本文關(guān)鍵詞：三種不同體外肺灌注方式對(duì)犬離體肺保護(hù)作用的對(duì)比研究

  更多相關(guān)文章： 離體肺 體外肺灌注 肺移植

【摘要】：[背景]近年來肺移植有了飛速的發(fā)展,單肺移植、雙肺移植及心肺聯(lián)合移植均取得成功,成為挽救終末期肺疾病的有效手段,但是供肺的短缺仍然是阻礙肺移植發(fā)展的主要屏障。在多器官捐贈(zèng)者中只有15%-25%的供肺適合肺移植,腎臟和肝臟的供體相對(duì)豐富,因此在所有實(shí)體器官移植中肺移植仍然是最少的[1,2]。安全有效的供肺保存方式可以改善供肺質(zhì)量,提高肺移植成功率,緩解供肺緊缺。目前臨床上公認(rèn)的供肺保存方式是單次肺循環(huán)灌注后的低溫浸潤保存,保存時(shí)間為4h。雖然在肺離體初期進(jìn)行了肺循環(huán)灌注,但在肺循環(huán)灌注完成后,僅予低溫保存,限制肺組織獲取能量,縮短供肺保存時(shí)限,阻礙供肺的遠(yuǎn)距離運(yùn)輸。體外肺灌注(exvivo lung perfusion,EVLP)一直以來都是肺移植技術(shù)研究的重點(diǎn),盡管國內(nèi)外許多研究從順行灌注、逆行灌注、低溫灌注、常溫灌注、缺血預(yù)處理和支氣管動(dòng)脈再通技術(shù)等多個(gè)方面進(jìn)行研究,但是對(duì)于離體肺損傷的機(jī)制及提高離體肺的安全時(shí)限仍未取得突破性進(jìn)展,缺乏一種安全有效便捷的保護(hù)策略,現(xiàn)有肺保護(hù)方式日益突顯出其局限性和面臨的問題。[目的]本研究通過比較體外循環(huán)機(jī)持續(xù)灌注、間斷壓力灌注、單純低溫保存這三種犬離體肺保存方式對(duì)離體肺的影響,探討離體肺損傷機(jī)制,探索最佳的離體肺保存方式。[方法]1.將30只Mongrel犬隨機(jī)分成體外循環(huán)組、壓力灌注組和低溫保存組,每組10只。在保持機(jī)械通氣的條件下,完整摘取雙肺,離體肺連接體外循環(huán)機(jī)持續(xù)灌注、連接壓力灌注系統(tǒng)間斷灌注、單次灌注離體肺循環(huán)后4℃低溫浸泡保存,并按時(shí)間點(diǎn)留取標(biāo)本。2.持續(xù)監(jiān)測(cè)并記錄犬肺離體后每小時(shí)的血流動(dòng)力學(xué)和血?dú)夥治鲋笜?biāo)。測(cè)定肺組織濕干比來比較肺組織水腫程度。3.采用抗壞血酸法測(cè)定總磷脂的含量,薄層色譜分析測(cè)定二棕櫚酸磷脂酰膽堿含量,蛋白質(zhì)印跡法測(cè)定肺組織中SP-B蛋白和SP-C蛋白,SYBR Green熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)肺組織中SP-B mRNA和SP-C mRNA。4.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液中中性粒細(xì)胞凋亡,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)犬離體肺肺泡巨噬細(xì)胞對(duì)凋亡中性粒細(xì)胞吞噬,BCA法測(cè)定肺組織總蛋白濃度,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)白介素(IL-1a/2/6/8)。[結(jié)果]1.三種不同肺保存方式下離體肺肺功能的變化(1)進(jìn)行體外肺灌注8h,各實(shí)驗(yàn)組中離體犬肺的肺功能指標(biāo)呈現(xiàn)不同程度下降趨勢(shì),主要表現(xiàn)為氧合功能(P02/Fi02)、葡萄糖濃度逐漸下降,PC02、乳酸濃度、離體肺濕干比(W/D)逐漸升高。(2)體外循環(huán)組和間斷壓力灌注組中離體犬肺肺功能優(yōu)于單純低溫保存組,主要表現(xiàn)為氧合功能(P02/Fi02)、葡萄糖水平明顯高于低溫保存組,兩組中PC02、乳酸水平及肺組織W/D較低溫保存組低。(3)體外循環(huán)組中離體犬肺肺功能優(yōu)于間斷壓力灌注組,主要表現(xiàn)為肺動(dòng)態(tài)順應(yīng)性、氧合功能(P02/FiO2)、葡萄糖水平明顯高于間斷壓力灌注組,而肺血管阻力、PC02、W/D及乳酸水平低于間斷壓力灌注組。2.三種不同肺保存方式下肺表面活性物質(zhì)的表達(dá)(1)二棕櫚酸磷脂酰膽堿/總磷脂(DPPC/PL)的表達(dá)各實(shí)驗(yàn)組離體肺支氣管肺泡灌洗液中二棕櫚酸磷脂酰膽堿/總磷脂(DPPC/PL)的比值呈時(shí)間依賴性下降(P0.05)。在1h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中DPPC/PLL比值明顯高于壓力灌注組和低溫保存組(P0.05),壓力灌注組中DPPC/PLL比值較低溫保存組高(P0.05)。(2)SP-B蛋白mRNA和SP-C蛋白mRNA的表達(dá)①SP-B蛋白mRNA的表達(dá):體外循環(huán)組在Oh～2h和7h～8h SP-B蛋白mRNA的表達(dá)無明顯變化(P0.05),在1h～7h SP-B蛋白mRNA的表達(dá)明顯減少(P0.05);壓力灌注組在Oh～2h、6h～7h和7h～8h SP-B蛋白mRNA的表達(dá)無明顯變化(P0.05),1h～6hSP-B蛋白mRNA的表達(dá)明顯減少(P0.05)。低溫保存組在6h～7h SP-B蛋白mRNA的表達(dá)無明顯變化(P0.05),在1h～6h和7h～8h SP-B蛋白mRNA的表達(dá)明顯減少(P0.05)。在1h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-B蛋白mRNA的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05);在2h、3h、5h、6h和8h時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-B蛋白mRNA的表達(dá)均明顯高于壓力灌注組(P0.05);在3h～6h時(shí)間點(diǎn)上,壓力灌注組中SP-B蛋白mRNA的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05)。