本文關鍵詞：心速寧膠囊的物質基礎研究　出處：《北京中醫(yī)藥大學》2017年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 心速寧膠囊 化學成分 網絡藥理學 關聯(lián)功效的定性和定量質控方法

【摘要】：心速寧膠囊由黃連、半夏、茯苓、枳實、常山、蓮子心、苦參、青蒿、人參、麥冬、甘草十一味中藥組成,是臨床用于治療痰熱擾心型心律失常(早搏)的有效驗方,是在古方黃連溫膽湯(《六因條辨》)的基礎上化裁而成,2005年被國家食品藥品監(jiān)督管理局批準為新藥上市。隨著化藥抗心律失常局限性的凸顯(在抗心律失常的同時也可能致心律失常),以心速寧膠囊為代表的中藥由于其多離子通道阻滯、非離子通道調節(jié)方面抗心律失常的顯著療效越來越得到臨床認可。近期開展的循證醫(yī)學研究已經證實心速寧膠囊治療痰熱擾心型心律失常(早搏)臨床療效確切,但其化學物質基礎、作用機制和質量控制研究尚不深入。本論文以心速寧膠囊為研究對象,應用現(xiàn)代先進技術,開展了心速寧膠囊主含化學成分研究、整體化學輪廓表征、分子作用機制推測,并在此基礎上初步建立了關聯(lián)功效、定性定量結合的質量控制方法。首先,對心速寧膠囊所含的主含化學成分進行研究。綜合運用硅膠柱色譜、ODS柱色譜、SephadexLH-20柱色譜以及反相HPLC等多種色譜學分離手段,從中分離獲得22個單體成分,利用理化性質和現(xiàn)代波譜技術(1H-NMR,13C-NMR等)鑒定了所有22個化合物的結構,分別為:小檗堿,胡蘿卜苷,苦參查爾酮,黃連堿,二氫小檗堿,二氫黃連堿,橙皮苷,藥根堿,異甘草素,苦參新醇O,苦參堿,槐果堿,香豆素,N-反式阿魏酰基酪胺,甘草素,川陳皮素,桔皮素,8-oxyberberrubine,4-(2-hydroxy-vinyl)-benzene-1,2-dio1,5-去甲川陳皮素,東莨菪亭,β-谷甾醇。其中5個化學成分來自組方藥材黃連,4個化學成分來自組方藥材枳實,4個化學成分來自組方藥材苦參,2個化學成分來自組方藥材甘草,還有7個化學成分來自其它組方藥材。針對方中處方量最低的特色藥味蓮子心開展主含化學成分研究,分離鑒定4個單體成分,分別為:(1R,1'R)氧化甲基蓮心堿,(1R,1'R)甲基蓮心堿,蓮心堿,異蓮心堿,其中(1R,1'R)氧化甲基蓮心堿為未見文獻報道的新化合物。應用液相色譜-線性離子阱-軌道阱串聯(lián)質譜技術(HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS),對心速寧膠囊的整體化學輪廓進行表征和成分推測。選用Welch XtimateC18柱(4.6 ×250mm,5 μm),以乙腈-0.2%氨水和0.1%甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫,電噴霧線性離子阱-軌道阱串聯(lián)質譜(ESI-LTQ-Orbitrap-MS/MS)正、負離子模式檢測,利用準分子離子峰、碎片離子等信息,通過文獻比對,從心速寧膠囊中共識別了 109個化合物,其中包括38個生物堿類成分,46個黃酮類,12個三萜皂苷,6個香豆素類,1個倍半萜內酯,1個氨基酸,5個未知成分。其中16個成分經與標準品直接比對,確切確定了結構,驗證了基于液相色譜-線性離子阱-軌道阱串聯(lián)質譜技術推斷化學成分的可行性和可信度。在化學成分研究和基于HPLC-LTQ-Orbitrap-MS/MS技術表征心速寧膠囊的化學輪廓基礎上,建立心速寧膠囊化學成分庫,通過化學相似性進行靶標預測,提取相似性得分(Similarscore)大于0.6的相似藥物及其對應的靶標,作為心速寧膠囊作用的潛在靶標。同時,通過DrugBank和OMIM數據庫等,以心律失常和相關癥狀(心悸、眩暈、口腔干燥),構建疾病與癥狀相關的靶標庫。