發(fā)布時(shí)間：2017-12-15 03:21

  本文關(guān)鍵詞：CaMKKβ抑制劑STO-609誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究

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【摘要】：研究背景:胃癌是在世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤,具有非常高的腫瘤相關(guān)的死亡率。胃癌的預(yù)后較差,在疾病的早期階段,病人的臨床癥狀不特異的癥狀,因此我國(guó)大部分的胃癌于臨床診斷時(shí)已處于進(jìn)展期,整體的預(yù)后及生存率遠(yuǎn)不如早期病例占多數(shù)的日本、韓國(guó)。在我國(guó)胃癌已經(jīng)成為重要的衛(wèi)生負(fù)擔(dān),雖然臨床及基礎(chǔ)的研究取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步,但總體而言我國(guó)胃癌治療的效果仍不滿意。故此,對(duì)胃癌的早期診斷及與腫瘤的演進(jìn)相關(guān)的信號(hào)通路及激酶等的研究,一直是胃癌基礎(chǔ)研究的一個(gè)重要的方向。Ca MKKβ是鈣調(diào)蛋白激酶家族成員,最初的研究多集中在其作為全身及具體的器官能量平衡的調(diào)控因子的作用,在諸如自身免疫性疾病、慢性炎癥、神經(jīng)系統(tǒng)退行性變、炎癥等系統(tǒng)性疾病等方面;而最近的研究提示包含消化系統(tǒng)腫瘤在內(nèi)的多種腫瘤,存在了Ca MKKβ的異常,但關(guān)于Ca MKKβ與胃癌的研究較少。目前已知的Ca MKKβ的下游激酶主要有AMPK、Ca MK及Akt,但在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中Ca MKKβ究竟扮演著何種的角色,是學(xué)者們關(guān)心但尚未明確的問題。STO-609是Ca MKKβ的選擇性抑制劑,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤,STO-609可以抑制腫瘤細(xì)胞的活力等。但STO-609抑制腫瘤的具體機(jī)制不詳,只有零星的報(bào)道探討了STO-609與Ca MKKβ的下游分子靶標(biāo)的作用關(guān)系,而STO-609能否成為胃癌治療潛在的藥物的前提,則是對(duì)其作用機(jī)制及耐藥機(jī)制的探討。目的:1.探討Ca MKKβ在胃癌組織及非癌組織中的表達(dá)是否存在差異,如果存在差異,則進(jìn)一步探討胃癌組織的Ca MKKβ的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征及預(yù)后的相關(guān)性。2.探討Ca MKKβ的特異性抑制劑STO-609對(duì)胃腺癌細(xì)胞活力、凋亡及侵襲能力的影響,探討STO-609對(duì)Ca MKKβ的相關(guān)下游通路活化的影響。3.利用sh RNA抑制Ca MKKβ和AMPK,探討STO-609誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡的作用及與Ca MKKβ下游信號(hào)通路的關(guān)系。方法:1應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)胃癌組織與癌旁組織及正常組織的Ca MKKβ的表達(dá)。2應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件綜合分析胃癌的Ca MKKβ表達(dá)與胃癌的組織分型、腫瘤直徑、Lauren分型及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理學(xué)特征及預(yù)后進(jìn)行分析。3通過臺(tái)盼蘭染色探討STO-609的對(duì)胃腺癌細(xì)胞存活率的影響。4通過Western Blot檢測(cè)STO-609對(duì)胃腺癌細(xì)胞Ca MKKβ下游AMPK、Akt、ERK的表達(dá)水平。5通過凋亡-壞死定量檢測(cè)試劑盒及Western Blot檢測(cè)STO-609的對(duì)胃腺癌細(xì)胞凋亡率的影響。6通過Trans-well侵襲室檢測(cè)STO-609的對(duì)胃腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。7通過sh RNA抑制Ca MKKβ和AMPK,檢測(cè)STO-609對(duì)胃腺癌細(xì)胞活力、凋亡及侵襲能力的影響,及AMPK、Akt、ERK的表達(dá)水平變化。8通過IBM SPSS 24.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1.93例胃癌組織中61例Ca MKKβ表達(dá)陽性為,21例癌旁組織中10例表達(dá)陽性,17例正常組織中6例表達(dá)陽性,陽性率分別為81.7%、46.6%、54.5%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;2.在胃腺癌組織的Ca MKKβ表達(dá)評(píng)分上,T2期及以下腫瘤組織的評(píng)分為1.03±0.79,T2期以上腫瘤組織的評(píng)分為1.93±1.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素分析顯示Ca MKKβ的強(qiáng)陽性表達(dá)是預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,與弱陽性組相比強(qiáng)陽性組在總生存率上的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3.STO-609可以抑制胃腺癌SUN-1細(xì)胞及N87細(xì)胞的活力。4.STO-609對(duì)胃腺癌SUN-1細(xì)胞及N87細(xì)胞的AMPK、Akt、ERK的活化有抑制作用。5.STO-609對(duì)胃腺癌SUN-1細(xì)胞及N87細(xì)胞的凋亡有誘導(dǎo)作用。6.STO-609對(duì)胃腺癌SUN-1細(xì)胞及N87細(xì)胞的侵襲能力有抑制作用。7.與對(duì)照組相比,Ca MKKβsh RNA對(duì)STO-609引起的胃腺癌SUN-1細(xì)胞的凋亡存在抑制作用,但AMPK sh RNA無明顯抑制凋亡的作用。8.與對(duì)照組相比,AMPK sh RNA對(duì)STO-609引起的胃腺癌SUN-1細(xì)胞的活力抑制及凋亡誘導(dǎo)無抑制作用;AMPK sh RNA對(duì)STO-609引起的SUN-1細(xì)胞的Akt及ERK活化無抑制作用。結(jié)論:1.胃癌組織的Ca MKKβ的表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常組織,Ca MKKβ的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度相關(guān)且強(qiáng)陽性表達(dá)提示預(yù)后不良,可能成為潛在的分子標(biāo)志物;2.STO-609抑制胃腺癌細(xì)胞活力的作用,可能是與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān);STO-609誘導(dǎo)胃腺癌細(xì)胞凋亡的作用,與其對(duì)Ca MKKβ的下游信號(hào)AMPK、Akt、ERK的激活抑制有關(guān)。STO-609抑制對(duì)胃腺癌細(xì)胞的侵襲能力有抑制作用,提示Ca MKKβ抑制劑STO-609可能作為一種新型的抗癌藥物。3.我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),AMPK特異性沉默,并沒有影響Ca MKKβ抑制劑STO-609誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡作用,提示誘導(dǎo)凋亡的作用可能與Ca MKKβ下游的信號(hào)其一的AMPK途徑的機(jī)制無關(guān)。4.最后,結(jié)合我們的整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們推測(cè):STO-609誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制,可能與抑制Ca MKKβ下游信號(hào)Akt、ERK及信號(hào)途徑之間的交互調(diào)控有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.2

