本文關(guān)鍵詞：炎癥小體與肺癌及肺纖維化的相關(guān)性研究

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【摘要】：肺癌是導(dǎo)致人類死亡的首要惡性腫瘤。據(jù)腫瘤學(xué)權(quán)威雜志CA:a cancer journal for clinicians報道,2014年美國所有新發(fā)腫瘤病例中,肺癌患者病例數(shù)占14%,在男性患者和女性患者中僅次于前列腺癌和乳腺癌所占比例;而在同年所有因腫瘤導(dǎo)致死亡的患者中,肺癌所占比例為27%,遠(yuǎn)高于排第二位的前列腺癌(10%)和乳腺癌(15%)。在我國,國家癌癥登記中心(National Central Cancer Registry,NCCR)2015年發(fā)布的中國腫瘤年報顯示,新發(fā)肺癌病例占2011年所有新發(fā)腫瘤病例的19.31%,肺癌致死病例占所有腫瘤致死病例的25.04%,其發(fā)生率和致死率均居各種腫瘤的首位。近年來,由于我國空氣污染、霧霾問題日趨嚴(yán)重,罹患呼吸系統(tǒng)疾病的人數(shù)逐年增長。盡管目前國內(nèi)尚未有大規(guī)模的流行病學(xué)研究霧霾與肺癌發(fā)生之間的關(guān)系,但2013年《柳葉刀-腫瘤學(xué)》(The Lancet Oncology)雜志發(fā)表的歐洲空氣污染對人群影響的多中心隊列研究(multicentre European Study of Cohorts for Air Pollution Effects,ESCAPE)結(jié)果顯示,空氣中細(xì)顆粒物2.5(particulate matter 2.5,PM2.5)及PM10含量升高可增加肺腺癌發(fā)生的風(fēng)險比(hazard ratio,HR)。隨著肺癌分子生物學(xué)研究的不斷深入,調(diào)控肺癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)靶點不斷被發(fā)現(xiàn),靶向肺癌細(xì)胞內(nèi)外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的分子靶向藥物越來越多的被應(yīng)用于肺癌的臨床治療。盡管當(dāng)前分子靶向治療、基因治療、細(xì)胞免疫治療等新技術(shù)在肺癌治療中取得了較好的療效,但肺癌總體的5年生存率僅有16%。因此,探索并發(fā)現(xiàn)與肺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的重要分子靶點對于肺癌的預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療,以及預(yù)后評估具有重要的意義。長期反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥是引起細(xì)胞發(fā)生惡變,導(dǎo)致腫瘤形成的重要原因。迄今為止,腫瘤相關(guān)性炎癥(cancer-related inflammastion)已成為學(xué)術(shù)界公認(rèn)的除永生性、轉(zhuǎn)移性、無接觸抑制、生長信號過度激活、凋亡逃逸、持續(xù)的血管新生外腫瘤的第七種生物學(xué)特性。腫瘤相關(guān)性炎癥在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中主要表現(xiàn)在兩個方面:一方面,慢性炎癥反應(yīng)可通過破壞正常組織的基因穩(wěn)定性引起基因突變,促進(jìn)原癌基因表達(dá),抑制腫瘤免疫監(jiān)視等過程促進(jìn)腫瘤發(fā)生(carcinogenesis);另一方面,某些類型的腫瘤在產(chǎn)生后可以誘導(dǎo)其生長的微環(huán)境中形成持續(xù)的炎癥反應(yīng)。無論腫瘤微環(huán)境中的炎癥反應(yīng)起源如何,其均可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移以及血管新生,并抑制特異性免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷,促進(jìn)腫瘤耐藥形成。因此,發(fā)現(xiàn)“炎癌轉(zhuǎn)化”過程中的關(guān)鍵分子,一方面有助于抑制腫瘤相關(guān)性炎癥的形成,另一方面可為開發(fā)基于調(diào)控腫瘤相關(guān)性炎癥的治療藥物提供新靶點。肺纖維化(pulmonaryfibrosis)是彌漫性間質(zhì)性肺疾病的簡稱,是一種呼吸系統(tǒng)的常見疾病,其病理特征是肺泡壁(包括呼吸性細(xì)支氣管)彌漫性慢性炎癥和間質(zhì)纖維化。