再通過PPI數據庫,分別構建心速寧膠囊"作用潛在靶標-心律失常相關靶標" PPI網絡、心速寧膠囊"作用潛在靶標-心悸相關靶標" PPI網絡、心速寧膠囊"作用潛在靶標-眩暈相關靶標" PPI網絡、心速寧膠囊"作用潛在靶標-口腔干燥相關靶標"PPI網絡。最后,通過網絡拓撲結構特征(Degree、Closeness、Betweenness、Coreness)進行分析,篩選心速寧膠囊能作用于心律失常以及相關心悸、眩暈、口腔干燥癥狀的35個關鍵靶標(CHRM1、CYSLTR1、NFKB1、TNF、DRD2、ESR1、HTR1A、OPRK1、OXTR、PPARA、PTGER3、SSTR2、SSTR3、ANXAI、AR、BCL2、AGTR1、DRD4、HTR2A、PTGS2、HTR2B、MAPK14、EDNRA、TP53等)。關鍵靶標主要參與以下的通路:(1)作用于心律失常相關生物學通路,如多種營養(yǎng)物質的代謝通路,從而參與調節(jié)心腦血管疾病患者體質虛弱、心衰等癥狀。(2)參與氧化磷酸化、無氧糖酵解、脂肪酸合成/降解等通路,為機體提供能量,緩解心腦血管疾病進展中的缺血缺氧癥狀;參與血管新生和血管平滑肌收縮,與緩解缺血癥狀有關。(3)參與神經系統(tǒng)調節(jié)相關通路,調控多條免疫通路,從而參與增強機體免疫功能等來發(fā)揮治療心律失常的作用。在此基礎上,重點關注已分得的化合物實體,其中14個成分能與關鍵靶標結合,如下:5-去甲川陳皮素、巴馬汀、N-反式阿魏酰基酪胺、橙皮苷、川陳皮素、東茛菪亭、甘草素、胡蘿卜苷、槐果堿、桔皮素、苦參查爾酮、香豆素(coumarin,Comp.13),小檗堿、異甘草素。運用高效液相色譜法,以Welch Xtimate C18色譜柱(4.6×250mm,5μm)為分析柱,乙腈-甲酸水(0.2%氨水,0.2%甲酸)溶液為流動相進行梯度洗脫,流速為1.0 m L/min,檢測波長為254 nm,建立心速寧膠囊HPLC指紋圖譜,該法專屬性、精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性良好。參考相關技術要求和心速寧膠囊HPLC指紋圖譜實際情況,指定共有峰29個,并通過對照品比對指認了其中12個色譜峰。運用"中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件(2004A版)"對10批市售制劑進行相似度評價,10批市售制劑的指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度值在0.98～0.997之間。通過單味藥和復方指紋圖譜的相似度分析,以黃連、枳實對全方色譜圖的貢獻率最大,二者均為0.21,半夏,蓮子心,甘草的貢獻率最小,分別是0.02,0.04和0.06。參照"中藥質量標志物"的選擇方法,考慮大生產實際,以小檗堿、巴馬汀、橙皮苷為指標成分,建立心速寧膠囊多指標成分含量測定方法,色譜條件如上述,通過線性考察、精密度、重復性、穩(wěn)定性等實驗驗證,方法穩(wěn)定可靠,3種成分加樣回收率分別為100.59%,100.41%,99.71%。本論文以心速寧膠囊化學成分研究為基礎,通過液質技術,對心速寧膠囊的整體化學輪廓進行了表征和成分推斷,對所推斷的結構,應用靶點預測和網絡藥理學方法,推測了心速寧膠囊起效的可能分子機制和活性成分,結合心速寧膠囊化學成分和指紋圖譜研究的結果,初步建立了關聯(lián)功效、定性定量結合的質量控制方法。論文為全面揭示心速寧膠囊的藥效物質、作用機制奠定了基礎,建立的質量控制方法較現(xiàn)有標準更具科學性,提升了產品的科學內涵,為其他復方中成藥的藥效物質基礎研究和標準提升提供了借鑒。
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R286.0
，

本文編號：1329532