隨著工業(yè)化、城鎮(zhèn)化和人口老齡化進(jìn)程的加快,以及環(huán)境污染與不良生活方式等的不斷累積,腫瘤發(fā)生和發(fā)展的形勢(shì)日顯嚴(yán)峻,防治惡性腫瘤在我國(guó)也越來(lái)越不容忽視。惡性腫瘤的生長(zhǎng)離不開血管的生成,而血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF₁₆₅)是腫瘤血管生成的主要調(diào)節(jié)因子,常在血管期異�？焖偾忠u性發(fā)展的腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá),影響淋巴管新生和腫瘤的轉(zhuǎn)移,故對(duì)VEGF₁₆₅的檢測(cè)顯得格外重要。雖然目前已有多種VEGF₁₆₅檢測(cè)方法,但如何更簡(jiǎn)便快速、高效靈敏和低成本地進(jìn)行檢測(cè)仍然是研究者不斷探究的方向�；诖�,本文提出了一種基于新型線點(diǎn)線電極（line-pad-line electrode,LPLE）和DNA適體識(shí)別的阻抗傳感器。其主要是利用新型LPLE電極的幾何特性,VEGF₁₆₅蛋白與DNA適體特異性作用后,致使LPLE電極界面性質(zhì)發(fā)生變化,引起阻抗變化,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)VEGF₁₆₅的檢測(cè)。本文構(gòu)建了一種新型的VEGF_1... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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基于發(fā)光法的VEGF165檢測(cè)原理圖

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文12存在情況下，適體從電極表面釋放出來(lái)并形成適體-VEGF165復(fù)合物，DNA雙鏈在T7核酸外切酶作用下裂解，通過(guò)形成G-四鏈體/血紅素DNA酶有效地淬滅了ECL信號(hào)，可根據(jù)其發(fā)光程度降低程度檢測(cè)VEGF165濃度。但發(fā)光體系由于發(fā)光試劑形成的復(fù)雜結(jié)構(gòu)存在電子傳遞和能量損失等問(wèn)題，大大增加了傳感操作的實(shí)驗(yàn)難度和測(cè)定誤差，使得發(fā)光傳感策略在VEGF165蛋白檢測(cè)方面的應(yīng)用也有一定程度的限制。2.1.2熒光生物傳感器由于熒光檢測(cè)技術(shù)的高靈敏度、良好重復(fù)性以及快檢測(cè)速度的特點(diǎn)[38]，成為VEGF165檢測(cè)應(yīng)用最常見的光學(xué)檢測(cè)技術(shù)之一。熒光傳感器的分析原理是通過(guò)把識(shí)別到的生物信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的熒光信號(hào)輸出[39]，并基于檢測(cè)的熒光信號(hào)強(qiáng)度變化來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)VEGF165蛋白的定性或定量的分析。它是利用其自身熒光或者是與熒光物質(zhì)作用后的一種測(cè)量方法，主要分為兩類。一類是反應(yīng)呈熒光淬滅現(xiàn)象的熒光團(tuán)[40]，常見的有：熒光素、羅丹明和氟硼二吡咯等；另一類是反應(yīng)呈聚集誘導(dǎo)發(fā)光的發(fā)光材料[41]，例如量子點(diǎn)、金屬納米粒子（納米金）、石墨烯量子點(diǎn)和碳點(diǎn)等。圖1.2熒光生物傳感器的VEGF165檢測(cè)實(shí)驗(yàn)原理圖Fig.1.2Principlediagramoffluorescence-basedbiosensorforVEGF165detection如圖1.2是基于熒光的VEGF165檢測(cè)示意圖，沒(méi)有靶標(biāo)結(jié)合時(shí)，DNA組裝體無(wú)法進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增行為，加入VEGF165后，觸發(fā)DNA組裝結(jié)構(gòu)中適體結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)換

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文13和啟動(dòng)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)以產(chǎn)生單鏈DNA(3)，后單鏈DNA與熒光/猝滅劑標(biāo)記的探針進(jìn)行DNA鏈置換反應(yīng)，可以通過(guò)反應(yīng)后的熒光信號(hào)強(qiáng)度增加來(lái)提供VEGF165的分析信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)VEGF165的測(cè)量。但熒光標(biāo)記中熒光染料仍然具有易受外部環(huán)境影響的局限性，其熒光檢測(cè)的靈敏度也受到影響，因此，在熒光傳感應(yīng)用方面還有待改進(jìn)。2.1.3比色生物傳感器比色技術(shù)的檢測(cè)方法，一般是基于顯色物質(zhì)的顏色改變或者由化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致的狀態(tài)（顏色）變化的原理來(lái)間接地測(cè)量VEGF165濃度。在比色反應(yīng)過(guò)程中，用肉眼即可在目標(biāo)分析物存在下立即觀察到顏色變化，而無(wú)需任何測(cè)量設(shè)備[42]。該方法使用簡(jiǎn)單，靈敏度高，可以在純水相中有較好的檢測(cè)應(yīng)用。而雜交鏈反應(yīng)（hybridchainreaction,HCR）由于其操作簡(jiǎn)單，靈敏度高和等溫下擴(kuò)增效率好的特點(diǎn)[43,44]，在比色傳感應(yīng)用中受到廣大科研者的青睞。圖1.3比色法測(cè)量VEGF165的傳感原理圖Fig.1.3ThesensingprincipleofVEGF165detectionbycolorimetricmethodWu等[45]基于金納米顆粒（goldnanocomposite,GNPs）和靶誘導(dǎo)的適體酶活化制作了一個(gè)簡(jiǎn)單易操作的檢測(cè)VEGF165比色傳感器，如圖1.3示。在VEGF165蛋白存在的情況下，設(shè)計(jì)的DNA連接物被裂解為兩個(gè)無(wú)法交聯(lián)GNPs的片段，GNPs溶液一直呈現(xiàn)紅色。而在無(wú)VEGF165結(jié)合的情況下，GNPs溶液由紅色轉(zhuǎn)為藍(lán)色，

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碩士論文
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本文編號(hào)：3246539