持續(xù)的慢性炎癥反應(yīng)是肺纖維化發(fā)生發(fā)展的主要機(jī)制之一。此類疾病的早期反應(yīng)表現(xiàn)為肺泡和肺泡壁內(nèi)炎性反應(yīng),形成肺泡炎。隨著疾病的進(jìn)展,炎癥逐漸蔓延到鄰近的肺間質(zhì)部分和血管,并誘導(dǎo)纖維母細(xì)胞活化增殖,大量分泌纖維蛋白并沉積于肺間質(zhì)內(nèi),產(chǎn)生間質(zhì)纖維化。隨著肺纖維化逐漸加重,肺組織破壞逐漸加劇,出現(xiàn)明顯的氣體交換功能損害,肺通氣功能降低,患者最終死于呼吸衰竭。引起肺纖維化的原因眾多,部分病因明確,其他則病因不明。目前,已知導(dǎo)致肺纖維化的明確的原因主要包括:職業(yè)或環(huán)境因素相關(guān)的無機(jī)或有機(jī)粉塵以及有害化學(xué)物質(zhì)的吸入,如石棉、硅石、金屬顆粒、霉草塵、棉塵、煙塵、二氧化硫等;病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲感染;某些特殊藥物及放射性損傷。由于我國空氣環(huán)境污染問題嚴(yán)重,人們在日常生活中吸入上述可誘導(dǎo)肺間質(zhì)纖維化的物質(zhì)的機(jī)會升高,從而導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化的發(fā)病率上升。除各種損傷、抗原物質(zhì)刺激引起的慢性炎癥反應(yīng)外,研究發(fā)現(xiàn),肺泡毛細(xì)血管屏障基底膜完整性的破壞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的再生修復(fù)功能抑制、轉(zhuǎn)化生長因子-β(transformationgrowthfactor-β,tgf-β)信號功能異常均參與了肺間質(zhì)纖維化的形成。尤其值得注意的是,近年來的研究已經(jīng)證實,上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(endothelial-to-mesenchymaltransition,emt)是纖肺維化過程中重要的細(xì)胞機(jī)制。肺間質(zhì)纖維化的預(yù)后差,且目前尚無特效藥物能夠阻斷其疾病進(jìn)程。因此,進(jìn)一步深入研究肺纖維化的形成機(jī)制,發(fā)現(xiàn)參與調(diào)節(jié)肺纖維化進(jìn)程的重要靶點,將有助于今后新型抗肺纖維化藥物的開發(fā)。炎癥小體(inflammasome)是由細(xì)胞內(nèi)多種蛋白在內(nèi)源性或外源性應(yīng)激作用下組裝形成的復(fù)合體,其激活后可產(chǎn)生具有生物學(xué)活性的caspase-1,后者可進(jìn)一步通過剪切作用激活炎癥因子il-1β和il-18。成熟的il-1β和il-18釋放至細(xì)胞外產(chǎn)生促炎作用�！把装Y小體”這一概念最早由tschopp等人于2002年提出。經(jīng)典的炎性小體由三部分構(gòu)成:1)核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域(nucleotide-bindingoligomerizationdomain,nod)樣受體(nod-likereceptors,nlr)或者黑色素瘤缺乏因子-2樣受體(absentinmelanoma2-likereceptor,alr),作為形成炎癥小體的框架蛋白或作為應(yīng)激信號感受器;2)凋亡相關(guān)斑點樣蛋白(apoptosis-associatedspeck-likeproteincontainingacard,asc),在炎癥小體組裝過程中作為接頭蛋白;3)半胱天冬蛋白酶-1(caspase-1),其經(jīng)剪切活化后可進(jìn)一步剪切il-1β和il-18前體,形成成熟的il-1β和il-18�，F(xiàn)已證實,感染或損傷等因素導(dǎo)致炎癥小體的持續(xù)激活是形成慢性炎癥的重要分子生物學(xué)基礎(chǔ)。近年來的研究表明,炎癥小體在消化系統(tǒng)腫瘤、前列腺癌和黑素瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。然而,炎癥小體在肺癌的形成和發(fā)展過程中具有何種作用尚不明確。此外,已有的研究表明,二氧化硅(sillica,sio2)晶體是誘導(dǎo)nlrp3炎癥小體活化的激活劑之一。而二氧化硅顆粒是空氣污染物中的主要成分之一,并且是導(dǎo)致職業(yè)相關(guān)性肺纖維化的主要因素之一。動物實驗發(fā)現(xiàn),敲除nlrp3基因可抑制小鼠吸入sio2微粒所致的小鼠肺部肉芽腫形成,降低膠原沉積和肺纖維化。