本文關(guān)鍵詞：基于TAK1-MAPK及NF-κB信號(hào)通路粉防己堿干預(yù)肝纖維化及隱丹參酮改善暴發(fā)性肝衰竭作用機(jī)制研究

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【摘要】：本研究采用大鼠肝星狀細(xì)胞T-HSC/Cl-6和D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠暴發(fā)性肝衰竭動(dòng)物模型,分別探討粉防己堿抗肝纖維化和隱丹參酮肝保護(hù)作用機(jī)制,從細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及TAK1-MAPK家族信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、NF-κB信號(hào)通路等方面進(jìn)行研究。(1)粉防己堿為傳統(tǒng)中藥防己的活性生物堿成分,我們采用腫瘤壞死因子-α(TNF-α)-刺激大鼠肝星狀細(xì)胞T-HSC/Cl-6,闡明粉防己堿抗肝纖維化作用機(jī)制。永生化大鼠肝星狀細(xì)胞T-HSC/Cl-6給予不同濃度的粉防己堿孵育1小時(shí)后,處理未處理TNF-α(10 ng/ml)并孵育不同時(shí)間。同時(shí)人正常肝細(xì)胞Chang liver給予不同濃度的粉防己堿孵育24小時(shí)。粉防己堿(0.39-50 μM)濃度和時(shí)間依賴(lài)性抑制T-HSC/Cl-6細(xì)胞生長(zhǎng)率,然而濃度小于25 μM時(shí)粉防己堿未對(duì)Chang liver細(xì)胞導(dǎo)致細(xì)胞毒性。粉防己堿濃度和時(shí)間依賴(lài)性抑制caspase-3及其底物PARP裂解,并結(jié)合膜聯(lián)蛋白-v和碘化丙啶作為熒光探針的流式細(xì)胞方法確認(rèn)25μM粉防己堿誘導(dǎo)T-HSC/Cl-6凋亡。同時(shí),粉防己堿濃度和時(shí)間依賴(lài)性抑制α-SMA蛋白表達(dá)。低濃度粉防己堿(6.25μM)未能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并影響α-SMA蛋白表達(dá)。25μM粉防己堿顯著上調(diào)JNK和ERK及其上游激酶TAK1磷酸化,并啟動(dòng)NF-κB P65核轉(zhuǎn)移與1κB-α降解。另外,TNF-α輕微抑制T-HSC/Cl-6細(xì)胞生長(zhǎng)率,粉防己堿濃度大于12.5μM時(shí)對(duì)TNF-α刺激T-HSC/Cl-6呈現(xiàn)細(xì)胞毒性。TNF-α刺激后T-HSC/Cl-6的α-SMA和TRADD蛋白表達(dá)時(shí)間依賴(lài)性增高,而預(yù)處理6.25μM粉防己堿能顯著下降α-SMA和TRADD蛋白表達(dá)。預(yù)處理6.25μM粉防己堿降低JNK和TAK1磷酸化以及NF-κB p65核轉(zhuǎn)移與κBa降解。由此可見(jiàn)粉防己堿抗肝纖維化機(jī)制至少可能涉及細(xì)胞凋亡依賴(lài)和非依賴(lài)途徑,由其濃度決定。高劑量粉防己堿基于活化NF-κB和磷酸化TAK1/JNK/ERK誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡,從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化；低劑量粉防己堿抑制TNF-α刺激肝星狀細(xì)胞的NF-κB核轉(zhuǎn)移和TAK1/JNK磷酸化,從而抑制肝星狀細(xì)胞活化,可能經(jīng)細(xì)胞凋亡非依賴(lài)途徑。(2)隱丹參酮為丹參的脂溶性活性成分,我們采用D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素聯(lián)合誘導(dǎo)的暴發(fā)性肝衰竭小鼠模型探討隱丹參酮的肝保護(hù)作用機(jī)制。腹腔注射D-氨基半乳糖(700 mg/kg)/內(nèi)毒素(10 μg/kg)12小時(shí)和1小時(shí)前,分別灌胃給予隱丹參酮(20或40 mg/kg)。D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素聯(lián)合給藥后小鼠死亡率升高,血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性及TNF-α水平也增高,給予隱丹參酮后上述指標(biāo)顯著降低。隱丹參酮抑制caspase-3、-8和-9活化,顯著改善D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素所致的肝細(xì)胞凋亡,并顯著降低細(xì)胞色素c從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)。隱丹參酮顯著抑制JNK、ERK和p38磷酸化以及TAK1磷酸化。此外,隱丹參酮顯著抑制NF-κB活化并下調(diào)促炎癥細(xì)胞因子的生成。綜上所述,隱丹參酮的肝保護(hù)分子機(jī)制可能與抗凋亡活性有關(guān),并下調(diào)MAPK和NF-κB活性以及至少部分與抑制TAK1磷酸化有關(guān)�？偠灾�,粉防己堿和隱丹參酮有顯著的抗肝纖維化和肝保護(hù)作用,本研究對(duì)開(kāi)發(fā)靶點(diǎn)明確、有效、安全的抗肝纖維化及肝保護(hù)藥物提供理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R575.3

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 María Jesús Tu濼ón;Marcelino Alvarez;Jesús M Culebras;Javier González-Gallego;;An overview of animal models for investigating the pathogenesis and therapeutic strategies in acute hepatic failure[J];World Journal of Gastroenterology;2009年25期

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本文編號(hào)：1163951