本文關(guān)鍵詞：miR-124對帕金森病中多巴胺能神經(jīng)元的調(diào)控作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： PD 多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞 miR-124 AMPK/mTOR通路 細(xì)胞自噬與凋亡

【摘要】：研究背景:帕金森綜合癥(Parkinson's disease,PD)是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,多伴有神經(jīng)細(xì)胞線粒體功能紊亂。PD的發(fā)病原因以及發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,目前尚無有效延緩或治愈手段。PD的發(fā)病與人口老齡化密切相關(guān),探索多巴胺神經(jīng)元凋亡的原因及PD防治越來越受到老齡化國家的重視。在神經(jīng)退行性疾病中,自噬相關(guān)通路的缺陷和線粒體功能障礙都是PD的病因之一,因此通過調(diào)節(jié)線粒體自噬進(jìn)而控制PD的發(fā)病過程也是目前研究的主要方向。研究目的:本研究前期實(shí)驗(yàn)證實(shí),miR-124在MPP+誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞模型中,隨著藥物濃度的升高而下調(diào)。miR-124對PD細(xì)胞模型中自噬相關(guān)基因及蛋白的調(diào)節(jié)作用仍然有待研究。本研究旨在研究miR-124在PD中多巴胺能神經(jīng)元的凋亡與自噬的潛在作用及相關(guān)機(jī)理。研究方法:(1)構(gòu)建MPP+誘導(dǎo)SH-SY5YPD損傷細(xì)胞模型,通過MTT、流式檢測、Q-PCR研究MPP+對SH-SY5Y增殖以及凋亡的影響及miR-124表達(dá)的影響。(2)建立SH-SY5Y細(xì)胞的PD損傷細(xì)胞模型、miR-124表達(dá)下調(diào)細(xì)胞模型及miR-124過表達(dá)細(xì)胞模型,通過流式細(xì)胞術(shù)、Q-PCR和WB等研究miR-124下調(diào)或過表達(dá)對SH-SY5Y細(xì)胞凋亡及自噬水平的影響。(3)建立SK-N-SH細(xì)胞系PD損傷細(xì)胞模型、miR-124上/下調(diào)細(xì)胞模型,驗(yàn)證SK-N-SH模型中細(xì)胞凋亡、自噬水平的變化。并通過Q-PCR和WB研究模型對自噬相關(guān)通路AMPK/mTOR通路的影響。研究結(jié)果:(1)MPP+藥物建立帕金森病多巴胺能神經(jīng)元(DA)凋亡模型及miR-124表達(dá)水平變化。利用MPP+建立了帕金森病損傷細(xì)胞模型并證實(shí)MPP+濃度的升高使得miR-124的表達(dá)下調(diào)。濃度達(dá)到200 uM時,細(xì)胞內(nèi)miR-124的表達(dá)顯著下調(diào)(p0.05)。(2)miR-124下調(diào)與MPP+給藥均可引起SH-SY5Y細(xì)胞自噬過程及凋亡水平的升高。miR-124單獨(dú)下調(diào)與MPP+給藥均能導(dǎo)致細(xì)胞群體中凋亡細(xì)胞的比例、自噬指標(biāo)LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比率和Beclin表達(dá)量(P0.05)增加。miR-124補(bǔ)償表達(dá)可以逆轉(zhuǎn)病理模型中細(xì)胞凋亡及自噬水平(p0.01)。(3)miR-124通過調(diào)控AMPK/mTOR通路磷酸化水平抑制細(xì)胞自噬及凋亡與本底對照相比,PD損傷模型中凋亡細(xì)胞上升了 2.5倍,miR-124下調(diào)組凋亡細(xì)胞上升了 2.44倍(p0.05)。對PD損傷細(xì)胞回補(bǔ)miR-124,則凋亡細(xì)胞明顯下降了 65%(P0.05)。MPP+(100uM)作用和下調(diào) miR-124均引起p-AMPK的升高,p-mTOR的下降。而在MPP+作用后回補(bǔ)miR-124,p-AMPK與p-mTOR顯著恢復(fù),趨于正常水平(均P0.05),而無論MPP+還是miR-124對AMPK與mTOR的總蛋白水平均沒有顯著影響(均P0.05)。上述結(jié)論可以在SK-N-SH細(xì)胞模型中重復(fù)驗(yàn)證。結(jié)論:MPP+在誘導(dǎo)PD神經(jīng)細(xì)胞損傷模型中對神經(jīng)細(xì)胞凋亡及自噬水平的促進(jìn)作用進(jìn)一步得到證實(shí),且能抑制細(xì)胞中miR-124的表達(dá)。miR-124作為PD損傷細(xì)胞模型中重要的負(fù)向調(diào)節(jié)元件,其表達(dá)水平的上調(diào)可通過對AMPK/mTOR通路中AMPK以及mTOR的磷酸化水平的調(diào)控作用,抑制神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的自噬及凋亡過程。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R742.5

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本文編號：1274113