本文關(guān)鍵詞：人感染圓環(huán)病毒的血清流行病學(xué)研究及新型抗圓環(huán)病毒疫苗的研制

  更多相關(guān)文章： 病毒感染 豬圓環(huán)病毒 血清流行病學(xué) 特異性抗體 疫苗 衣殼蛋白 誘餌表位 中和表位

【摘要】：WHO的統(tǒng)計(jì)資料表明,近40年來(lái),超過(guò)75%的人類新發(fā)傳染病都是由來(lái)源于動(dòng)物的病原體所引起的,這些病原體包括人類免疫缺陷病毒,埃博拉病毒,西尼羅河病毒,尼帕病毒和漢坦病毒等。近年來(lái),人感染H5N1型高致病性禽流感、嚴(yán)重急性呼吸窘迫綜合征(SARS)、人感染H7N9禽流感、H1N1甲型流感和埃博拉出血熱等在世界范圍內(nèi)的暴發(fā)與流行,都嚴(yán)重威脅著人類的健康與生命安全,給社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成了巨大的損失,已經(jīng)成為影響全球公共衛(wèi)生安全的重大問(wèn)題。因此,由動(dòng)物源性的病原體感染所引起的人類疾病受到了越來(lái)越多的關(guān)注。豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV),是一種在豬群感染率達(dá)到52.8%~100%、可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的、已知世界上最小的動(dòng)物病毒之一。普遍認(rèn)為PCV僅能感染豬群,但是我們?cè)谥袊?guó)北方成年人群血清中也檢測(cè)到了該病毒的抗體,提示這種原本僅在豬群之間傳播的病毒很可能已經(jīng)跨越種屬間差異,轉(zhuǎn)化為可以感染人類的病毒,成為一種新的潛在的人獸共患病病原體。應(yīng)對(duì)病毒感染最有效的措施是免疫預(yù)防,但由于許多新發(fā)傳染病往往不被人所了解,未能及時(shí)研制出疫苗,使得感染不能被有效控制,這使預(yù)防工作開展的十分困難。目的:本研究通過(guò)流行病學(xué)分析,試圖揭示圓環(huán)病毒感染人群的可能相關(guān)因素,并以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠及豬為模型,研制一種有效的預(yù)防圓環(huán)病毒感染的疫苗,為今后控制這類病毒感染性疾病的發(fā)生發(fā)展及采取及時(shí)有效的預(yù)防措施提供依據(jù)。方法:本研究在吉林省范圍內(nèi)共收集了16831例血清樣本,隨機(jī)抽取1267例血清樣本用間接ELISA法檢測(cè)血清中PCV Ig G特異性抗體,估計(jì)人群中PCV的感染率;采用logistic回歸模型分析PCV感染及其與可能相關(guān)因素之間的關(guān)聯(lián)性,初步分析PCV感染的可能因素。利用基因克隆技術(shù),以目前流行基因型PCV2b衣殼蛋白作為疫苗的抗原,考慮到PCV2b衣殼蛋白上的誘餌表位對(duì)機(jī)體防御病毒的不利影響,我們用PCV2b衣殼蛋白上的中和表位替換誘餌表位,觀察誘餌表位對(duì)衣殼蛋白結(jié)構(gòu)、刺激中和病毒抗體產(chǎn)生方面的影響,利用PCV2b衣殼蛋白能自組裝成病毒樣顆粒(VLP)的特點(diǎn),研制開發(fā)一種新型重組亞單位疫苗,探討其在抗病毒感染方面的作用。結(jié)果:1.在我國(guó)北方地區(qū)吉林省范圍內(nèi)檢測(cè)的1267例成年人血清樣本中,共檢出PCV特異性抗體陽(yáng)性者63例,PCV抗體陽(yáng)性檢出率(粗率)為6.39%,提示在成年人群中存在著圓環(huán)病毒的隱性感染,這種隱性感染可能與高血壓或肝硬化相關(guān);農(nóng)村人口PCV抗體陽(yáng)性率明顯高于城市人口(P0.001)。2.