而作為肺間質(zhì)纖維化過程中的重要細(xì)胞調(diào)控機(jī)制,上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(endothelial-to-mesenchymaltransition,emt)過程是否受nlrp3炎癥小體調(diào)控尚不明確。因此,本文第一部分工作研究炎癥小體在人源性肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及活性;第二部工作分采用肺癌患者手術(shù)切除的肺癌標(biāo)本,研究炎癥小體在肺癌組織中的表達(dá)和活化情況;第三部分工作研究nlrp3炎癥小體在二氧化硅(sio2)pm2.5顆粒誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞株發(fā)生上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變(epithelialtomesenchymaltransition,emt)過程中的作用;第四部分工作使用肺活檢樣本研究nlrp3炎癥小體在一例利妥昔單抗(rituximab,美羅華)所致間質(zhì)性肺病中的作用。本文工作開拓了炎癥小體在呼吸系統(tǒng)疾病研究的新領(lǐng)域,深化了對炎癥小體病理生理學(xué)功能的認(rèn)識,揭示了炎癥小體是調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的重要分子,并且在肺纖維化過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,為研發(fā)針對腫瘤相關(guān)炎癥的治療和抗肺纖維化藥物提供新的靶標(biāo)。第一部分炎癥小體在人肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)目的:研究不同亞型炎癥小體及活化產(chǎn)物在不同細(xì)胞類型、不同轉(zhuǎn)移能力以及不同化療敏感性的肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)豐度及其活化后產(chǎn)生炎癥因子il-1β的能力。方法:培養(yǎng)正常人源性肺泡上皮細(xì)胞株hpaepics(humanpulmonaryalveolarepithelialcells),正常人支氣管上皮細(xì)胞株16hbe(humanbronchiepithelialcellline),人肺泡上皮腺癌細(xì)胞株a549(humanalveolarepithelialadenocarcinomacellline)及耐順鉑a549/ddp細(xì)胞株,人肺鱗癌細(xì)胞株sk-mes-1(humanlungsquamouscellcancerline),人大細(xì)胞肺癌低轉(zhuǎn)移能力95c細(xì)胞株和高轉(zhuǎn)移能力95d細(xì)胞株[humanlarge-celllungcarcinomacelllineswithlow(95c)orhigh(95d)metastaticpotential],人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株nci-h446(humansmallcelllungcancercellline);采用定量實時多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitativereal-timepolymerasechainreaction,qrt-pcr)及蛋白質(zhì)印記法(westernblotting)測定構(gòu)成炎癥小體的不同組分,包括nod樣受體nalp1,nlrp3,nlrc4,aim2,asc,caspase-1以及il-1β和il-18前體及成熟體的表達(dá)。采用炭疽致死因子(anthraxlethalfactor,lf),短鏈同聚雙鏈dna(doublestraineddna,dsdna)片段poly(da:dt),脂多糖(lipopolysaccharides,lps)聯(lián)合三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate,atp),鼠傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白(flagellinfroms.typhimurium)分別活化各細(xì)胞株內(nèi)的nalp1,aim2,nlrp3及nlrc4炎癥小體,測定細(xì)胞上清液中il-1β水平。