本文關(guān)鍵詞：MG-63骨肉瘤細(xì)胞不同亞系的建立與分析及miR-130b對MG-63不同亞系增殖和凋亡的影響

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【摘要】：骨肉瘤(OS),最常見的原發(fā)性骨惡性腫瘤之一,在癌癥中發(fā)病率為第八位,每年每百萬人中有4.4人發(fā)病,好發(fā)生在長骨的干骺端。在過去30年,盡管骨肉瘤患者5年生存率從20%提升到75%,但是有很大一部分患者對化療不敏感,即使手術(shù)切除原發(fā)灶應(yīng)用大劑量化療,仍然存在較高的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。究骨肉瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制在骨科和相關(guān)學(xué)科一直是研究重點(diǎn)。MG-63細(xì)胞是一個具有高轉(zhuǎn)移潛能的骨肉瘤細(xì)胞系。目前,還沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)于人骨肉瘤高轉(zhuǎn)移或未轉(zhuǎn)移的MG-63細(xì)胞系的轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究。miRNAs是一類進(jìn)化上保守的內(nèi)源性單鏈非編碼小RNA。miRNAs在細(xì)胞增殖、發(fā)育、分化、凋亡、侵襲、應(yīng)激及死亡過程中發(fā)揮著重要作用。越來越多的證據(jù)表明,許多miRNAs的異常表達(dá)與人類疾病有關(guān),包括癌癥。實(shí)際上,大量研究證實(shí),miRNA表達(dá)異常出現(xiàn)在多種腫瘤中,并且作為腫瘤抑制基因和癌基因發(fā)揮作用。miR-130b已經(jīng)被證實(shí)是一種重要的腫瘤調(diào)節(jié)基因,在多種人類惡性腫瘤中存在表達(dá)異常。以往研究通過miRNA高通量測序發(fā)現(xiàn)miR-130b在骨肉瘤細(xì)胞中表達(dá)升高。前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)裸角質(zhì)膜同源2(NKD2)是miR-130b的一個潛在的靶點(diǎn)。近年,NKD2被報(bào)道通過抑制Wnt信號通路抑制骨肉瘤的生長和轉(zhuǎn)移。因此,我們假設(shè)miR-130b可能通過調(diào)控NKD2的表達(dá)作用于骨肉瘤。1.建立和分析不同轉(zhuǎn)移能力的骨肉瘤細(xì)胞亞系目的建立不同轉(zhuǎn)移能力的骨肉瘤細(xì)胞亞系,為骨肉瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究提供新的細(xì)胞模型。方法對MG-63細(xì)胞系進(jìn)行有限稀釋,得到6個MG-63細(xì)胞亞系。體外侵襲實(shí)驗(yàn),細(xì)胞電泳率檢測,細(xì)胞增殖率檢測以及軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)來分析各種細(xì)胞亞系的轉(zhuǎn)移性特點(diǎn)。結(jié)果體外侵襲實(shí)驗(yàn),細(xì)胞電泳率檢測,細(xì)胞增殖率檢測以及軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)結(jié)果顯示,A2、A3和A16細(xì)胞亞系侵襲能力明顯高于A1、A6和A20細(xì)胞亞系。A2、A3和A16細(xì)胞亞系三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,A1、A6和A20細(xì)胞亞系三組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而A2、A3和A16組與A1、A6和A20之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功建立了不同轉(zhuǎn)移能力的骨肉瘤細(xì)胞亞系,可用于骨肉瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究。2.miR-130b以NKD2為靶點(diǎn)通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路從而促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞增殖、抑制其凋亡目的分析miR-130b以NKD2為靶點(diǎn)通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路從而促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖。為骨肉瘤發(fā)生發(fā)展提供新線索,為骨肉瘤治療提供新的潛在治療靶點(diǎn)。方法實(shí)時(shí)定量PCR、Western Blot、MTT和流式細(xì)胞技術(shù)是用來分析miR-130b對不同轉(zhuǎn)移能力的骨肉瘤細(xì)胞亞系的影。熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)被用來驗(yàn)證NKD2是miR-130b的直接靶點(diǎn)。結(jié)果在骨肉瘤細(xì)胞亞系中,miR-130b的mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào),NKD2的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)。miR-130b抑制劑能抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡。NKD2是miR-130b的直接靶點(diǎn),miR-130b通過與NKD2結(jié)合調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的增殖和凋亡。miR-130b和NKD2通過調(diào)控Wnt信號通路影響骨肉瘤細(xì)胞的增殖和凋亡。結(jié)論miR-130b以NKD2為靶點(diǎn)通過調(diào)節(jié)Wnt信號通路從而促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖,抑制其凋亡。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R738.1