②SP-C蛋白mRNA的表達(dá):低溫保存組和壓力灌注組在1h～8h SP-C蛋白mRNA的表達(dá)隨著時(shí)間的推移呈進(jìn)行性下降(P0.05);體外循環(huán)組在1h～7h SP-C蛋白mRNA的表達(dá)明顯減少(P0.05),在7h～8h SP-C蛋白mRNA的表達(dá)無明顯減少(P0.05)。在3h～8h時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-C蛋白mRNA的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05);在3h、5h、6h和8h時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-C蛋白mRNA的表達(dá)均明顯高于壓力灌注組(P0.05);在4h、5h、7h和8h時(shí)間點(diǎn)上,壓力灌注組中SP-C蛋白mRNA的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05)。(3)SP-B蛋白和SP-C蛋白的表達(dá)①SP-B蛋白的表達(dá):各實(shí)驗(yàn)組內(nèi)1h～3h SP-B蛋白表達(dá)無顯著差異(P0.05),4h～8hSP-B蛋白的表達(dá)量顯著下降(P0.05)。在1h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-B蛋白的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05);在1h～2h和4h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-B蛋白的表達(dá)均明顯高于壓力灌注組(P0.05);4h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,壓力灌注組中SP-B蛋白的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05)。②SP-C蛋白的表達(dá):體外循環(huán)組和壓力灌注組在Oh～8h SP-C蛋白的表達(dá)呈下降趨勢(shì)(P0.05);低溫保存組在1h～2h SP-C蛋白的表達(dá)無顯著差異(P0.05),3h～8hSP-C蛋白的表達(dá)明顯減少(P0.05)。在1h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-C蛋白的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05);在3h和5h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中SP-C蛋白的表達(dá)均明顯高于壓力灌注組(P0.05);在1h和3h～8h各時(shí)間點(diǎn)上,壓力灌注組中SP-C蛋白的表達(dá)均明顯高于低溫保存組(P0.05)。3.三種不同肺保存方式下炎癥反應(yīng)指標(biāo)的表達(dá)(1)隨著犬肺離體時(shí)間的推移,各實(shí)驗(yàn)組離體肺支氣管肺泡灌洗液中凋亡的中性粒細(xì)胞明顯減少,各實(shí)驗(yàn)組在1h～3h中性粒細(xì)胞凋亡變化不顯著(P0.05),在4h～8h凋亡的中性粒細(xì)胞明顯減少(P0.05);在1h～3h各時(shí)間點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)組間凋亡的中性粒細(xì)胞無顯著差異(P0.05),4h時(shí)體外循環(huán)組和壓力灌注組中凋亡的中性粒細(xì)胞較低溫保存組中顯著增加(P0.05),在5h～8h各時(shí)間點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)組間凋亡的中性粒細(xì)胞數(shù)有顯著差異(P0.05),體外循環(huán)組中凋亡的中性粒細(xì)胞數(shù)最多,壓力灌注組中次之,低溫保存組中最少。(2)各實(shí)驗(yàn)組吞噬凋亡中性粒細(xì)胞的巨噬細(xì)胞隨著離體時(shí)間的延長呈逐漸減少的趨勢(shì)(P0.05);在肺離體后各時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)組中巨噬細(xì)胞對(duì)凋亡中性粒細(xì)胞的吞噬清除優(yōu)于間斷壓力灌注組和單純低溫保存組(P0.05),在1h、2h時(shí)間點(diǎn)上,間斷壓力灌注組中和單純低溫保存組中巨噬細(xì)胞對(duì)凋亡中性粒細(xì)胞的吞噬清除無明顯差異(P0.05),在3h～8h時(shí)間點(diǎn)上,間斷壓力灌注組中巨噬細(xì)胞對(duì)凋亡中性粒細(xì)胞的吞噬清除優(yōu)于單純低溫保存組(P0.05)。(3)各實(shí)驗(yàn)組在各時(shí)間點(diǎn)上中性粒細(xì)胞的凋亡和吞噬凋亡中性粒細(xì)胞的肺泡巨噬細(xì)胞的之間均呈明顯的正相關(guān)(r=0.98,P0.01;r=0.988,P0.01;r=0.964,P0.01)。(4)各實(shí)驗(yàn)組中IL-1a、IL-2、IL-6和IL-8的表達(dá)隨著離體時(shí)間的延長呈時(shí)間依賴性升高(P0.05);在肺離體后的大多時(shí)間點(diǎn)上,體外循環(huán)灌注組中IL-1a、IL-2、IL-6和IL-8的表達(dá)最低,間斷壓力灌注組次之,單純低溫保存組最高。[結(jié)論]采用體外循環(huán)機(jī)持續(xù)灌注保存方式使犬離體肺保存的安全時(shí)限延長至6～8h,其對(duì)犬離體肺的保護(hù)作用優(yōu)于間斷壓力灌注保存和單次肺灌注后低溫保存,間斷壓力灌注保存的肺保護(hù)作用又優(yōu)于單次肺灌注后低溫保存。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R655.3