結(jié)果:構(gòu)成炎癥小體的不同組分在正常肺源性細(xì)胞株及肺癌細(xì)胞株內(nèi)均有表達(dá)。其中,nalp1高表達(dá)于16hbe、a549及nci-h446細(xì)胞株,中等表達(dá)于a549/ddp、sk-mes-1及95d細(xì)胞株,低表達(dá)于hpaepics及95c細(xì)胞株;aim2高表達(dá)于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株;nlrp3高表達(dá)于a549、95c、95d及nci-h446細(xì)胞株;nlrc4在各細(xì)胞株間表達(dá)水平經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗差異無顯著性;asc在a549、95d及nci-h446細(xì)胞株中表達(dá)水平顯著高于兩種正常肺源性細(xì)胞株(hpaepics和16hbe);pro-caspase-1、pro-il-1β和pro-il-18mrna在各組細(xì)胞株表達(dá)水平差異統(tǒng)計學(xué)檢驗無顯著性,但在肺癌細(xì)胞株中caspase-1活化體p10及il-1β和il-18成熟體蛋白水平顯著高于正常肺源性細(xì)胞株。值得注意的是,在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中,鱗癌細(xì)胞株sk-mes-1表達(dá)aim2、nlrp3、asc、caspase-1活化體、il-1β和il-18成熟體的蛋白水平低于腺癌a549及大細(xì)胞肺癌95d細(xì)胞株;耐順鉑a549/ddp細(xì)胞株表達(dá)aim2、nlrp3、asc及il-1β和il-18成熟體的蛋白水平顯著低于野生型a549細(xì)胞株;低轉(zhuǎn)移性大細(xì)胞肺癌95c細(xì)胞株表達(dá)nalp1、aim2、asc、caspase-1活化體、il-1β和il-18成熟體的蛋白水平顯著低于高轉(zhuǎn)移性大細(xì)胞肺癌95d細(xì)胞株。elisa結(jié)果顯示,各種細(xì)胞株內(nèi)的炎癥小體激活后均可釋放il-1β,肺癌細(xì)胞釋放能力強(qiáng)于正常細(xì)胞,且nlrp3炎癥小體激活后釋放il-1β的能力高于其他亞型的炎癥小體。結(jié)論:炎癥小體差異性表達(dá)于肺癌細(xì)胞株,其主要表達(dá)亞型及表達(dá)水平與肺癌細(xì)胞株的細(xì)胞學(xué)類型、轉(zhuǎn)移能力及化療敏感性相關(guān);表達(dá)于肺癌細(xì)胞株的不同亞型炎癥小體可被相應(yīng)的激活劑活化,促進(jìn)炎癥因子il-1β的釋放。第二部分炎癥小體在手術(shù)切除的i期肺癌組織中的表達(dá)目的:研究不同亞型炎癥小體及其活化產(chǎn)物在手術(shù)切除的i期肺鱗癌、腺癌及局限期小細(xì)胞肺癌樣本中的表達(dá)水平,揭示肺癌病灶內(nèi)炎癥小體與不同病理類型肺癌的相關(guān)性。方法:從南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤樣品組織庫中調(diào)取液氮凍存的2011年1月至2012年12月間手術(shù)切除的i期肺癌患者(小細(xì)胞肺癌為局限期患者)肺組織樣本用于qrt-pcr研究,包含17例鱗狀細(xì)胞癌(squamouscellcancer,scc);20例低級別肺腺癌(i-ii級,low-gradeadenocarcinoma,low-gradeadc);16例高級別肺腺癌(iii-iv級,high-gradeadenocarcinoma,high-gradeadc);8例小細(xì)胞肺癌(smallcelllungcancer,sclc);同時每組中隨機(jī)選取5例腫瘤樣本的癌旁正常組織(共計20例)組成對照組。此外,從我院病理科另外選取各4例上述病理類型肺癌手術(shù)切除組織的石蠟切片進(jìn)行免疫組化研究。通過免疫組織化學(xué)、qrt-pcr及westernblotting法檢測構(gòu)成炎癥小體的不同蛋白,包括nalp1、aim2、nlrp3、nlrc4、asc、caspase-1以及il-1β和il-18的表達(dá)。結(jié)果:在癌旁正常組織中,構(gòu)成炎癥小體的nalp1、aim2、nlrp3、nlrc4、asc、caspase-1、il-1β及il-18表達(dá)水平低。qrt-pcr可檢測出nalp1及nlrc4在不同組織中的mrna表達(dá),且各組織中mrna的含量統(tǒng)計學(xué)檢驗差異無顯著性,但免疫組化研究在癌旁正常組織及各肺癌組織中均未檢測出nalp1及nlrc4的陽性表達(dá)信號。