本文關(guān)鍵詞：替普瑞酮抵抗環(huán)境應激所致抑郁的作用機制研究

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【摘要】：抑郁癥是一種以情緒低落為核心癥狀,并表現(xiàn)出興趣低下,活動減少,飲食睡眠改變,可伴有植物神經(jīng)癥狀,持續(xù)2周以上,且反復發(fā)作的精神疾病。由于本病對工作、生活、人際關(guān)系有明顯的影響,甚至會導致自殺,因此,危害嚴重。它是一種常見的疾病,終身患病率高達20%, WHO全球疾病負擔合作研究預測,到2020年抑郁癥將成為第二大疾病負擔源,所以對抑郁癥的研究值得高度重視。抑郁癥的發(fā)病機制目前尚未完全清楚,有學者提出抑郁癥是一種生物化學失衡的慢性復發(fā)性腦病。它的發(fā)生與心理、社會、環(huán)境、生物因素都有關(guān),應激與抑郁易損基因的相互作用,導致神經(jīng)內(nèi)分泌異常、免疫應答反應、神經(jīng)遞質(zhì)代謝和受體功能異常,神經(jīng)元可塑性改變,并可以誘發(fā)氧化應激和神經(jīng)細胞的凋亡,以及神經(jīng)退行性改變等一系列腦功能與結(jié)構(gòu)的異常。熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)是應激狀態(tài)下多種細胞內(nèi)都會產(chǎn)生的,對細胞產(chǎn)生保護作用的蛋白質(zhì)家族。HSP的主要生物學功能是幫助蛋白質(zhì)折疊、移位、復性和降解。其中HSP70具有進化的高度保守性,通過抑制氧自由基的活性,而產(chǎn)生抗氧化,通過與凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1(apoptosis signaling kinase1, ASK1)結(jié)合,阻礙Jun氨基末端激酶-1 (Jun N-terminal kinase-1 JNK1)活性,穩(wěn)定cAMP-環(huán)磷酸腺苷依賴性蛋白激酶C(cAMP-dependent protein kinase C, PKC),而抑制細胞凋亡蛋白酶3(caspase-3)凋亡途徑,具有抗凋亡作用；還作為伴侶分子,參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激。且參與腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor BDNF)介導的神經(jīng)營養(yǎng)作用,因此與抑郁癥有關(guān)。硫氧還蛋白-1(thioredoxin-1,Trx-1)是一個小分子(分子量為12 KD)的蛋白質(zhì),普遍存在于原核細胞和真核細胞,進化中高度保守。其活性位點序列為Cys-Gly-Pro-Cys,并通過這一位點實現(xiàn)其氧化還原功能。硫氧還蛋白通過與ASK1結(jié)合,致ASK1活性喪失,從而抑制下游的p38和JNK的細胞凋亡信號傳導途徑,而具有抗凋亡的作用。硫氧還蛋白是環(huán)磷酸腺苷-反應結(jié)合蛋白(cAMP-responsive element-binding protein, CREB)的下游靶分子,在神經(jīng)生長因子介導的神經(jīng)營養(yǎng)信號轉(zhuǎn)導中有重要作用。并與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激有關(guān)。替普瑞酮(geranylgeranylacetone,GGA)是一種脂溶性化合物,較容易透過血腦屏障,主要被應用于胃潰瘍的治療。GGA的神經(jīng)保護機制是通過上調(diào)HSP70與Trx-1的表達實現(xiàn)的。慢性溫和應激是最常用的抑郁癥的動物模型制作的方式,通過進一步的糖水偏好實驗或敞箱實驗等抑郁行為學檢測,來判斷抑郁癥狀的嚴重性。單胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO)是一種氧化酶,其作用可以降解單胺類神經(jīng)遞質(zhì),是抑郁癥狀的一種生物學標志。抑郁癥被證實存在神經(jīng)元的凋亡,凋亡的途徑包括線粒體途徑與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑。本研究的結(jié)果顯示：(1)慢性溫和應激(Chronic Mild Stress, CMS)后大鼠的HSP70水平在海馬與額葉均較正常對照組有所下降,用Western Blotting與免疫組化的方法均顯示抑郁組的HSP70水平降低,說明抑郁癥存在HSP70的保護作用下降。在海馬區(qū)的HSP70水平下降,可以影響動物的興趣,表現(xiàn)為糖水偏好的下降；額葉的HSP70水平下降,可以影響動物的活動量,出現(xiàn)運動的減少,表現(xiàn)為敞箱實驗中運動指標下降(p0.05)。標準3周的CMS大鼠的糖水偏好程度下降,水平運動指數(shù)、中央格停留時間減少,CMS延長至6周后糖水偏好程度的上升,水平運動指數(shù)、中央格停留增加,標準組與延長組間有顯著差異(p0.05)；Western-Blot、免疫組化檢測顯示延長CMS組的HSP70在海馬與額葉均高于標準CMS組(p0.05)。RT-PCR檢測顯示延長CMS組的HSP70在海馬高于標準CMS組(p0.05)。老年組糖水偏好程度的下降、垂直運動指數(shù)、水平運動指數(shù)、中央格停留時間均低于青年組(p0.05)；Western-Blot、RT-PCR、免疫組化檢測顯示老年組的HSP70在海馬與額葉均低于青年組(p0.05)。