本文關鍵詞：腫瘤相關抗原GPC3特異性細胞免疫誘導進行原發(fā)性肝癌干預的研究

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【摘要】：原發(fā)性肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)是我國最為常見的惡性腫瘤之一,大量臨床與流行病學研究資料表明:慢性乙肝病毒(Hepatititis B virus,HBV)感染是我國HCC發(fā)生的主要病因。已采取的乙肝疫苗免疫策略有效控制了 HBV的新發(fā)感染,但目前我國成年人群基本未接種乙肝疫苗,慢性HBV感染率仍高達5%以上;臨床上采用的抗病毒療法,雖然在部分患者體內(nèi)能夠有效控制HBV病毒復制,但是仍難以完全清除病毒,HCC發(fā)生風險仍然較高。目前采取的主要干預手段是對HCC發(fā)生的高危人群進行定期篩查,這一效果存在很大爭議。因此,有必要研發(fā)針對HCC發(fā)生高危人群的其他相關干預手段�？乖禺愋訡D8+T細胞參與和介導的細胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)是HCC的一種重要腫瘤相關抗原。據(jù)統(tǒng)計,74%的HCC患者腫瘤組織高表達GPC3蛋白。有臨床研究表明:HCC總生存率高的患者,其體內(nèi)GPC3特異性CD8+T細胞比例顯著增加。我們推測:在肝癌發(fā)生的高危人群中,通過誘導針對腫瘤相關抗原GPC3蛋白的特異性細胞免疫,增加抗原特異性CD8+T細胞比例,可清除GPC3表達的癌變肝細胞,有助于預防/延緩原發(fā)性肝癌發(fā)生。盡管正常成人肝細胞不表達GPC3蛋白,但它作為一種胚胎抗原,在胚胎發(fā)育時期表達于胎盤、胎肝和胎腎等組織中。因此,一般情況下腫瘤細胞高表達的GPC3抗原本身難以誘導抗原特異性細胞免疫產(chǎn)生。本研究以誘導GPC3抗原特異性CD8+T細胞參與為主的細胞免疫,清除GPC3表達的癌變的肝細胞,從而預防HCC的發(fā)生。我們過去的研究顯示:TLR7/8激活劑(CL097)通過活化單核細胞源性的抗原提呈細胞,主要是單核源性的樹突狀細胞(moDCs)可有效增強蛋白疫苗的免疫原性,從而誘導出抗原特異性免疫應答。本研究中,利用HPLC/MS技術分析顯示:聯(lián)合CL097的蛋白疫苗能夠顯著上調(diào)moDCs中的MHC-I α鏈分子以及MHC-I類抗原提呈途徑中TAP1/TAP2,Tapasin等與抗原胞內(nèi)轉運相關的蛋白分子的表達,從而為誘導抗原特異性CD8+T細胞的產(chǎn)生奠定了分子基礎。我們以TLR7/8激活劑(CL097)作為疫苗佐劑,根據(jù)moDCs表面高表達甘露糖受體的特性,合成了具有moDCs靶向性納米材料作為抗原遞送載體、并包裹CL097為佐劑的GPC3復合納米疫苗:簡稱為LP/Man-GPC3-CL097。研究結果顯示:這一復合納米疫苗LP/Man-GPC3-CL097可非常顯著增加MHC-I分子的細胞膜表達,在吞噬相關抗原后,能促進moDC通過早期內(nèi)涵體-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體途徑對抗原進行加工提呈,避免溶酶體對抗原的過度降解,從而可保證有效產(chǎn)生MHC-I/GPC3多肽復合物。上調(diào)moDC表面CD83、CCR7等分子的表達,促進DC成熟和淋巴結歸巢能力。皮下注射LP/Man-GPC3-CL097后,能促進CD11c+細胞對抗原的攝取,并能夠快速、有效靶向至局部引流淋巴結及肝臟組織內(nèi)。在LP/Man-GPC3-CL097免疫的正常C57BL/6J小鼠體內(nèi),可檢測到GPC3特異性IFN-γ產(chǎn)生型CD8+T細胞,肝臟浸潤的T淋巴細胞分泌大量IFN-y和顆粒酶B等效應分子。體外殺傷實驗顯示:這些浸潤的T細胞能有效殺傷GPC3表達型小鼠肝癌細胞系Hepa1-6。進而,我們探討了該復合型疫苗在預防原發(fā)性肝癌發(fā)生中的作用。以C57BL/6背景的雄性HBV轉基因(HBV-Tg)小鼠為研究材料,于小鼠出生后2周齡時,按每克體重腹腔注射25μg二乙基亞硝胺(DEN,diethylnitrosamine),誘導肝細胞癌變,在小鼠8周齡尚未形成顯微鏡下可見的肝癌細胞團時,每隔兩周皮下注射LP/Man-GPC3-CL097進行免疫,以LP/Man作為對照組,連續(xù)免疫4次。在小鼠22周齡時處死小鼠,結果顯示LP/Man-GPC3-CL097免疫組(n=9)小鼠肝臟腫瘤數(shù)目顯著減少(P0.01),特別是結節(jié)直徑≤1mm(P0.05)的腫瘤數(shù)量顯著減少;進一步分析發(fā)現(xiàn):聯(lián)合CL097的GPC3復合疫苗免疫后,小鼠肝臟浸潤的IFN-γ產(chǎn)生型CD8+T細胞比例增加,且分泌的IFN-γ和顆粒酶B含量也明顯升高。結論:以TLR7/8激活劑為佐劑的GPC3復合型納米疫苗能夠促進樹突狀細胞對抗原的攝取及樹突狀細胞的成熟,誘導GPC3特異性細胞免疫,在DEN誘導的HBV轉基因背景的小鼠原發(fā)性肝癌模型中能夠有效預防/延緩原發(fā)性肝癌的發(fā)生。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：1307637