aim2、nlrp3及asc在肺癌組織中的表達(dá)量顯著高于癌旁正常組織。aim2高表達(dá)于腺癌樣本,中度表達(dá)于鱗癌樣本,在小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)量低;nlrp3及asc在高級別腺癌組織中表達(dá)量最高,中度表達(dá)于低級別腺癌組織及小細(xì)胞肺癌組織,在鱗癌樣本中表達(dá)量相對較低。caspase-1、il-1β及il-18成熟體在肺癌細(xì)胞組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織,且以高級別腺癌組織中表達(dá)水平為最高。結(jié)論:炎癥小體高表達(dá)于肺癌組織,且與腫瘤病理類型相關(guān)。肺腺癌組織中炎癥小體表達(dá)水平高于鱗癌,且高級別肺腺癌表達(dá)水平最高。表明高級別肺腺癌中炎癥小體介導(dǎo)的腫瘤相關(guān)性炎癥反應(yīng)強(qiáng)于其他類型肺癌。第三部分nlrp3炎癥小體在二氧化硅pm2.5誘導(dǎo)的支氣管上皮16hbe細(xì)胞株emt中的作用目的:研究公認(rèn)的nlrp3炎癥小體活化劑之一——二氧化硅2.5μm細(xì)顆粒物(sio2pm2.5)是否能誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞16hbe細(xì)胞株發(fā)生emt現(xiàn)象,并初步探索nlrp3炎癥小體在這一過程中的作用及相關(guān)機(jī)制,揭示nlrp3炎癥小體在sio2誘導(dǎo)的肺纖維化早期事件emt過程中的可能作用。方法:將不同濃度sio2pm2.5加入16hbe細(xì)胞培養(yǎng)基中,采用cck8法測定測定sio2pm2.5作用不同時間(24,48,72小時)對16hbe細(xì)胞活力的影響;檢測emt發(fā)生率及emt標(biāo)志性分子e-鈣黏蛋白(e-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscleactin,α-sma)表達(dá)變化,評估sio2pm2.5是否能夠誘導(dǎo)16hbe發(fā)生emt;同時測定16hbe細(xì)胞內(nèi)nlrp3炎癥小體活化水平;確定可引起16hbe細(xì)胞發(fā)生emt效應(yīng)及nlrp3炎癥小體活化的合適sio2pm2.5濃度和作用時間。采用慢病毒轉(zhuǎn)染短發(fā)卡樣rna(shorthairpinrna,shrna)下調(diào)16hbe細(xì)胞中nlrp3表達(dá);研究抑制nlrp3表達(dá)對sio2pm2.5誘導(dǎo)16hbe發(fā)生emt效應(yīng)及nlrp3炎癥小體活化的影響。通過westernblotting法檢測emt過程中主要信號分子smad2/3,gsk3β,β-catenin及sanil的表達(dá)情況,揭示相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制。結(jié)果:sio2pm2.5對16hbe細(xì)胞具有濃度和時間依賴性的毒性作用,在損傷細(xì)胞的同時可濃度和時間依賴性的誘導(dǎo)16hbe細(xì)胞發(fā)生emt現(xiàn)象。sio2pm2.5在誘導(dǎo)16hbe細(xì)胞發(fā)生emt效應(yīng)的同時可激活細(xì)胞內(nèi)nlrp3炎癥小體;相同濃度的sio2pm2.5可時間依賴性的促進(jìn)nlrp3炎癥小體活化并釋放成熟的il-1β和il-18。下調(diào)nlrp3表達(dá)后能顯著抑制sio2pm2.5誘導(dǎo)的16hbe細(xì)胞發(fā)生emt效應(yīng),同時抑制nlrp3炎癥小體表達(dá)及活化過程,表現(xiàn)為nlrp3上調(diào)被阻斷,caspase-1活化被減弱,但不能抑制細(xì)胞外液中的il-1β和il-18水平升高。分子生物學(xué)研究顯示,下調(diào)nlrp3表達(dá)可能通過抑制細(xì)胞內(nèi)smad2/3-snail信號傳導(dǎo)過程而減輕sio2pm2.5誘導(dǎo)16hbe細(xì)胞發(fā)生emt。結(jié)論:sio2pm2.5可誘導(dǎo)16hbe細(xì)胞發(fā)生emt效應(yīng)的同時活化細(xì)胞內(nèi)nlrp3炎癥小體。下調(diào)nlrp3的表達(dá)可抑制sio2pm2.5對16hbe細(xì)胞emt的誘導(dǎo)作用。nlrp3炎癥小體的這一作用可能是通過調(diào)節(jié)smad2/3-snail信號通路實現(xiàn)。因此,調(diào)控nlrp3炎癥小體的表達(dá)和功能可能是預(yù)防和治療空氣污染顆粒物質(zhì)對肺組織損傷、誘導(dǎo)肺纖維化及肺癌過程的有效策略。