本文關(guān)鍵詞：CD44v6在人結(jié)直腸癌化療耐藥中的作用和機(jī)制及在組織中的表達(dá)研究

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【摘要】：研究背景和目的化療是結(jié)直腸癌的有效治療措施之一,但臨床上存在的化療耐藥是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。CD44v6被認(rèn)為是結(jié)直腸癌干細(xì)胞的標(biāo)記物,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。但是CD44v6在結(jié)直腸癌化療耐藥中的作用尚不明確,其分子機(jī)制更不清楚。本實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)細(xì)胞水平研究CD44v6在人結(jié)直腸癌化療耐藥中作用和分子機(jī)制,并在組織中研究了 CD44v6與臨床預(yù)后的關(guān)系和瘤內(nèi)異質(zhì)性現(xiàn)象。方法研究分為三章。第一章主要通過(guò)構(gòu)建CD44v6的穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞模型和過(guò)表達(dá)模型,觀察化療藥物5-FU作用下,CD44v6表達(dá)量變化對(duì)藥物耐受、細(xì)胞增殖和凋亡情況的影響。然后對(duì)常見(jiàn)的化療耐藥機(jī)制進(jìn)行篩選。第二章主要通過(guò)回顧性分析結(jié)直腸癌臨床病理資料,建立組織芯片,用免疫組化的方法評(píng)估CD44v6、ABCG2 和 Beclin1 的表達(dá)情況,分別探討 CD44v6、ABCG2、Beclin1與臨床病理資料之間的關(guān)系。第三章是主要用免疫組化、熒光實(shí)時(shí)定量PCR和免疫熒光雙染對(duì)直腸癌中CD44v6表達(dá)的瘤內(nèi)異質(zhì)性進(jìn)行了分析。結(jié)果第一章結(jié)果:化療藥物氟尿嘧啶和奧沙利鉑能夠使結(jié)直腸癌CD44v6表達(dá)升高。CD44v6過(guò)表達(dá)可以降低結(jié)直腸癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性,能夠促進(jìn)細(xì)胞的耐藥。CD44v6過(guò)表達(dá)細(xì)胞ABCB1、ABCG2mRNA相對(duì)表達(dá)水平在有或無(wú)5-FU存在條件下均低于對(duì)照組細(xì)胞;BECN1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平在無(wú)5-FU存在條件下與對(duì)照組細(xì)胞無(wú)明顯差異,但在5-FU存在條件下顯著高于對(duì)照組細(xì)胞。CD44v6過(guò)表達(dá)可增強(qiáng)5-FU存在條件下SW480細(xì)胞自噬流。自噬被阻斷后,CD44v6過(guò)表達(dá)細(xì)胞的藥物敏感性又升高。5-FU可以使結(jié)腸癌細(xì)胞E-cadherin表達(dá)上調(diào),Vimentin表達(dá)下調(diào)。而CD44v6過(guò)表達(dá)細(xì)胞在有或無(wú)5-FU存在條件下,E-cadherin表達(dá)水平均低于對(duì)照組,而Vimentin表達(dá)水平均高于對(duì)照組。提示CD44v6可促進(jìn)SW480細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,并抑制5-FU誘導(dǎo)的間質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化。在5-FU處理下,CD44v6過(guò)表達(dá)細(xì)胞Erk1/2、Akt磷酸化水平顯著高于對(duì)照組。提示SW480細(xì)胞在5-FU刺激下可激活Erk1/2和Akt相關(guān)信號(hào)通路,而CD44v6過(guò)表達(dá)可放大其激活水平,從而促進(jìn)細(xì)胞在藥物中存活。第二章結(jié)果:通過(guò)組織芯片的免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)大腸癌組織均有不同程度 CD44v6、ABCG2、Beclin1 表達(dá)。生存分析結(jié)果顯示,CD44v6、ABCG2、Beclin1表達(dá)水平與患者OS、DFS均無(wú)相關(guān)。通過(guò)對(duì)初始CD44v6、ABCG2、Beclin1 MOD值秩相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)CD44v6與ABCG2存在顯著正相關(guān),CD44v6與Beclin1存在顯著正相關(guān),ABCG2與Beclin1無(wú)明顯相關(guān)。然而,CD44v6與ABCG2、Beclin1相關(guān)性均較弱,無(wú)明顯意義。第三章結(jié)果:在整體切片水平,CD44v6表達(dá)水平在直腸癌癌旁對(duì)照、原發(fā)灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中依次升高。在腫瘤原發(fā)灶中,CD44v6可以同時(shí)表達(dá)于胞膜和胞漿,少數(shù)表現(xiàn)為單一定位。CD44v6的表達(dá)水平在腫瘤邊緣區(qū)顯著高于腫瘤中心區(qū)。具有相似表達(dá)水平和表達(dá)模式的CD44v6對(duì)下游p-Erk1/2和p-Akt相關(guān)信號(hào)通路具有不同的激活作用.結(jié)論1化療藥物能夠誘導(dǎo)CD44v6的表達(dá)�；熕幬镒饔孟�,CD44v6可以通過(guò)激活自噬產(chǎn)生耐藥性。其他可能的耐藥機(jī)制還有上皮間質(zhì)化、藥物泵的改變、p-Erk1/2和p-Akt相關(guān)信號(hào)通路的激活。2生存分析結(jié)果顯示,CD44v6、ABCG2、Beclin1表達(dá)水平與患者OS、DFS均無(wú)相關(guān)。3 CD44v6在直腸癌組織表達(dá)中存在瘤內(nèi)異質(zhì)性,可表現(xiàn)為定位異質(zhì)性、空間異質(zhì)性和功能異質(zhì)性。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.3

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