本文關鍵詞：中藥復方益肺通絡顆粒有效成分的質(zhì)量與活性研究

  更多相關文章： 結(jié)核病 益肺通絡顆粒 物質(zhì)基礎 免疫調(diào)節(jié) 藥代動力學 白芨 抗炎

【摘要】：結(jié)核病是全球流行性傳染病中致人死亡的主要疾病。尤其是近些年來環(huán)境污染所致的免疫低下、HIV和乙肝感染、抗結(jié)核藥物的毒副作用、多藥耐藥、廣泛多藥耐藥等多方面因素,使結(jié)核病的發(fā)病率重新出現(xiàn)上升的趨勢。最新結(jié)核病發(fā)病機制的深入研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核病在發(fā)生、發(fā)展的過程中都與宿主的免疫調(diào)節(jié)能力緊密相關,其中有大量細胞因子參與了免疫調(diào)節(jié),細胞因子的含量變化與疾病的病損程度以及病理變化有著密切的關系,多種因子的變化可以作為疾病診斷的標準,通過有針對性的對這些細胞因子進行干預,為預防和治療結(jié)核病開辟新的途徑,因此中藥結(jié)核免疫治療也越來越顯現(xiàn)其特殊的優(yōu)越性。益肺通絡顆粒由國家"十一五"和"十二五"傳染病防治國家重大科技專項支持,中期臨床療效顯著,但其體內(nèi)作用的物質(zhì)基礎和作用機制不明確。本課題選擇了抗結(jié)核臨床療效確切的益肺通絡顆粒作為研究對象,綜合運用各種國際前沿免疫治療理論及先進的技術手段,對該藥品的體內(nèi)作用機制、物質(zhì)基礎以及質(zhì)量控制開展了初步研究。本課題主要研究內(nèi)容包括:(1)通過所建立的小鼠免疫低下模型,評價了益肺通絡顆粒的總提取物和多糖組分的體內(nèi)藥理活性和免疫調(diào)節(jié)作用機制;(2)從多波長指紋圖譜、主要活性化學成分的定性定量等方面闡明了益肺通絡顆粒的藥效物質(zhì)基礎;(3)對其藥效物質(zhì)基礎的體內(nèi)動態(tài)變化過程進行了研究,為益肺通絡顆粒的臨床藥物監(jiān)測和用藥安全提供科學依據(jù);(4)對君藥白芨中主要活性成分以及抗炎作用機制進行了研究,闡述了白芨抗炎物質(zhì)基礎和作用機理。益肺通絡顆粒的藥理作用機制研究包括藥物提取組分體外藥敏實驗、體內(nèi)免疫低下模型的建立、藥物提取物小分子組分和多糖組分體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)作用機制的評價。首先通過體外藥敏試驗來篩選益肺通絡復方中抗結(jié)核活性比較顯著的提取部位,檢測結(jié)果顯示所有提取物在可能達到的濃度范圍內(nèi)均沒有顯現(xiàn)出體外抗結(jié)核分枝桿菌的效果。然后我們根據(jù)結(jié)核病與免疫的關系以及益肺通絡復方和單方的藥理活性以及臨床相關報道,將研究重點轉(zhuǎn)移到益肺通絡顆粒在體內(nèi)外的免疫治療作用研究。為了明確復方中各組分的免疫調(diào)節(jié)作用,我們將復方提取物分為小分子組分和多糖組分并分別對它們在體內(nèi)外免疫以及抗氧化活性進行了研究。實驗結(jié)果表明,在體外兩部分均具有較好的自由基清除能力且巨噬細胞也均具有明顯的保護作用,對與巨噬細胞相關的免疫功能和炎癥反應也可能有一定程度的干預和調(diào)節(jié)的作用。在體內(nèi)也首次證明了復方具有免疫調(diào)節(jié)以及抗氧化的功效,表明益肺通絡顆粒是通過免疫調(diào)節(jié)來提升機體內(nèi)的免疫防御能力。藥理作用機制研究的結(jié)果為益肺通絡顆粒通過免疫調(diào)節(jié)輔助治療耐藥結(jié)核病提供了有力的依據(jù),也為進一步提高該藥品的抗結(jié)核治療效果和大面積臨床應用奠定了藥理基礎。益肺通絡顆粒的小分子有效成分物質(zhì)基礎研究包括指紋圖譜的建立、主要有效成分的結(jié)構鑒定和定量分析。采用HPLC-DAD技術建立了益肺通絡顆粒的雙波長指紋圖譜(272和300 nm),對各特征峰進行了單方歸屬,并采用"中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A)"軟件對其進行評價,為復方制劑成分分析奠定了基礎。結(jié)合LC-HRMS技術共鑒別出了益肺通絡顆粒中19種化學成分,其中香豆素類、酚酚類、黃酮類、生物堿類以及蘋果酸酯類成分相對含量較高,主要來源于君藥白芨、百部、臣藥矮地茶、紫花地丁、大薊、佐藥天冬等。并以LC-MS/MS方法確定了復方中新綠原酸、巖白菜素、隱綠原酸、綠原酸、秦皮乙素、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、Militarine、蒙花苷、大薊苷的含量分別為:0.121 ±0.018、0.318±0.039、0.096±0.019、0.100±0.018、0.207 ±0.031、0.085 ± 0.021、0.058 ±0.014、0.103 ±0.020、2.152 ±0.195、0.091±0.014、0.183±0.028 mg/g,為闡明該方藥效物質(zhì)基礎及質(zhì)量控制提供了依據(jù)。益肺通絡顆粒的體內(nèi)物質(zhì)基礎研究對益肺通絡顆粒的主要成分體內(nèi)藥物動力學行為的探討。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)巖白菜素、秦皮乙素、蘆丁三種成分在大鼠體內(nèi)的半衰期T1/2比以往報道約增加了一倍。復方制劑益肺通絡顆粒的藥代特性進一步揭示了中藥復方體系藥代研究的復雜性,為益肺通絡顆粒的臨床藥物監(jiān)測和用藥安全提供科學依據(jù)。益肺通絡顆粒的君藥評價重點放在前期研究較少的白芨的有效成分、抗氧化抗炎藥理作用機制的研究。三味君藥中,有關黃精和百部相關的研究比較多,藥效成分和藥理活性比較明確,而對白芨的活性方面的研究仍舊停留在對白芨多糖的研究上,再結(jié)合本研究所揭示的、復方中含量最高的成分Militarine成分來自于白芨中。在預實驗研究中發(fā)現(xiàn),白芨脂溶性成分在抗氧化抗炎效果上要明顯優(yōu)于白芨多糖,所以我們認為可能是脂溶性成分在其中發(fā)揮了主要作用。首先對白芨中的脂溶性成分的各分組組分的總酚含量進行了測定,各組分清除自由基能力與多酚含量成正比。繼而通過在LPS誘導的肺泡巨噬細胞NR8383和體內(nèi)急性(ALI)炎癥反應模型,評價了抗氧化活性最高的組分BM60抗炎功效。結(jié)果表明經(jīng)BM60給藥治療后大鼠肺泡結(jié)構有明顯的恢復,間隔水腫減輕,肺泡腔中炎性細胞的滲出減少。同時BM60還能夠一定程度地抑制ALI肺組織中NF-kB和TNF-α、IL-1β、IL-6相關炎性因子的表達,進而減輕ALI大鼠肺部的炎癥反應。。接下來采用HPLC-ESI-HRMS技術通過比較其化學式和不飽和度以及商業(yè)標準品和文獻資料來對BM60進行定性分析。最終鑒別出BM60中23種化合物,聯(lián)芐類化合物6個,菲類化合物8個,二氫菲類化合物4個,聯(lián)菲類類化合物1個,黃酮類類化合物1個和2-異丁基蘋果酸葡糖基氧基芐基酯3個,其中聯(lián)芐、菲類化合物種類較多,相對含量較高。該方法表征了白芨BM60部分的主要成分并為新的抗氧化抗炎活性成分的開發(fā)提供了研究基礎。綜上所述,本課題研究基本上明確了益肺通絡顆粒的免疫作用機制和藥效物質(zhì)基礎,通過指紋圖譜和有效成分定量技術的建立對該產(chǎn)品的質(zhì)量控制進行了合理的完善和豐富,體內(nèi)物質(zhì)基礎研究從藥代動力學的角度初步探討了其在體內(nèi)吸收、代謝的規(guī)律,并對前期研究較少的君藥白芨的抗氧化抗炎機制和物質(zhì)基礎進行了初步研究。本課題對益肺通絡顆粒的作用機制和物質(zhì)基礎研究為進一步提高該藥品的抗結(jié)核療效和更大范圍的臨床應用提供了理論和實驗依據(jù)。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R286.0;R285

