本文關鍵詞：CD44v6在人結直腸癌化療耐藥中的作用和機制及在組織中的表達研究

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【摘要】：研究背景和目的化療是結直腸癌的有效治療措施之一,但臨床上存在的化療耐藥是導致化療失敗的主要原因。CD44v6被認為是結直腸癌干細胞的標記物,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。但是CD44v6在結直腸癌化療耐藥中的作用尚不明確,其分子機制更不清楚。本實驗主要通過細胞水平研究CD44v6在人結直腸癌化療耐藥中作用和分子機制,并在組織中研究了 CD44v6與臨床預后的關系和瘤內(nèi)異質(zhì)性現(xiàn)象。方法研究分為三章。第一章主要通過構建CD44v6的穩(wěn)定低表達細胞模型和過表達模型,觀察化療藥物5-FU作用下,CD44v6表達量變化對藥物耐受、細胞增殖和凋亡情況的影響。然后對常見的化療耐藥機制進行篩選。第二章主要通過回顧性分析結直腸癌臨床病理資料,建立組織芯片,用免疫組化的方法評估CD44v6、ABCG2 和 Beclin1 的表達情況,分別探討 CD44v6、ABCG2、Beclin1與臨床病理資料之間的關系。第三章是主要用免疫組化、熒光實時定量PCR和免疫熒光雙染對直腸癌中CD44v6表達的瘤內(nèi)異質(zhì)性進行了分析。結果第一章結果:化療藥物氟尿嘧啶和奧沙利鉑能夠使結直腸癌CD44v6表達升高。CD44v6過表達可以降低結直腸癌細胞對化療藥物的敏感性,能夠促進細胞的耐藥。CD44v6過表達細胞ABCB1、ABCG2mRNA相對表達水平在有或無5-FU存在條件下均低于對照組細胞;BECN1 mRNA相對表達水平在無5-FU存在條件下與對照組細胞無明顯差異,但在5-FU存在條件下顯著高于對照組細胞。CD44v6過表達可增強5-FU存在條件下SW480細胞自噬流。自噬被阻斷后,CD44v6過表達細胞的藥物敏感性又升高。5-FU可以使結腸癌細胞E-cadherin表達上調(diào),Vimentin表達下調(diào)。而CD44v6過表達細胞在有或無5-FU存在條件下,E-cadherin表達水平均低于對照組,而Vimentin表達水平均高于對照組。提示CD44v6可促進SW480細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,并抑制5-FU誘導的間質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)化。在5-FU處理下,CD44v6過表達細胞Erk1/2、Akt磷酸化水平顯著高于對照組。提示SW480細胞在5-FU刺激下可激活Erk1/2和Akt相關信號通路,而CD44v6過表達可放大其激活水平,從而促進細胞在藥物中存活。第二章結果:通過組織芯片的免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)大腸癌組織均有不同程度 CD44v6、ABCG2、Beclin1 表達。生存分析結果顯示,CD44v6、ABCG2、Beclin1表達水平與患者OS、DFS均無相關。通過對初始CD44v6、ABCG2、Beclin1 MOD值秩相關分析,發(fā)現(xiàn)CD44v6與ABCG2存在顯著正相關,CD44v6與Beclin1存在顯著正相關,ABCG2與Beclin1無明顯相關。然而,CD44v6與ABCG2、Beclin1相關性均較弱,無明顯意義。第三章結果:在整體切片水平,CD44v6表達水平在直腸癌癌旁對照、原發(fā)灶、淋巴結轉(zhuǎn)移灶中依次升高。在腫瘤原發(fā)灶中,CD44v6可以同時表達于胞膜和胞漿,少數(shù)表現(xiàn)為單一定位。CD44v6的表達水平在腫瘤邊緣區(qū)顯著高于腫瘤中心區(qū)。具有相似表達水平和表達模式的CD44v6對下游p-Erk1/2和p-Akt相關信號通路具有不同的激活作用.結論1化療藥物能夠誘導CD44v6的表達�；熕幬镒饔孟�,CD44v6可以通過激活自噬產(chǎn)生耐藥性。其他可能的耐藥機制還有上皮間質(zhì)化、藥物泵的改變、p-Erk1/2和p-Akt相關信號通路的激活。2生存分析結果顯示,CD44v6、ABCG2、Beclin1表達水平與患者OS、DFS均無相關。3 CD44v6在直腸癌組織表達中存在瘤內(nèi)異質(zhì)性,可表現(xiàn)為定位異質(zhì)性、空間異質(zhì)性和功能異質(zhì)性。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.3

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