本文關(guān)鍵詞：新疆準噶爾烏頭親緣關(guān)系、炮制毒效活性及化學成分研究

  更多相關(guān)文章： 準噶爾烏頭 親緣關(guān)系 藥理活性 炮制減毒 化學成分

【摘要】：目的:準噶爾烏頭為毛茛科植物準噶爾烏頭(Aconitum soongaricum Stapf.)的干燥塊根,分布于我國新疆北疆地區(qū),塊根入藥。準噶爾烏頭是有毒藥用植物,也是近年危害新疆草場的主要毒害草,如能利用,則可變毒為寶。因此擬研究準噶爾烏頭是否與《中國藥典》收載的烏頭類藥材,如川烏、草烏具有一定親緣關(guān)系,是否具有與烏頭類藥材相類似的鎮(zhèn)痛、抗炎、調(diào)節(jié)免疫等藥用價值,是否可通過炮制降低毒性,在明晰其藥用價值的前提下,進行生物堿單體成分的提取、分離和毒效活性研究,為使準噶爾烏頭成為川烏或草烏的替代藥材,為建立其法定藥材質(zhì)量標準奠定基礎(chǔ)。方法:1、采用RAPD和ISSR分子標記技術(shù),分析準噶爾烏頭與川烏、草烏之間的DNA分子親緣關(guān)系;2、采用HPLC色譜分析方法,結(jié)合相似度分析、聚類分析、主成分分析研究準噶爾烏頭與川烏、草烏之間的化學親緣關(guān)系;3、(1)采用烏頭類藥材常用的3種炮制方法加工準噶爾烏頭,通過HPLC法比較準噶爾烏頭炮制前后生物堿化學成分的變化;(2)采用急性毒性、動物體內(nèi)鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等實驗比較準噶爾烏頭炮制前后藥理作用的變化情況;(3)采用秩相關(guān)統(tǒng)計方法分析炮制前后化學成分與藥理作用的相關(guān)性,結(jié)合準噶爾烏頭炮制品毒效活性,確定準噶爾烏頭炮制減毒方法;4、(1)采用溶劑提取分離方法,分離并鑒定準噶爾烏頭生物堿單體成分;(2)采用細胞體外培養(yǎng)技術(shù)考察準噶爾烏頭生物堿單體對大鼠心肌細胞毒性。結(jié)果:1、從120條隨機引物中篩選出15條RAPD引物,從100條隨機引物中篩選出15條ISSR引物分別用于15個樣本分析,在RAPD和ISSR分析下,不同種烏頭間的平均遺傳分化系數(shù)(GST)分別為0.4358和0.5005,不同種烏頭群體之間的遺傳分化差異較大,這表明基因流動較少(Nm),基因流的估計值(Nm=0.6473和0.4991)也顯示顯著的分化;通過聚類分析,將15個烏頭樣本聚為3類,第1類:草烏和準噶爾烏頭;第2類:川烏;第3類:白喉烏頭,結(jié)果表明準噶爾烏頭和草烏有較近的DNA分子親緣關(guān)系;2、建立了準噶爾烏頭生物堿成分HPLC指紋圖譜,提取準噶爾烏頭5個特征峰,分別是1苯甲酰烏頭原堿,2苯甲酰次烏頭原堿,3未命名化合物-2,4烏頭堿,5未命名化合物-4;相似度分析、聚類分析、主成分分析結(jié)果表明準噶爾烏頭與草烏有較近的化學親緣關(guān)系;3、(1)準噶爾烏頭炮制后雙酯型烏頭堿(烏頭堿)含量降低,單酯型烏頭堿(苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿)含量增加,表明準噶爾烏頭炮制減毒機制是其生品所含的雙酯型烏頭堿大多水解為毒性較低的單酯型烏頭堿;(2)急性毒性實驗結(jié)果初步表明準噶爾烏頭炮制后急性毒性降低,炮制品具有鎮(zhèn)痛、抗炎藥理作用,可雙向調(diào)節(jié)免疫功能,具有治療風濕類疾病的藥用價值;(3)秩相關(guān)分析結(jié)果表明,準噶爾烏頭生品和炮制品中生物堿含量與抗炎藥效指標相關(guān)度較高,呈一定劑量依賴關(guān)系,加熱水煮法炮制品在急性毒性、藥理活性方面均優(yōu)于其他2種炮制品,加熱水煮法炮制品的起效劑量為3.82g/人/日,與《中國藥典》收載的制草烏人用臨床劑量相似;加熱水煮法炮制品雙酯型烏頭堿與單酯型烏頭堿的含量符合《中國藥典》收載的制草烏含量限度規(guī)定,優(yōu)選“加熱水煮法”作為準噶爾烏頭炮制減毒方法;4、(1)提取分離并鑒定出5個單體化合物,分別為烏頭堿(1)、準噶爾烏頭堿(2)、12-表-歐烏堿(3)、16,17-二氫-12β,16β-環(huán)氧歐烏頭堿(4)、脫氧烏頭堿(5),其中烏頭堿和脫氧烏頭堿為C19烏頭堿型二萜生物堿,為準噶爾烏頭的主要鎮(zhèn)痛、抗炎活性成分,但同時也是其主要毒性成分;準噶爾烏頭堿、12-表-歐烏堿、16,17-二氫-12β,16β-環(huán)氧歐烏頭堿均為C20二萜生物堿napeline型;(2)12-表-歐烏堿和準噶爾烏頭堿均有一定的心肌細胞毒性,其IC50分別為766.11μg/mL和726.80μg/mL,均低于烏頭堿(IC50為562.06μg/mL)。結(jié)論:1、首次研究了準噶爾烏頭與已有法定藥材標準烏頭類藥材的親緣關(guān)系,表明準噶爾烏頭與草烏具有較近的DNA分子和化學親緣關(guān)系,為準噶爾烏頭成為替代草烏的新藥用資源提供了科學依據(jù);2、準噶爾烏頭具有烏頭類藥材的鎮(zhèn)痛、抗炎藥理活性,并可通過加熱水煮炮制方法降低毒性,在治療新疆常見多發(fā)的風濕類疾病方面有獨特優(yōu)勢,具有較好的藥用價值;3、分離并鑒定出準噶爾烏頭5個生物堿單體成分,為建立其法定藥材標準奠定了基礎(chǔ);4、準噶爾烏頭炮制品的亞急性毒性、長期毒性,以及其生物堿單體在炮制水解過程中的變化途徑、水解產(chǎn)物的毒效活性仍有待進一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：準噶爾烏頭 親緣關(guān)系 藥理活性 炮制減毒 化學成分
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R284;R283
【目錄】：