第四部分nlrp3炎癥小體在利妥昔單抗所致間質(zhì)性肺病中的作用(臨床病例研究1例)目的:研究利妥昔單抗(rituximab,美羅華)所致間質(zhì)性肺病(rituximab-inducedinterstitiallungdisease,r-ild)的病理學(xué)改變及nlrp3炎癥小體在患者肺部病灶中的表達(dá)與分布,揭示外周血中炎癥小體相關(guān)因子il-1β及il-18與肺部影像學(xué)改變的關(guān)系,為研究此類疾病的發(fā)病機(jī)制和藥物治療學(xué)機(jī)制提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。方法:通過使用糖皮質(zhì)激素及抗感染藥物搶救一例因使用利妥昔單抗治療特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,itp)導(dǎo)致r-ild合并呼吸衰竭患者;采集患者外周血,采用elisa方法測定血清中il-1β及il-18水平在治療過程中的動態(tài)變化;使用高分辨率ct(highresolutionct,hrct)動態(tài)觀察患者肺部病灶恢復(fù)情況;患者病情改善,肺部病灶經(jīng)治療后部分吸收時,與患者及家屬溝通簽署知情同意,行電視輔助胸腔鏡手術(shù)(video-assistedthoracoscopicsurgery,vats)取患者肺內(nèi)病變殘留部位及恢復(fù)部位肺組織行病理學(xué)檢查;采用天狼星紅染色及免疫組織化學(xué)染色法研究肺組織內(nèi)纖維化改變及nlrp3、asc、caspase-1在肺組織病損部位及恢復(fù)部位中的表達(dá)。結(jié)果:患者呼吸衰竭經(jīng)使用糖皮質(zhì)激素及抗感染治療后被糾正;hrct檢查顯示患者肺部病灶在治療5天后部分吸收,治療14天后病灶明顯吸收,治療45天后幾乎完全吸收;治療5天后行vats肺活檢病理學(xué)結(jié)果顯示,患者肺部病變?yōu)榉翘禺愋蚤g質(zhì)性肺炎(nonspecificinterstitialpneumonia,nsip),肺間質(zhì)內(nèi)見大量CD19陽性B淋巴細(xì)胞與漿細(xì)胞浸潤;天狼星紅染色可見病變部位肺間質(zhì)內(nèi)大量膠原纖維堆積;免疫組化染色結(jié)果可見NLRP3、ASC、caspase-1在肺組織病變部位中高表達(dá)。上述病理學(xué)改變在活檢肺組織恢復(fù)部位中消失。ELISA結(jié)果顯示,患者外周血中IL-1β及IL-18水平隨治療時間逐漸降低。結(jié)論:NLRP3炎癥小體參與R-ILD的發(fā)生過程;糖皮質(zhì)激素治療能有效抑制R-ILD過程中肺內(nèi)NLRP3炎癥小體活化并逆轉(zhuǎn)R-ILD過程中肺間質(zhì)膠原纖維沉積;外周血中IL-1β及IL-18水平與肺組織內(nèi)間質(zhì)性病變恢復(fù)過程存在時間上的相關(guān)性,可能成為監(jiān)測藥物源性肺間質(zhì)病變的分子標(biāo)志物。綜上所述,本研究工作的主要創(chuàng)新之處:1.發(fā)現(xiàn)不同類型肺癌細(xì)胞株與組織中炎癥小體的表達(dá)情況,為肺癌中腫瘤相關(guān)性炎癥提供依據(jù);2.揭示炎癥小體與肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移性、耐藥性以及細(xì)胞病理學(xué)之間的關(guān)系,為今后開發(fā)靶向調(diào)控炎癥小體表達(dá)和功能的新型肺癌輔助治療藥物提供新的靶點;3.初步闡明NLRP3炎癥小體在SiO2 PM2.5誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT作用中的調(diào)節(jié)作用,為今后使用NLRP3炎癥小體抑制劑預(yù)防和治療空氣污染顆粒物質(zhì)所致肺損傷、纖維化以及防止后續(xù)肺癌的產(chǎn)生提供新的思路;4.發(fā)現(xiàn)NLRP3炎癥小體參與利妥昔單抗所致間質(zhì)性肺病的形成,豐富了對此類藥物源性肺損傷疾病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識。
【關(guān)鍵詞】：炎癥小體 炎癥因子 肺癌 肺纖維化 上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變 間質(zhì)性肺炎
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2;R563
【目錄】：