雌性組糖水偏好程度的下降、垂直運動指數(shù)、水平運動指數(shù)均低于雄性組(p0.05)；Western-Blot、RT-PCR、免疫組化檢測顯示雌性組的HSP70在海馬低于雄性組(p0.05)。(2)GGA治療的抑郁大鼠的糖水偏好率、敞箱實驗中的水平運動值、垂直運動值、清潔時間均優(yōu)于生理鹽水對照的抑郁大鼠(p0.05)。(3)通過Western Blotting、RT-PCR、免疫組織化學的檢測,應激+GGA組的HSP70水平明顯低于應激組(p0.05)。應激+GGA組的caspase-3、單胺氧化酶A(MAO-A)水平明顯低于應激組(p0.05)。(4)抑郁組大鼠Trx-1、CREB水平顯著低于空白對照組,MAO水平高于空白對照組；GGA治療后的大鼠Trx-1、CREB水平明顯高于抑郁組,MAO水平明顯降低,三組間有顯著性差異。(p0.05)(5)抑郁大鼠額葉的葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein78, GRP78)、 C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)水平較空白對照組明顯升高, GGA治療后CHOP水平顯著下降。抑郁大鼠額葉的Pro-caspase-3、 Pro-caspase-12水平較空白對照組明顯降低, GGA治療后Pro-caspase-3水平顯著增加(p0.05)。Pro-caspase-9水平,JNK與P-JNK的比值在三組間也無顯著性差異(p0.05)。(6)促HSP70表達藥物阿托伐他汀治療腦梗死后抑郁患者：(1)強化降脂治療和標準降脂治療3月后腦梗死患者低密度脂蛋白膽固醇、總膽固醇均有明顯下降,與治療前比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而漢密爾頓抑郁量表評分治療前后無差異(p0.05)。(2)40 mg組、20 mg組治療前后對比顯示,治療后HAMD、血液檢測指標均無明顯差異(p0.05)。(7)GGA治療消化性潰瘍合并抑郁癥患者：隨訪四周后觀察,GGA組潰瘍好轉(zhuǎn)的有31例,對照組潰瘍好轉(zhuǎn)的有20例,兩組間無差異(p0.05)。但兩組間HAMD評分比較顯示,GGA組的明顯低于對照組(P0.05),有統(tǒng)計學意義�？傊�,HSP70與Trx-1對抑郁樣行為具有抵抗作用；原因可能與HSP70與Trx-1高表達抑制MAO-A、MAO、抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激、抗凋亡的作用有關(guān)；老年、雌性抑郁大鼠HSP70的表達低于青年、雄性大鼠；應激時間延長,抑郁癥狀緩解的同時,HSP70表達增加；促HSP70與Trx-1藥物對抑郁有效、安全。
【關(guān)鍵詞】：慢性溫和應激 熱休克蛋白70 硫氧還蛋白-1 替普瑞酮 單胺氧化酶 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激 抑郁癥
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R749.4
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 縮略語索引13-22
• 第一章 緒論22-42
• 1.1 抑郁癥22-24
• 1.2 環(huán)境與抑郁癥24-25
• 1.3 抑郁癥與氧化應激的關(guān)系25-28
• 1.3.1 抑郁癥氧化應激反應的原因25-26
• 1.3.2 氧化應激對抑郁癥的作用26-27
• 1.3.3 抑郁癥中抗氧化物質(zhì)的表現(xiàn)27-28
• 1.4 抑郁癥與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的關(guān)系28-36
• 1.4.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激30-32
• 1.4.2 心理應激引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激32-33
• 1.4.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激導致疾病33-34
• 1.4.4 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與心身疾病34-35
• 1.4.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與神經(jīng)、心理疾病35-36
• 1.5 HSP70、Trx-1及其誘導物GGA36-38
• 1.6 抑郁癥的動物模型38-39
• 1.7 本研究的目的、意義、技術(shù)路線39-42
• 1.7.1 研究的目的39
• 1.7.2 主要研究內(nèi)容39-40
• 1.7.3 技術(shù)路線40-42
• 第二章 抑郁癥大鼠腦HSP70的改變42-63
• 2.1 引言42
• 2.2 材料與方法42-50
• 2.2.1 試劑42-43
• 2.2.2 相關(guān)試劑的配制43-44
• 2.2.3 主要儀器與設(shè)備44
• 2.2.4 動物44-47
• 2.2.5 抑郁癥狀行為學檢測47
• 2.2.6 慢性溫和應激47
