發(fā)布時(shí)間：2017-12-14 20:00

  本文關(guān)鍵詞：急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞株中T-型鈣通道和鈉通道的達(dá)與功能

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【摘要】：背景:T-型鈣通道在人類多種類型癌細(xì)胞中異常表達(dá),并參與細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡的調(diào)節(jié)。應(yīng)用T-型鈣通道阻斷劑可以顯著抑制高表達(dá)T-型鈣通道腫瘤的細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。越來越多的數(shù)據(jù)表明腫瘤細(xì)胞的遷移受電壓門控鈉通道的調(diào)控,電壓門控鈉通道特異性阻斷劑河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)能夠在體外系統(tǒng)抑制多種與遷移相關(guān)的細(xì)胞行為。有意思的是,有學(xué)者已經(jīng)把淋巴細(xì)胞的運(yùn)輸與腫瘤細(xì)胞的遷移進(jìn)行了比較,認(rèn)為這兩種行為具有非常相似的特征。研究發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞有多種離子通道的表達(dá),包括電壓門控鉀通道(KV1.3)、鈣激活鉀通道(KCa)、鈣釋放激活鈣通道(CRAC)、腫脹激活氯通道(Clswell)。而T-型鈣通道和電壓門控鈉通道在正常淋巴細(xì)胞和急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞的表達(dá)及功能目前尚不清楚。本課題擬研究T-型鈣通道及電壓門控鈉通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞和正常淋巴細(xì)胞中的表達(dá),并對(duì)其功能進(jìn)行研究。方法:運(yùn)用RT-PCR、Q-PCR、western blotting、免疫熒光和全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究T-型鈣通道及電壓門控鈉通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞和正常淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。利用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和si RNA技術(shù)觀察T-型鈣通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用。細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)觀察T-型鈣通道阻斷劑對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響。流式細(xì)胞技術(shù)觀察T-型鈣通道阻斷劑對(duì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫釋放的影響。線粒體膜電位測(cè)定觀察T-型鈣通道阻斷劑對(duì)線粒體膜電位的影響及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-線粒體鈣流動(dòng)在線粒體膜電位去極化中的作用。Western blotting技術(shù)探討T-型鈣通道阻斷劑對(duì)ERK信號(hào)通道的影響。利用細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)研究電壓門控鈉通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞遷移中的作用。結(jié)果:(1)T-型鈣通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞中有表達(dá),而正常外周血淋巴細(xì)胞不表達(dá)。(2)T-型鈣通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要的作用。(3)T-型鈣通道阻斷劑-米貝拉地爾(mibefradil)和NNC-55-0396濃度依賴性地抑制急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)。T-型鈣通道阻斷劑對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)具有雙重影響:(i)抑制細(xì)胞增殖,通過阻斷G1-S期轉(zhuǎn)折;(ii)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。(4)T-型鈣通道阻斷劑破壞急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞胞內(nèi)的鈣穩(wěn)態(tài)并誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放,與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。(5)T-型鈣通道阻斷劑-NNC-55-0396可以引起急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞線粒體膜電位去極化,而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-線粒體鈣流動(dòng)沒有直接參與線粒體膜電位的去極化。(6)米貝拉地爾和NNC-55-0396能夠抑制MOLT-4細(xì)胞的ERK1/2磷酸化。(7)電壓門控鈉通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞和正常外周血淋巴細(xì)胞都有表達(dá),且表達(dá)亞型以TTX-敏感性鈉通道為主。(8)電壓門控鈉通道特異性阻斷劑TTX抑制急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)論:(1)T-型鈣通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞增殖中發(fā)揮重要的作用。(2)米貝拉地爾和NNC-55-0396在表達(dá)T-型鈣通道的急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞中具有抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用,這將為白血病的治療帶來新的靶點(diǎn)。(3)電壓門控鈉通道在急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞的侵襲中發(fā)揮著重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.71

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