• 中英文縮略語表4-6
• 中文摘要6-15
• Abstract15-25
• 前言25-32
• 第一部分 炎癥小體在人肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)32-59
• 實驗材料和方法33-42
• 結(jié)果42-54
• 討論54-58
• 結(jié)論58-59
• 第二部分 炎癥小體在人肺癌組織中的表達(dá)59-75
• 實驗材料和方法59-64
• 結(jié)果64-71
• 討論71-74
• 結(jié)論74-75
• 第三部分NLRP3炎癥小體在二氧化硅PM2.5 誘導(dǎo)的支氣管上皮 16HBE細(xì)胞株EMT中的作用75-103
• 實驗材料和方法77-82
• 結(jié)果82-97
• 討論97-102
• 結(jié)論102-103
• 第四部分NLRP3炎癥小體在利妥昔單抗所致間質(zhì)性肺病中的作用(臨床病例研究1例)103-118
• 病例簡介104-106
• 實驗材料和方法106-107
• 結(jié)果107-115
• 討論115-117
• 結(jié)論117-118
• 結(jié)語118-121
• 參考文獻(xiàn)121-136
• 綜述136-157
• 參考文獻(xiàn)149-157
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況157-158
• 致謝158

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3 李雪茹,杜玉國;Clava細(xì)胞10kD蛋白(CC10)與肺炎癥性疾病[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);1999年04期