現(xiàn)有疫苗的應(yīng)用在預(yù)防圓環(huán)病毒相關(guān)疾病方面起到了一定的效果,然而PCV2的感染、傳播和流行仍不能被有效控制。這種現(xiàn)狀促使人們研究現(xiàn)有疫苗在刺激機(jī)體產(chǎn)生病毒中和抗體的同時(shí),是否還會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生有利于病毒感染的免疫應(yīng)答。本研究發(fā)現(xiàn),滅活病毒疫苗免疫,或是病毒衣殼蛋白亞單位疫苗在制備過(guò)程中,亦或天然病毒感染,誘餌表位均有機(jī)會(huì)暴露在外,刺激機(jī)體產(chǎn)生大量的非保護(hù)性抗體,干擾機(jī)體中和抗體的產(chǎn)生,這些非保護(hù)性抗體被證實(shí)與圓環(huán)病毒相關(guān)疾病有著密切的關(guān)系。為了避免PCV2衣殼蛋白上誘餌表位暴露對(duì)機(jī)體抗病毒免疫的干擾作用,我們用PCV2b衣殼蛋白上的一個(gè)中和表位替換誘餌表位,并在大腸桿菌中成功實(shí)現(xiàn)了可溶性表達(dá)。經(jīng)過(guò)純化、鑒定后在體外將其組裝成病毒樣顆粒,分別與ISA 206水包油包水型佐劑和ISA 35水包油型佐劑乳化制備成疫苗,并對(duì)其物理性狀包括外觀、黏度、穩(wěn)定性等指標(biāo)進(jìn)行了評(píng)估;通過(guò)無(wú)菌檢驗(yàn)和安全性檢驗(yàn)確定了疫苗的安全性;通過(guò)從乳化的疫苗中提取抗原,檢測(cè)疫苗在長(zhǎng)期保存后抗原的穩(wěn)定性及活性,檢測(cè)結(jié)果符合疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。隨后將制備的疫苗分別免疫小鼠和仔豬,用血清抗體測(cè)定法和免疫仔豬攻毒法評(píng)價(jià)疫苗的免疫效力,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,該疫苗能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性的抗病毒抗體,其多克隆抗體效價(jià)可達(dá)1:64000,且能夠?yàn)闄C(jī)體提供持續(xù)并且有效的保護(hù)作用。免疫仔豬6/6出現(xiàn)了血清抗體陽(yáng)轉(zhuǎn),仔豬抗體滴度可達(dá)1:800。免疫仔豬攻毒后組織病毒分離結(jié)果表明,免疫仔豬肺組織上清病毒DNA PCR檢測(cè)結(jié)果為3/6陰性,攻毒對(duì)照組所有豬肺組織上清PCR檢測(cè)均為陽(yáng)性,免疫仔豬腹股溝淋巴結(jié)組織的病毒DNA載量要明顯低于攻毒對(duì)照組。通過(guò)對(duì)豬組織病理病變程度進(jìn)行打分,也可以發(fā)現(xiàn)免疫組的組織病變及損傷程度要明顯輕于攻毒對(duì)照組。結(jié)論:1.在中國(guó)北方成年人群血清中檢測(cè)到圓環(huán)病毒抗體,提示在成年人群中存在著圓環(huán)病毒的隱性感染,這種隱性感染可能與高血壓或肝硬化相關(guān)。2.利用基因克隆技術(shù),用中和表位替換PCV2b衣殼蛋白上的誘餌表位,構(gòu)建、表達(dá)并純化了一種新型抗PCV2重組亞單位疫苗抗原。3.制備的替換掉誘餌表位的重組PCV2b衣殼蛋白亞單位疫苗能夠誘導(dǎo)小鼠和仔豬產(chǎn)生抗病毒特異性抗體,能夠有效地抑制病毒在仔豬體內(nèi)的復(fù)制,具有良好的免疫原性,具備開發(fā)成為一種新型抗圓環(huán)病毒疫苗的潛能。為今后研制相關(guān)疫苗從而更有效地預(yù)防病毒感染及流行提供了可參考的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)及技術(shù)平臺(tái)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R511