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊勝武;骨肉瘤預(yù)后因素的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(骨科學(xué)分冊);2002年04期

2 李健,郭衛(wèi),楊榮利,曲華毅,樊瑞峰;影響骨肉瘤預(yù)后因素的探討[J];中國骨腫瘤骨病;2004年06期

3 鮑同柱,趙紅衛(wèi),鄭啟新,劉萬軍,劉勇;反義轉(zhuǎn)化生長因子-β1基因?qū)侨饬黾?xì)胞表達(dá)轉(zhuǎn)移相關(guān)因子的影響[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年04期

4 牛聚偉;吳剛;祝少博;漆白文;錢煒;喻愛喜;;血管擴(kuò)張刺激磷蛋白與骨肉瘤細(xì)胞遷移能力的關(guān)系[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

5 孟令祥,于錫欣,杜德利,王冠忠;P~(16)基因在骨肉瘤中的表達(dá)[J];山東醫(yī)藥;1999年06期

6 林娜,蔡宣松,梅炯;骨肉瘤預(yù)后因素探討[J];實(shí)用腫瘤雜志;2000年05期

7 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的誘導(dǎo)及其抗腫瘤特性的研究[J];中華骨科雜志;2000年01期

8 馬忠泰,栗懷廣,施學(xué)東;骨肉瘤的化療與療效判斷[J];中華骨科雜志;2000年S1期

9 岳文,楊連甲,馬明,董紹忠;體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀察骨形成蛋白在骨肉瘤中的作用[J];口腔頜面外科雜志;2000年03期

10 姜文學(xué),董天華,吳士良,馬文雄;體外誘導(dǎo)骨肉瘤特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國矯形外科雜志;2000年03期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李紅;龍勉;;力學(xué)微擾對骨肉瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2006年

2 金先慶;羅小輯;;骨肉瘤細(xì)胞骨分化標(biāo)志檢測及臨床意義[A];中國抗癌協(xié)會第七屆全國小兒腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

3 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];泛長江流域骨科新進(jìn)展暨第九屆全國骨科護(hù)理研討會論文匯編[C];2007年

4 李進(jìn);楊述華;鄒利軍;邵增務(wù);廖翔;;單啟動子雙表達(dá)載體pIRES-p14ARF-p53的構(gòu)建及其對骨肉瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 胡宏偉;孫其志;;骨肉瘤的治療進(jìn)展[A];第十七屆中國康協(xié)肢殘康復(fù)學(xué)術(shù)年會暨第三屆海峽兩岸OS會議論文匯編[C];2008年

6 于秀淳;王偉;;影響骨肉瘤新輔助化療療效的多因素分析[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議教育集[C];2006年

7 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國腫瘤護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

8 張瑤;;四肢長骨骨肉瘤合并病理性骨折圍手術(shù)期的護(hù)理[A];全國第八屆骨科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

9 張志明;;外傷誘發(fā)骨肉瘤一例分析[A];第四次全國法醫(yī)學(xué)術(shù)交流會論文集（上卷）[C];1991年

10 楊迪生;解先寬;葉招明;陶惠民;;反義C-myc重組腺病毒的構(gòu)建及其抗骨肉瘤細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];2004年浙江省骨科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 任勇 李運(yùn)紅 胡顏;莫名關(guān)節(jié)痛青少年警惕骨肉瘤[N];天津日報(bào);2006年

2 黃金昶;骨肉瘤可試用斑蝥治療[N];健康報(bào);2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉巍;UHRF1在骨肉瘤細(xì)胞侵襲過程中的作用及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳杰;HDAC5在骨肉瘤細(xì)胞增殖中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 馬萬里;miR-148a在骨肉瘤患者體內(nèi)的表達(dá)及其功能機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 田吉光;CD271~+骨肉瘤干細(xì)胞特性研究及以DNA-PK為靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)骨肉瘤化療耐藥性的研究[D];山東大學(xué);2015年

5 成功;內(nèi)臟脂肪素對U2OS細(xì)胞株遷移與侵襲的影響及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 方永超;環(huán)氧化酶-2和miR-143在骨肉瘤中的表達(dá)和臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 趙健;microRNA-21在骨肉瘤細(xì)胞MG63中作用機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

8 韓康;microRNA-194在骨肉瘤中作用及機(jī)制的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 朱U，

本文編號：1282363