• 2.2.7 取材與固定47-49
• 2.2.8 Western Blotting49
• 2.2.9 RT-PCR49-50
• 2.2.10 免疫組織化學50
• 2.2.11 統(tǒng)計學方法50
• 2.3 結(jié)果50-59
• 2.3.1 慢性溫和應激對大鼠抑郁樣行為以及HSP70的影響50-52
• 2.3.2 延長慢性溫和應激時間對抑郁樣行為以及HSP70的影響52-55
• 2.3.3 老年對大鼠的抑郁樣行為以及HSP70的影響55-57
• 2.3.4 性別對大鼠的抑郁樣行為以及HSP70的影響57-59
• 2.4 討論59-62
• 2.5 本章小結(jié)62-63
• 第三章 HSP70誘導物GGA對抑郁大鼠行為的影響63-69
• 3.1 引言63
• 3.2 材料與方法63-65
• 3.2.1 動物與GGA治療63-64
• 3.2.2 抑郁癥狀行為學檢測64-65
• 3.2.3 慢性溫和應激65
• 3.2.4 統(tǒng)計學統(tǒng)計學方法65
• 3.3 結(jié)果65-67
• 3.4 討論67-68
• 3.5 本章小結(jié)68-69
• 第四章 GGA誘導大鼠腦HSP70表達的抗抑郁機制69-76
• 4.1 引言69
• 4.2 材料與方法69-72
• 4.2.1 試劑69
• 4.2.2 相關(guān)試劑的配制69
• 4.2.3 主要儀器與設(shè)備69
• 4.2.4 動物與GGA治療69-70
• 4.2.5 抑郁癥狀行為學檢測70
• 4.2.6 慢性溫和應激70
• 4.2.7 取材與固定70
• 4.2.8 Western Blotting70-71
• 4.2.9 RT-PCR71
• 4.2.10 免疫組織化學71-72
• 4.2.11 統(tǒng)計學方法72
• 4.3 結(jié)果72-74
• 4.3.1 GGA誘導抑郁大鼠的HSP70表達72-73
• 4.3.2 GGA抑制抑郁大鼠caspase-3的表達73-74
• 4.3.3 GGA抑制抑郁大鼠MAO-A的表達74
• 4.4 討論74-75
• 4.5 本章小結(jié)75-76
• 第五章 GGA誘導大鼠腦Trx-1表達的抗抑郁機制76-81
• 5.1 引言76
• 5.2 材料與方法76-77
• 5.2.1 試劑76
• 5.2.2 相關(guān)試劑的配制76
• 5.2.3 主要儀器與設(shè)備76
• 5.2.4 動物76
• 5.2.5 抑郁癥狀行為學檢測76
• 5.2.6 慢性溫和應激76
• 5.2.7 取材與固定76-77
• 5.2.8 Western Blotting77
• 5.2.9 統(tǒng)計學方法77
• 5.3 結(jié)果77-79
• 5.3.1 GGA誘導抑郁大鼠Trx-1表達77-78
• 5.3.2 GGA抑制抑郁大鼠MAO表達78-79
• 5.3.3 GGA誘導抑郁大鼠CREB表達增加79
• 5.4 討論79-80
• 5.5 本章小結(jié)80-81
• 第六章 GGA抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡抗抑郁的機制81-88
• 6.1 引言81
• 6.2 材料與方法81-82
• 6.2.1 試劑81
• 6.2.2 相關(guān)試劑的配制81
• 6.2.3 主要儀器與設(shè)備81
• 6.2.4 動物81
• 6.2.5 抑郁癥狀行為學檢測81
• 6.2.6 慢性溫和應激81
• 6.2.7 取材與固定81-82
• 6.2.8 Western Blotting82
• 6.2.9 統(tǒng)計學方法82
• 6.3 結(jié)果82-84
• 6.3.1 GGA對慢性溫和應激誘導的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的影響82-83
• 6.3.2 GGA對抑郁大鼠凋亡途徑的作用83-84
• 6.4 討論84-87
• 6.5 本章小結(jié)87-88
• 第七章 促HSP70、Trx-1藥物抗抑郁作用的臨床研究88-96
• 7.1 引言88
• 7.2 促HSP70表達的藥物阿托伐他汀對腦梗死后抑郁患者的影響88-93
• 7.2.1 阿托伐他汀對腦梗死后抑郁癥狀的影響88-90
• 7.2.2 不同強化降脂治療對老年腦梗死安全性的比較90-92
• 7.2.3 討論92-93
• 7.3 促HSP70、Trx-1表達的替普瑞酮對消化性潰瘍合并抑郁患者的影響93-95
• 7.3.1 對象與方法93-94
• 7.3.2 結(jié)果94
• 7.3.3 討論94-95
• 7.4 本章小結(jié)95-96
• 第八章 本研究結(jié)論與展望96-103
• 8.1 HSP70在抑郁癥中的表現(xiàn)96-97
• 8.2 Trx-1在抑郁癥中的表達97-98
• 8.3 GGA誘導HSP70、Trx-1表達在抑郁癥的作用與機制98-100
• 8.4 本研究的創(chuàng)新性100-101
• 8.5 臨床應用價值101-102
• 8.6 存在不足102
• 8.7 展望102-103
• 致謝103-104
• 參考文獻104-116
• 附錄A116-117

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王旭萍;環(huán)境、機體應激和營養(yǎng)需求[J];高原醫(yī)學雜志;1995年04期

，

本文編號：1100564