本文關(guān)鍵詞：虎杖抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌活性物質(zhì)的分離及生物學(xué)活性研究

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【摘要】：背景抗生素的發(fā)現(xiàn)與使用使人類在治療感染性疾病病人時擁有了強(qiáng)大武器。然而,抗生素的過度使用甚至濫用導(dǎo)致院內(nèi)和院外的抗生素耐藥菌日益增多。其中,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Stphylococcus aureus,MRSA)具有高致病率、高死亡率的特點,治療非常棘手。因此,研究新的治療MRSA藥物已經(jīng)迫在眉睫。目前,研發(fā)抗MRSA的藥物的主要策略有以下兩種:一是直接抗菌策略。包括研究新的抗菌藥物和對現(xiàn)有抗菌藥物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾,如利奈唑胺、達(dá)托霉素等。二是間接抗菌策略。研究能夠增強(qiáng)已有抗菌藥物的作用的藥物,這類藥物可以自身沒有抗菌作用,但是能夠增強(qiáng)細(xì)菌對已經(jīng)耐藥的抗生素的敏感性,即抗菌增敏劑。我們課題組長期開展從傳統(tǒng)的中藥中分離提取具有抗菌活性物質(zhì)的工作。因此,在前期工作基礎(chǔ)上,本研究首先以PBP2a為靶點從37種傳統(tǒng)的中草藥和虎杖葉中篩選出與PBP2a具有高結(jié)合力的中草藥;其次以體外抗MRSA活性為導(dǎo)向,從與PBP2a具有高結(jié)合力的中草藥中篩選出具有最佳抗MRSA活性的中藥虎杖根;然后以虎杖根為研究對象,進(jìn)行具有抗MRSA活性物質(zhì)的分離及其體外生物學(xué)活性研究。目的:篩選具有抗MRSA活性的中草藥,并發(fā)現(xiàn)其活性物質(zhì)基礎(chǔ),為新的抗MRSA藥物的研究奠定基礎(chǔ)。方法:1.以PBP2a為靶點,采用生物傳感器技術(shù)進(jìn)行37種傳統(tǒng)中草藥中具有與PBP2a高結(jié)合力的中草藥的篩選;2.采用MIC、抑菌環(huán)、細(xì)菌生長曲線等實驗方法進(jìn)行虎杖根醇提物的乙醚萃取部分(ET-RPC)和其單體化合物體外抗MRSA活性評價;3.采用高效液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-MS)聯(lián)用技術(shù)和制備高效液相色譜技術(shù)對ET-RPC中單體化合物進(jìn)行分離、鑒定;4.采用生物傳感器技術(shù)對獲得的抗MRSA活性單體化合物進(jìn)行結(jié)合PBP2a親和力的測定。5.采用透射電鏡觀察大黃素對MRSA252細(xì)胞壁形態(tài)學(xué)的影響結(jié)果:1.以PBP2a為靶點,從37種中草藥和虎杖葉中篩選出具有與PBP2a較高結(jié)合力的8種中藥:白頭翁、虎杖根、大血藤、地骨皮、桂皮、大黃、赤芍、梔子和虎杖葉;2.對8種中草藥和虎杖葉體外抗MRSA活性評價結(jié)果顯示,虎杖根、地骨皮水提物的抗MRSA作用較強(qiáng),而虎杖根水提物的抗MRSA作用較地骨皮水提物更強(qiáng);3.虎杖根醇提物的乙醚萃取部(ET-RPC)對MRSA具有一定的體外直接抗MRSA活性;4.ET-RPC中的7種單體化合物分別是虎杖苷、白藜蘆醇-4-O-D-(6'-沒食子酰基)-吡喃葡萄糖苷、白藜蘆醇、決明松-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、6-羥基大黃素、大黃素;5.大黃素具有較強(qiáng)的體外直接抗MRSA活性,是ET-RPC中的主要抗MRSA物質(zhì);6.大黃素對MRSA252標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離株均具有較強(qiáng)的抗菌活性,其與PBP2a的親和力(KD值)為6.78×10-5 M。7.大黃素可影響MRSA252細(xì)胞壁的完整性。結(jié)論:虎杖根醇提物的乙醚萃取部位(ET-RPC)具有良好的體外抗MRSA標(biāo)準(zhǔn)菌株252和17株臨床分離株的活性;通過LC-MS和制備液相色譜技術(shù)從ET-RPC中得到7種主要單體化合物分別為:白藜蘆醇-4-O-D-(6'-沒食子酰基)-吡喃葡萄糖苷,白藜蘆醇,決明松-8-O-葡萄糖,大黃素-8-O葡萄糖苷,6-羥基大黃素,大黃素。其中,僅大黃素具有抗菌活性,說明大黃素是虎杖根ET-RPC的主要抗MRSA單體化合物;大黃素不僅對MRSA標(biāo)準(zhǔn)菌株而且大黃素對MRSA臨床分離株有較強(qiáng)的抗菌活性,可影響MRSA細(xì)胞壁的完整性,其與PBP2a的親和力為6.78×10-5 M。
【關(guān)鍵詞】：中藥 MRSA PBP2a 虎杖 ET-RPC 大黃素 MIC KD值 細(xì)胞壁
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285;R284
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 英文摘要7-10
• 中文摘要10-12
• 第一章 前言12-15
• 1.1 研究意義12
• 1.2 抗耐藥菌藥物的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀12-13
• 1.3 研究內(nèi)容13-15
• 第二章 具有抗MRSA活性中草藥的初步篩選15-26
• 2.1 以PBP2a為靶點的抗MRSA中草藥的初步篩選15-19
• 2.2 具有與PBP2a高結(jié)合力中草藥抗MRSA活性的初步評價19-21
• 2.3 小結(jié)21
• 2.4 討論21-26
• 第三章 虎杖根抗MRSA活性組分的制備與抗MRSA活性的研究26-40
• 3.1 虎杖根抗MRSA組分的制備與抗MRSA活性的初步研究26-31
• 3.2 ET-RPC抗MRSA活性的研究31-37
• 3.3 小結(jié)37
• 3.4 討論37-40
• 第四章 ET-RPC中抗MRSA活性物質(zhì)的分離、鑒定及生物學(xué)活性研究40-63
• 4.1 ET-RPC中抗MRSA活性物質(zhì)的鑒定及分離40-46
• 4.2 7 種單體化合物抗菌活性的研究46-49
• 4.3 大黃素抗MRSA活性的研究49-57
• 4.4 大黃素與MRSA耐藥蛋白PBP2a親和力的檢測57-59
• 4.5 大黃素對MRSA252細(xì)胞壁形態(tài)學(xué)的影響59-60
• 4.6 小結(jié)60-61
• 4.7 討論61-63
• 全文結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-70
• 文獻(xiàn)綜述 1虎杖研究的新進(jìn)展和展望70-81
• 參考文獻(xiàn)75-81
• 文獻(xiàn)綜述2 抗MRSA藥物研究的進(jìn)展81-102
• 參考文獻(xiàn)93-102
• 在讀期間發(fā)表文章102-103
• 致謝103

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1127356