本文關(guān)鍵詞：星形膠質(zhì)細胞NDRG2在七氟烷預處理神經(jīng)保護作用中的機制研究

  更多相關(guān)文章： 七氟烷 預處理 神經(jīng)保護 NDRG2

【摘要】：目的:大量在體研究和離體研究均表明,常用吸入性麻醉藥七氟烷預處理可誘導腦缺血耐受,減輕腦缺血再灌注損傷,但其機制尚未完全明了。N-myc下游調(diào)節(jié)基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是一個在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要表達于星形膠質(zhì)細胞的基因,與細胞增殖、分化、應激等功能密切相關(guān)。我們前期工作發(fā)現(xiàn),局灶性腦缺血再灌注損傷后缺血半暗帶區(qū)NDRG2發(fā)生了時間和空間上的表達變化,且參與了缺血再灌注損傷后p53介導的細胞凋亡過程。本研究旨在從在體和離體兩方面探討NDRG2及其介導的細胞凋亡和星形膠質(zhì)細胞功能改變在七氟烷預處理神經(jīng)保護效應中的作用及機制。方法:在體—健康雄性成年SD大鼠,2%七氟烷預處理1h,預處理結(jié)束2h后行大腦中動脈阻閉(middle cerebral artery occlusion,MCAO)誘導局灶性腦缺血,缺血120min后抽出線栓恢復灌注。再灌注24 h依據(jù)Garcia評分標準評估神經(jīng)功能,并行TTC(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色計算腦梗死容積百分比,采用Western Blot、real-time PCR、免疫熒光染色、TUNEL(transferase-mediated deoxyuridine triphosphate-biotin nick end labeling,轉(zhuǎn)移酶介導的三磷酸脫氧鳥苷-生物素末端標記)染色等測定缺血半暗帶區(qū)NDRG2表達、分布和細胞凋亡情況。離體—取新生SD鼠的大腦皮層培養(yǎng)原代星形膠質(zhì)細胞,采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法向細胞內(nèi)轉(zhuǎn)染NDRG2 si RNA或NDRG2過表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染24h給予2%七氟烷預處理1h,預處理結(jié)束2h后進行氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)4h,復氧24h檢測細胞活力(MTT試驗)、細胞毒性(LDH釋放率)、凋亡情況(TUNEL染色、活化Caspase-3表達)以及NDRG2表達變化。結(jié)果:七氟烷預處理顯著降低了局灶性腦缺血再灌注引起的大鼠神經(jīng)功能損傷和腦梗死容積,減少了缺血半暗帶組織TUNEL染色陽性細胞數(shù)目和活化Caspase-3表達量,抑制了缺血后NDRG2上調(diào)和核轉(zhuǎn)移現(xiàn)象(P0.05)。原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞OGD模型中得到了類似的結(jié)果。采用NDRG si RNA降低原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞中NDRG2表達可增加細胞活力,減輕氧糖剝奪引起的LDH(lactate dehydrogenase,乳酸脫氫酶)釋放,降低TUNEL陽性細胞數(shù)和活化Caspase-3表達(P0.05);而轉(zhuǎn)染NDRG2過表達質(zhì)粒使原代培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞中NDRG2上調(diào)則可部分逆轉(zhuǎn)七氟烷預處理減輕氧糖剝奪損傷的作用(P0.05)。結(jié)論:七氟烷預處理可通過抑制腦組織星形膠質(zhì)細胞內(nèi)NDRG2的表達和活性,減輕細胞凋亡,改善星形膠質(zhì)細胞功能,從而減輕腦缺血再灌注損傷。本研究為七氟烷預處理可能的臨床應用提供了可靠的理論支持,也為開發(fā)新的腦缺血損傷防治措施提供了新的靶點。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R614
，

本文編號：1267453