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐鳳華;黃明;張全英;;LC-MS/MS測定人血漿中普瑞巴林濃度及其藥動學研究[J];中國藥學雜志;2017年03期

2 支旭然;劉洪濤;吳茵;白萬軍;董占軍;;UPLC-MS/MS法同時測定腎康注射液中7個有效成分[J];藥物分析雜志;2017年01期

3 周里欣;林彥朝;章運典;陳洪英;;黃芩配方顆粒的高效液相色譜指紋圖譜研究[J];中國藥業(yè);2017年02期

4 李元元;;延胡索HPLC指紋圖譜研究[J];西北藥學雜志;2017年01期

5 高皓詩;魏悅;佟立今;張?zhí)旌?;大鼠血漿中巖白菜素含量分析方法的建立及其體內(nèi)藥動學[J];沈陽藥科大學學報;2016年12期

6 鐘金鳳;方熱軍;;環(huán)磷酰胺免疫抑制機制及在動物模型上的應用[J];中國免疫學雜志;2016年10期

7 于桂芳;閆顯光;殷洪梅;李家春;黃文哲;王振中;蕭偉;;益心舒片的HPLC指紋圖譜[J];中國實驗方劑學雜志;2017年01期

8 任金鳳;趙躍;王菊仙;;抗結(jié)核藥物研究新進展[J];中國醫(yī)藥生物技術;2016年04期

9 楊建華;迪麗拜爾·馬木提;王梅;王曉梅;胡君萍;;秦皮甲素和秦皮乙素在大鼠體內(nèi)的藥物動力學研究[J];中藥新藥與臨床藥理;2016年04期

10 康靜;季飛飛;楊波;謝春鋒;許婧;郭遠強;;款冬花的化學成分研究[J];藥學研究;2016年07期

，

本文編號：1269254