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄧放;趙不非;馬躍;徐巖松;李鵬;肖福斌;王宏升;;超氧化物歧化酶與L-精氨酸聯(lián)合預(yù)處理對(duì)大鼠肝缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J];中國老年學(xué)雜志;2015年23期

2 孫相華;洪文娟;洪志鵬;祝艷翠;周菊;王亞麗;;動(dòng)態(tài)灌注與靜態(tài)保存對(duì)犬離體肺組織中AQP1表達(dá)的影響[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年33期

3 孫相華;洪文娟;洪志鵬;周菊;祝艷翠;王亞麗;;缺氧對(duì)肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體膜電位的影響及Ghrelin的保護(hù)作用[J];中國老年學(xué)雜志;2014年18期

4 姜志斌;胡萍;劉建新;王電軍;金龍玉;洪朝;;聯(lián)合應(yīng)用維拉帕米和硝酸甘油對(duì)移植犬肺功能的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年08期

5 王炯;黃維琳;汪誠;劉榮玉;;巨噬細(xì)胞吞噬凋亡中性粒細(xì)胞及吞噬誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞死亡的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2014年06期

6 艾文娜;吳潤;刁小龍;;PRNP基因SYBR GreenⅠ雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2013年12期

7 洪文娟;黃韜;洪志鵬;張t，

本文編號(hào)：1269761