4 白春學(xué);;COPD的炎癥和抗炎研究進(jìn)展[J];繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2007年02期

5 王莎麗;炎癥細(xì)胞是癌的朋友還是對頭?[J];自然雜志;2003年04期

6 邢夢龍;;炎癥與醫(yī)藥[J];上海醫(yī)藥情報研究;2003年02期

7 王勝;徐鳳珍;陳余清;;慢性阻塞性肺疾病患者痰液炎癥細(xì)胞計數(shù)與分類及其意義[J];臨床內(nèi)科雜志;2006年06期

8 潔先生;;肌膚炎癥新解[J];飲食科學(xué);2009年03期

9 ;炎癥[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年06期

10 邢夢龍;;炎癥與醫(yī)藥開發(fā)[J];上海醫(yī)藥情報研究;2004年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 吳大瑋;;抗炎治療在慢性阻塞性肺疾病治療中的地位:基礎(chǔ)與臨床依據(jù)[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國呼吸病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2006年

2 李云波;;電針對外周炎癥性疼痛的調(diào)節(jié)[A];2012浙江省針灸學(xué)會年會暨學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2012年

3 吳大瑋;;抗炎治療在COPD治療中的地位——基礎(chǔ)與臨床依據(jù)[A];華東地區(qū)第6屆中青年呼吸醫(yī)師論壇暨浙江省第29屆呼吸疾病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 通訊員 郝成濤;肝臟中清除炎癥細(xì)胞的“功臣”現(xiàn)身[N];科技日報;2009年

2 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院呼吸內(nèi)科主任醫(yī)師 黃紹光 整理 王寧;慢阻肺干預(yù) 抗炎是關(guān)鍵[N];健康報;2012年

3 特約記者吳志軍 通訊員郝成濤;肝臟中一種重要免疫調(diào)控蛋白被發(fā)現(xiàn)[N];健康報;2009年

4 郝成濤;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)肝臟免疫調(diào)控蛋白[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔輝;炎癥小體與肺癌及肺纖維化的相關(guān)性研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

2 梅曉冬;HMGB在吸煙導(dǎo)致慢性肺部炎癥/肺氣腫發(fā)生機(jī)制中的作用研究[D];山東大學(xué);2013年

3 魏晶;人新基因TMEM98在炎癥中作用的體內(nèi)外研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2014年

4 周勇;環(huán)氧二十碳三烯酸對急性肺損傷保護(hù)作用的初步研究[D];中南大學(xué);2013年

5 唐勇軍;神經(jīng)生長因子調(diào)控慢性阻塞性肺疾病氣道神經(jīng)源性炎癥研究[D];中南大學(xué);2006年

6 陳立立;TM4基因通過Nur77-IKKβ-NF-κB通路抑制高脂誘導(dǎo)的代謝性炎癥[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

7 湯渝玲;神經(jīng)生長因子致哮喘神經(jīng)源性炎癥信號傳導(dǎo)通路研究[D];中南大學(xué);2006年

8 高鵬;基于誘導(dǎo)痰炎癥細(xì)胞分類的AECOPD新分型及其臨床意義的研究[D];吉林大學(xué);2013年

9 王青青;Tlr4~(mut)小鼠自發(fā)性肺氣腫的免疫機(jī)制及治療干預(yù)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

10 劉嶸;TIM-3對人氣道上皮細(xì)胞株16HBE的NF-κB及炎癥相關(guān)因子表達(dá)水平調(diào)控的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王麗娜;改變11β-HSD1的表達(dá)水平對細(xì)胞炎性損傷的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

2 姚我;肺氣腫合并睡眠相關(guān)低氧大鼠炎癥特點的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

3 曾曉麗;過氧化物酶體增殖物激活受體-γ在慢性阻塞性肺疾病炎癥中的作用[D];蘭州大學(xué);2011年

4 錢文君;COPD病人T淋巴細(xì)胞和細(xì)胞因子的檢測及意義[D];蘇州大學(xué);2010年

5 羅邦偉;EAN中促紅細(xì)胞生成素是炎癥誘導(dǎo)的內(nèi)源性保護(hù)分子[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 馬曉峰;維生素D對慢性阻塞性肺疾病的影響[D];蘭州大學(xué);2013年

7 劉登昌;STAT3在地塞米松對LPS刺激小鼠肺泡巨噬細(xì)胞功能變化中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

8 木葉沙爾·皮達(dá)義;462例維漢族COPD住院患者的臨床特征及實驗室指標(biāo)對比分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

9 王娟;聯(lián)合應(yīng)用PET/CT和DCE-MRI探究頸動脈粥樣硬化斑塊的炎癥特征[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

10 張陽;NLRP3炎癥小體在高尿酸誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

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本文編號：1102008