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2 劉麗華,郝國(guó)楨,王士杰,龐鳳蘭;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在胃腺癌中的表達(dá)及意義[J];臨床薈萃;2004年23期

3 李國(guó)華,錢偉,侯曉華;胃腺癌組織中分泌血管活性腸肽的腫瘤細(xì)胞研究[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2005年03期

4 胡亞斌;劉建平;;基于區(qū)域增長(zhǎng)和改進(jìn)分水嶺算法的胃腺癌細(xì)胞圖像分割[J];計(jì)算機(jī)與數(shù)字工程;2006年08期

5 趙亮;沈志祥;沈磊;羅和生;;胃腺癌組織瘦素、瘦素受體表達(dá)及其臨床意義[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年05期

6 趙亮;沈磊;沈志祥;羅和生;;瘦素在胃腺癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)和定位[J];臨床消化病雜志;2009年01期

7 張琰;宋平;李洪利;;血管活性腸肽在胃腺癌組織及細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2009年24期

8 陳暉;岑平;李佳荃;林瑤光;唐國(guó)都;姜海行;臧寧;馮振博;蘇齊鑒;;血管活性腸肽在胃腺癌中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)腫瘤臨床;2009年03期

9 李云橋;侯曉華;王藝峰;張俐娜;;化學(xué)修飾的茯苓β-D-葡聚糖結(jié)構(gòu)與抗胃腺癌活性的關(guān)系[J];世界華人消化雜志;2012年15期

10 林中;唐強(qiáng);;胃腺癌細(xì)胞血循環(huán)中大量增殖1例[J];桂林醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1993年02期

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1 周紅;李祺福;黃宗平;;胃腺癌細(xì)胞核骨架在細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中的變化[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

2 申發(fā)娟;;上調(diào)miR-200家族的表達(dá)對(duì)胃腺癌細(xì)胞系生長(zhǎng)的體外研究[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會(huì)第三十三屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

3 金焰;李明;孫文靜;于e，

本文編號(hào)：1290437