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 韓慶彥,潘永紅;西北某工廠化養(yǎng)豬廠圓環(huán)病毒感染的診斷與控制[J];肉品衛(wèi)生;2004年09期

2 余旭平;竺春;鄭新添;母安雄;于洪濤;;鴿圓環(huán)病毒浙江株全基因組的克隆及序列分析[J];病毒學(xué)報(bào);2009年05期

3 傅光華;程龍飛;施少華;彭春香;陳紅梅;黃瑜;;鴨圓環(huán)病毒全基因組克隆與序列分析[J];病毒學(xué)報(bào);2008年02期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉少寧;姜世金;;鴨圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

2 蔡銳;張小飛;潘玲;胡來(lái)根;毛火云;;鴨圓環(huán)病毒套式PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨第十三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

3 陳珍;施少華;楊維星;傅光華;陳紅梅;程龍飛;林芳;林建生;黃瑜;;鴨圓環(huán)病毒感染流行病學(xué)的初步調(diào)查[A];2008年福建省科協(xié)第八屆學(xué)術(shù)年會(huì)農(nóng)業(yè)分會(huì)場(chǎng)論文集[C];2008年

4 劉少寧;姜世金;;鴨圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[A];禽類新發(fā)傳染病高層論壇論文集[C];2009年

5 劉少寧;姜世金;;鴨圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[A];山東畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)專業(yè)委員會(huì)第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

6 王丹;謝小雨;張冬冬;馬國(guó)明;張大丙;;鴨圓環(huán)病毒的檢測(cè)和分型[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

7 孫圣福;田夫林;陳靜;馬慧玲;;山東省圓環(huán)病毒Ⅱ型流行病學(xué)調(diào)查[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

8 黃艷艷;胡北俠;吳家強(qiáng);任素芳;黃慶華;王文志;;圓環(huán)病毒與動(dòng)物疫病[A];第六屆全國(guó)會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2005年

9 劉少寧;張興曉;陳智;高繼明;魏秀麗;孔義波;朱巖麗;姜世金;;我國(guó)自然發(fā)病鴨群中鴨圓環(huán)病毒的流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

10 王鑫;相琪旺;郭翠萍;李井新;王輝;謝之景;朱巖麗;姜世金;;1型鴨圓環(huán)病毒間接ELISA方法的建立及流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 錢怡;國(guó)內(nèi)首支獸用基因苗臨床試驗(yàn)可殺滅圓環(huán)病毒[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2014年

2 魯牧;山東三分之一的鴨子感染圓環(huán)病毒[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

3 星月;圓環(huán)病毒感染[N];河南科技報(bào);2004年

4 ;豬繁殖與呼吸綜合征-圓環(huán)病毒二聯(lián)滅活疫苗[N];河南科技報(bào);2004年

5 王楚端 符開星 劉德旺;動(dòng)物健康快樂是財(cái)富增長(zhǎng)的源泉[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2006年

6 勞錦華;豬病復(fù)雜催生“草根實(shí)驗(yàn)室”上馬[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2009年

7 中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì) 萬(wàn)遂如;豬傳染病流行出現(xiàn)新特點(diǎn)（上）[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2005年

8 本報(bào)記者 李艷;政策解讀惠農(nóng)民科學(xué)技術(shù)促生產(chǎn)[N];福建日?qǐng)?bào);2011年

9 廣州環(huán)球生物藥品有限公司 閆永生 河北省樂亭縣龐各莊動(dòng)物防疫站 張麗 李濤;對(duì)數(shù)例疾病的診治心得[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 于澄;人感染圓環(huán)病毒的血清流行病學(xué)研究及新型抗圓環(huán)病毒疫苗的研制[D];吉林大學(xué);2017年

2 張興曉;鴨圓環(huán)病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查及診斷方法的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 琚春梅;豬2型圓環(huán)病毒ELISA診斷方法及豬2型圓環(huán)病毒-偽狂犬病病毒二價(jià)基因工程疫苗研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李志國(guó);檢測(cè)兩型鴨圓環(huán)病毒雙重PCR方法的建立和分子流行病學(xué)調(diào)查[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 董燁;遼寧地區(qū)豬2型圓環(huán)病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

3 盧權(quán)威;河南PCV2株的分離鑒定及增殖敏感PK15細(xì)胞系的克隆與篩選[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 蘇小東;華東地區(qū)鴨圓環(huán)病毒感染流行病學(xué)調(diào)查及其單克隆抗體的制備[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

5 趙光遠(yuǎn);鴨圓環(huán)病毒廣西株的全基因序列分析及其分子生物學(xué)檢測(cè)方法的建立[D];廣西大學(xué);2012年

6 劉少寧;鴨圓環(huán)病毒的流行病學(xué)調(diào)查[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 郭婧;鵝圓環(huán)病毒實(shí)驗(yàn)感染及其致病性研究[D];浙江大學(xué);2010年

8 彭志鋒;河南省豬2型圓環(huán)病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 于洪濤;鵝圓環(huán)病毒實(shí)驗(yàn)性感染的臨床、病理學(xué)觀察和血清學(xué)檢測(cè)[D];浙江大學(xué);2009年

10 王鑫;1型鴨圓環(huán)病毒間接ELISA方法的建立及流行病學(xué)調(diào)查[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：1295867