• 導(dǎo)師評閱表逡逑3-6
• 中英文縮略詞對照表6-11
• 摘要11-13
• ABSTRACT13-16
• 前言16-21
• 第一部分：基于RAPD及ISSR分子標記技術(shù)的準噶爾烏頭親緣關(guān)系研究21-33
• 1 研究內(nèi)容與方法21-25
• 1.1 研究對象21-22
• 1.1.1 樣本來源21
• 1.1.2 儀器與試劑21-22
• 1.2 內(nèi)容與方法22-23
• 1.2.1 DNA提取22-23
• 1.2.2 基因組DNA質(zhì)檢23
• 1.2.3 RAPD分析23
• 1.2.4 ISSR分析23
• 1.2.5 數(shù)據(jù)分析23
• 1.3 質(zhì)量控制23
• 1.4 統(tǒng)計方法23-24
• 1.5 技術(shù)路線圖24-25
• 2 結(jié)果25-30
• 3 討論30-32
• 4 小結(jié)32-33
• 第二部分：基于HPLC指紋圖譜的準噶爾烏頭親緣關(guān)系研究33-55
• 1 研究內(nèi)容與方法33-38
• 1.1 研究對象33-34
• 1.1.1 樣本來源33-34
• 1.1.2 儀器與試劑34
• 1.2. 內(nèi)容與方法34-37
• 1.2.1 正交試驗優(yōu)化HPLC指紋圖譜供試品前處理方法34-36
• 1.2.2 確定HPLC色譜條件36
• 1.2.3 建立HPLC指紋圖譜36
• 1.2.4 基于HPLC指紋圖譜的親緣性研究36-37
• 1.3. 技術(shù)路線圖37-38
• 2 結(jié)果38-53
• 3 討論53-54
• 4 小結(jié)54-55
• 第三部分：準噶爾烏頭炮制及毒效活性研究55-94
• 1 研究內(nèi)容與方法56-66
• 1.1. 研究對象56-58
• 1.1.1 樣本來源56-57
• 1.1.2 儀器與試劑57-58
• 1.2. 內(nèi)容與方法58-65
• 1.2.1 炮制品的制備58-59
• 1.2.2 提取液的制備59
• 1.2.3 生物堿的含量測定59-60
• 1.2.4 急性毒性實驗60
• 1.2.5 鎮(zhèn)痛作用實驗60-61
• 1.2.6 抗炎作用實驗61-63
• 1.2.7 對免疫調(diào)節(jié)功能的影響63-64
• 1.2.8 確定炮制方法64-65
• 1.3. 統(tǒng)計方法65
• 1.4. 技術(shù)路線圖65-66
• 2 結(jié)果66-90
• 3 討論90-93
• 4 小結(jié)93-94
• 第四部分：準噶爾烏頭中生物堿提取分離及心肌細胞毒性研究94-121
• 1 研究內(nèi)容與方法94-100
• 1.1 研究對象94-95
• 1.1.1 樣本來源94-95
• 1.1.2 儀器與試劑95
• 1.2. 內(nèi)容與方法95-99
• 1.2.1 生物堿單體提取與分離95-97
• 1.2.2 對大鼠心肌細胞毒性的研究97-99
• 1.3. 統(tǒng)計方法99-100
• 1.4. 技術(shù)路線圖100
• 2 結(jié)果100-116
• 3 討論116-120
• 4 小結(jié)120-121
• 結(jié)論121-122
• 致謝122-123
• 參考文獻123-133
• 附錄133-144
• 綜述144-168
• 參考文獻159-168
• 攻讀博士學位期間獲得的學術(shù)成果168-169
• 個人簡歷169-171

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 鄭宇;趙建偉;何玉仙;黃建;;福建省煙粉虱自然種群遺傳多樣性的RAPD和ISSR分析[J];福建農(nóng)業(yè)學報;2012年05期

2 符華林;我國烏頭屬藥用植物的研究概況[J];中藥材;2004年02期

3 丁祥;侯怡鈴;;德欽烏頭中的二萜生物堿[J];中草藥;2013年15期

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本文編號：1096318