本文關(guān)鍵詞：p300和HDAC1相互調(diào)節(jié)RORγt乙酰化和功能

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【摘要】：輔助性T細(xì)胞17(T helper cells 17,Th17 cell)是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的不同于Th1、Th2和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cells,Treg)的一群CD4+T細(xì)胞亞群。因其主要分泌白細(xì)胞介素-17(Interleukin 17,IL-17),被命名為T(mén)h17細(xì)胞。IL-17在組織炎癥中主要通過(guò)誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生而發(fā)揮作用,如IL-6和CXCL8等。由于IL-17很強(qiáng)的前炎癥因子作用,Th17細(xì)胞與多種自身免疫性疾病和感染性疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān),如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematous,SLE)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)、多發(fā)性硬化癥(Multiple sclerosis,MS)、炎癥性腸炎(Inflammatory bowel disease,IBD)、銀屑病(Psoriasis)以及橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)等。維甲酸相關(guān)孤兒核受體(Retinoid-related orphan receptor gammat,RORγt)是Th17細(xì)胞最重要的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子,和其他轉(zhuǎn)錄因子一起協(xié)同促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化,如RORα、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、白細(xì)胞介素調(diào)節(jié)因子4(Interferon regulatory factor 4,IRF4)、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Runt-related transcription factor 1,Runx1)、芳香烴受體(Aryl hydrocarbon receptor,AHR)以及B細(xì)胞活化轉(zhuǎn)錄因子(B cell-activating transcription factor,BATF)等。另外,T轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β),IL-6,IL-23和IL-1β是Th17細(xì)胞分化和增殖的必要生長(zhǎng)因子,并且可以促進(jìn)IL-17,IL-23受體(Interleukin 23 receptor,IL-23R)以及RORγt的表達(dá)。在生物體內(nèi),組蛋白乙酰化和組蛋白去乙�；幱趧�(dòng)態(tài)平衡,精確地調(diào)控基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄,從而維持細(xì)胞的正常生理和生化過(guò)程。乙�；▽�(duì)組蛋白的乙�；约稗D(zhuǎn)錄因子的乙�；�,其中通過(guò)修飾轉(zhuǎn)錄因子可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,亞細(xì)胞定位以及DNA的結(jié)合能力。另外,在生物體內(nèi),泛素化修飾在蛋白質(zhì)的降解、定位、代謝和功能方面也起著十分重要的作用,它參與了細(xì)胞增殖、分化、凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄控制、DNA修復(fù)和免疫應(yīng)答等細(xì)胞調(diào)控。Th17細(xì)胞的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子RORγt的表達(dá)、翻譯后修飾狀態(tài)及其活性的調(diào)節(jié)決定著Th17細(xì)胞的免疫活性。然而RORγt如何調(diào)節(jié)仍舊不是十分清楚。本研究首先通過(guò)免疫沉淀檢測(cè)到在人源Th17細(xì)胞存在乙�；腞ORγt,而且這種乙酰化作用在組蛋白去乙�；敢种苿┐嬖诘那闆r下更為顯著;免疫共沉淀證實(shí)在人源Th17細(xì)胞組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(Histon acetyltransferase,HATs)p300可以和RORγt相互作用;免疫印跡結(jié)果發(fā)現(xiàn)p300可以穩(wěn)定RORγt的蛋白水平且呈劑量依賴性;應(yīng)用免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)p300可以乙酰化RORγt,且乙�；奈稽c(diǎn)主要在RORγt的第81位的賴氨酸。此外,應(yīng)用Ni-NTA鎳螯合樹(shù)脂純化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p300可以泛素化RORγt,泛素化的位點(diǎn)主要在RORγt的第258位的賴氨酸,且p300泛素化RORγt蛋白主要針對(duì)63位賴氨酸相關(guān)的泛素化;利用基因沉默方法(shRNA)在人源Th17細(xì)胞中消減p300后,減少RORγt蛋白水平以及RORγt有關(guān)的基因表達(dá);利用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)p300上調(diào)了RORγt介導(dǎo)的IL-17表達(dá)且為劑量依賴性。更為有趣的是,組蛋白去乙酰化酶(Histon deacetylase,HDACs)HDAC1也可以與RORγt相互作用,同時(shí)可以去乙�；疪ORγt。另外,HDAC1可以抑制p300依賴的RORγt介導(dǎo)的IL-17的轉(zhuǎn)錄。人源Th17細(xì)胞存在乙酰化的RORγt,本研究力圖從分子和基因水平闡明乙酰轉(zhuǎn)移酶p300以及去乙�；窰DAC1相互調(diào)控RORγt的分子機(jī)制,從而為臨床自身免疫病防治提供線索和理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：T輔助細(xì)胞 17維甲酸孤兒核受體 乙�；� 去乙酰化 泛素化 p300 HDAC1
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中英文縮略語(yǔ)對(duì)照表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-22
• 2 實(shí)驗(yàn)材料與方法22-38
• 3 結(jié)果38-52
• 4 討論52-55
• 5 結(jié)論55-56
• 6 參考文獻(xiàn)56-67
• 附錄67-69
• 致謝69-70
• 綜述70-88
• 參考文獻(xiàn)77-88

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本文編號(hào)：1097712