、DRD4、HTR2A、PTGS2、HTR2B、MAPK14、EDNRA、TP53等)。關(guān)鍵靶標(biāo)主要參與以下的通路:(1)作用于心律失常相關(guān)生物學(xué)通路,如多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝通路,從而參與調(diào)節(jié)心腦血管疾病患者體質(zhì)虛弱、心衰等癥狀。(2)參與氧化磷酸化、無(wú)氧糖酵解、脂肪酸合成/降解等通路,為機(jī)體提供能量,緩解心腦血管疾病進(jìn)展中的缺血缺氧癥狀;參與血管新生和血管平滑肌收縮,與緩解缺血癥狀有關(guān)。(3)參與神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)相關(guān)通路,調(diào)控多條免疫通路,從而參與增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等來(lái)發(fā)揮治療心律失常的作用。在此基礎(chǔ)上,重點(diǎn)關(guān)注已分得的化合物實(shí)體,其中14個(gè)成分能與關(guān)鍵靶標(biāo)結(jié)合,如下:5-去甲川陳皮素、巴馬汀、N-反式阿魏�；野�、橙皮苷、川陳皮素、東茛菪亭、甘草素、胡蘿卜苷、槐果堿、桔皮素、苦參查爾酮、香豆素(coumarin,Comp.13),小檗堿、異甘草素。運(yùn)用高效液相色譜法,以Welch Xtimate C18色譜柱(4.6×250mm,5μm)為分析柱,乙腈-甲酸水(0.2%氨水,0.2%甲酸)溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫,流速為1.0 m L/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm,建立心速寧膠囊HPLC指紋圖譜,該法專(zhuān)屬性、精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性良好。參考相關(guān)技術(shù)要求和心速寧膠囊HPLC指紋圖譜實(shí)際情況,指定共有峰29個(gè),并通過(guò)對(duì)照品比對(duì)指認(rèn)了其中12個(gè)色譜峰。運(yùn)用"中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件(2004A版)"對(duì)10批市售制劑進(jìn)行相似度評(píng)價(jià),10批市售制劑的指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜的相似度值在0.98～0.997之間。通過(guò)單味藥和復(fù)方指紋圖譜的相似度分析,以黃連、枳實(shí)對(duì)全方色譜圖的貢獻(xiàn)率最大,二者均為0.21,半夏,蓮子心,甘草的貢獻(xiàn)率最小,分別是0.02,0.04和0.06。參照"中藥質(zhì)量標(biāo)志物"的選擇方法,考慮大生產(chǎn)實(shí)際,以小檗堿、巴馬汀、橙皮苷為指標(biāo)成分,建立心速寧膠囊多指標(biāo)成分含量測(cè)定方法,色譜條件如上述,通過(guò)線性考察、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,方法穩(wěn)定可靠,3種成分加樣回收率分別為100.59%,100.41%,99.71%。本論文以心速寧膠囊化學(xué)成分研究為基礎(chǔ),通過(guò)液質(zhì)技術(shù),對(duì)心速寧膠囊的整體化學(xué)輪廓進(jìn)行了表征和成分推斷,對(duì)所推斷的結(jié)構(gòu),應(yīng)用靶點(diǎn)預(yù)測(cè)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法,推測(cè)了心速寧膠囊起效的可能分子機(jī)制和活性成分,結(jié)合心速寧膠囊化學(xué)成分和指紋圖譜研究的結(jié)果,初步建立了關(guān)聯(lián)功效、定性定量結(jié)合的質(zhì)量控制方法。論文為全面揭示心速寧膠囊的藥效物質(zhì)、作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ),建立的質(zhì)量控制方法較現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)更具科學(xué)性,提升了產(chǎn)品的科學(xué)內(nèi)涵,為其他復(fù)方中成藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究和標(biāo)準(zhǔn)提升提供了借鑒。
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R286.0
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本文編號(hào)：1329532