本文關(guān)鍵詞：表沒食子兒茶素沒食子酸酯促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖及骨向分化的研究

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【摘要】：目的為探討表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)在成骨細(xì)胞增殖及骨向分化中的作用,并對其作用機制進(jìn)行初步探討。方法1、在MC3T3-E1細(xì)胞中使用MTT法、流水細(xì)胞術(shù)檢測、Edu檢測、Real time PCR和Western Blot試驗方法探討不同濃度的EGCG對成骨細(xì)胞的毒性作用,并選取合適濃度探討EGCG對成骨細(xì)胞增殖作用的影響。2、使用堿性磷酸酶染色檢測、堿性磷酸酶測定、茜素紅染色檢測、Realtime PCR和Western Blot試驗方法證明EGCG對成骨細(xì)胞骨向分化的作用。3、使用堿性磷酸酶染色檢測、Real time PCR和Western Blot試驗方法對EGCG促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化機制進(jìn)行初步探討。結(jié)果1、5μM-50μM的EGCG對MC3T3-E1細(xì)胞無明顯毒性作用,而100μM,2000μM組的EGCG對MC3T3-E1細(xì)胞有毒性作用。其中15μM,30μM兩個濃度組的OD值比對照組明顯升高,提示EGCG在一定的濃度范圍可能對MC3T3-E1細(xì)胞有促進(jìn)其增殖的作用。MTT實驗證實30μM濃度的EGCG可以促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞術(shù)檢測30μM濃度的EGCG可明顯促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞S期進(jìn)程。Edu實驗也顯示30μM的EGCG作用組MC3T3-E1細(xì)胞處在S期的細(xì)胞比例約為51±8%,而空白對照組S期比例約為38±5%,EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞S期比例明顯高于對照組,兩組細(xì)胞S期比例分布具有統(tǒng)計學(xué)差異。30μM的EGCG處理的MC3T3-E1細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白D1的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平都明顯高于空白對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2、堿性磷酸酶染色顯示EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞中堿性磷酸酶陽性細(xì)胞明顯多于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。堿性磷酸酶活性測定顯示,EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞中堿性磷酸酶活性明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Realtime PCR和Western Blot的檢測結(jié)果顯示EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞中堿性磷酸酶的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。茜素紅染色顯示,不管是第7天還是第14天,EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞的礦化結(jié)節(jié)都明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3、Real time PCR和Western Blot的檢測結(jié)果顯示,EGCG處理組的MC3T3-E1細(xì)胞中β-catenin的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用ER拮抗劑ICI 182,780和EGCG共同處理MC3T3-E1細(xì)胞后,β-catenin的mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平與對照組沒有統(tǒng)計學(xué)差異。采用ER拮抗劑ICI 182,780和EGCG共同處理MC3T3-E1細(xì)胞后,堿性磷酸酶的活性與對照組沒有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論:一定濃度的EGCG可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖和骨向分化。其機制可能是通過與雌激素受體相互作用進(jìn)而激活Wnt信號通路的β-catenin來完成。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R580

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本文編號：1286946