本文關(guān)鍵詞：小鼠卵母細(xì)胞玻璃化冷凍對(duì)DNA甲基化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：為探討玻璃化冷凍保存對(duì)卵母細(xì)胞DNA甲基化的影響,本實(shí)驗(yàn)首先研究了小鼠M Ⅱ期卵母細(xì)胞玻璃化冷凍解凍后印記基因H19,Peg3和Snrpn差異甲基化區(qū)域DNA甲基化狀態(tài),同時(shí)研究了卵母細(xì)胞解凍后與DNA甲基化相關(guān)酶的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果表明,和新鮮卵細(xì)胞相比,小鼠成熟的卵母細(xì)胞玻璃化冷凍解凍后其基因組印記基因H19,Peg3和Snrpn差異甲基化區(qū)域DNA甲基化模式并沒(méi)有發(fā)生改變,與DNA甲基化相關(guān)的酶Dnmtl,Dnmt3a,Dnmt3b和Dnmt3l相對(duì)表達(dá)量均顯著下降(P0.05),與DNA去甲基化相關(guān)的酶Tet3相對(duì)表達(dá)量顯著下降(P0.05)。 其次,檢測(cè)了冷凍卵母細(xì)胞經(jīng)體外受精獲得的囊胚基因組中印記基因H19,Peg3和Snrpn差異甲基化區(qū)域的DNA甲基化模式,以及DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶和二種與DNA去甲基化相關(guān)的酶(Tetl,Tet2和Tet3)的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果顯示,H19DMR整體甲基化水平在冷凍組(30.95%)和新鮮組(32.15%)之間差異不顯著(P0.05),冷凍組Peg3DMR平均甲基化水平為30.19%顯著低于新鮮組(35.38%)(P0.05),冷凍組Snrpn DMR平均甲基化水平為]8.13%顯著低于新鮮組(35.48%)(P0.05)。兩組間Dnmtl,Dnmt3a,和IDnmt3l相對(duì)表達(dá)量差異不顯著(P0.05),冷凍組Dnmt3b相對(duì)表達(dá)量顯著低于新鮮組(P0.05)。冷凍組Tetl,Tet2和Tet3的相對(duì)表達(dá)量和新鮮組相比差異不顯著(P0,05)。 繼而探討了玻璃化冷凍卵母細(xì)胞產(chǎn)生的DNA甲基化模式的改變能否影響到后續(xù)植入胚胎原始生殖細(xì)胞中的DNA甲基化重編程,由冷凍卵母細(xì)胞經(jīng)體外受精得到的2-cell胚胎移植到受體鼠內(nèi),檢測(cè)了E13.5胚胎中原始生殖細(xì)胞基因組中印記基因H19,Peg3和Snrpn的差異甲基化區(qū)域的DNA甲基化模式,以及反轉(zhuǎn)座子的重復(fù)序列Linel-5'和IAP-LTR的DNA甲基化狀態(tài)。結(jié)果顯示,(])E13.5雌性胚胎原始生殖細(xì)胞中H19差異甲基化區(qū)域的DNA甲基化平均水平其冷凍組(3.34%)顯著低于新鮮組(16.44%)(P0.05),而在雄性胚胎原始生殖細(xì)胞中兩者無(wú)顯著性差異,均處于完全的未甲基化狀態(tài)；(2)在冷凍組中,雌性胚胎原始生殖細(xì)胞Peg3DMR仍有5.88%的DNA甲基化,和新鮮組(0%)相比差異顯著(P0.05),而冷凍組雄性胚胎原始生殖細(xì)胞Peg3DMR DNA甲基化水平為41.97%顯著高于新鮮組(0%)(P0.05)；(3)Snrpn差異甲基化區(qū)域的DNA甲基化狀態(tài)在E13.5時(shí),雌性和雄性胚胎原始生殖細(xì)胞中均處于未甲基化狀態(tài)；(4)冷凍組E13.5雌性胚胎原始生殖細(xì)胞中Linel-5'位點(diǎn)的DNA甲基化平均值為38.02%,和新鮮組(36.51%)之間無(wú)顯著性著異。而雄性胚胎原始生殖細(xì)胞中,其冷凍組的DNA甲基化水平(14.03%)顯并高于新鮮組(6.25%)(P0.05)；(5)冷凍組雌性胚胎原始生殖細(xì)胞IAP-LTR位點(diǎn)的DNA甲基化水平(36.37%)顯著低于新鮮組雌性(48.18%),而在冷凍組雄性胚胎原始生殖細(xì)胞中,此位點(diǎn)的DNA甲基化水平(93.93%)顯著高于新鮮組(57.14%)(P0.05)。 綜上所述,小鼠MⅡ期卵母細(xì)胞經(jīng)玻璃化冷凍后不會(huì)影響其印記基因差異甲基化區(qū)域DNA甲基化,但冷凍后卵母細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致DNMTs和TETs mRNA相對(duì)含量下降；由冷凍卵母細(xì)胞得到的囊胚其印記基因DNA甲基化水平顯著降低,且影響Dnmt3b的表達(dá)量。由冷凍卵母細(xì)胞得到的胚胎原始生殖細(xì)胞Peg3DMR甲基化模式異常,并導(dǎo)致反轉(zhuǎn)座子的重復(fù)序列DNA模式異常。
【關(guān)鍵詞】：小鼠卵母細(xì)胞 玻璃化冷凍 DNA甲基 印記基因 反轉(zhuǎn)座子
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S814
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 插圖與附表清單11-13
• ~.略語(yǔ)表13-14
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述14-34
• 綜述一 哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞冷凍保存技術(shù)研究進(jìn)展14-23
• 1.1 冷凍的基本原則14
• 1.2 冷凍保存細(xì)胞的首次應(yīng)用14-15
• 1.3 慢速冷凍和玻璃化冷凍的發(fā)展15-16
• 1.4 卵母細(xì)胞冷凍保存16-18
• 1.5 卵母細(xì)胞冷凍保存損傷的研究18-21
• 1.6 卵母細(xì)胞冷凍研究展望21-23
• 綜述二 哺乳動(dòng)物的DNA甲基化23-34
• 2.1 與DNA甲基化和去甲基化相關(guān)的酶24-28
• 2.2 基因印記中的DNA甲基化28-32
• 2.3 轉(zhuǎn)座因子的DNA甲基化32-33
• 2.4 展望33-34
• 第二部分 研究論文34-66
• 實(shí)驗(yàn)一 玻璃化冷凍卵母細(xì)胞對(duì)印記基因DNA甲基化的影響34-47
• 摘要34
• 3.1 引言34-35
• 3.2 材料和方法35-43
• 3.3. 結(jié)果43-45
• 3.4 討論45-47
• 實(shí)驗(yàn)二 玻璃化冷凍卵母細(xì)胞對(duì)其形成的囊胚印記基因DNA甲基化的影響47-55
• 摘要47
• 4.1 前言47-48
• 4.2 材料和方法48-50
• 4.3 結(jié)果50-53
• 4.4 討論53-55
• 實(shí)驗(yàn)三 玻璃化冷凍卵母細(xì)胞對(duì)E13.5原始生殖細(xì)胞DNA甲基化的影響55-66
• 摘要55
• 5.1 前言55-56
• 5.2 材料和方法56-60
• 5.3 結(jié)果60-64
• 5.4 討論64-66
• 結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-80
• 致謝80-81
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷81

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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6 高靜;自制冷凍葉玻璃化冷凍小鼠自然周期及超排卵周期卵母細(xì)胞的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2009年

7 王義鵬;牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

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9 岳麗芳;輔助生殖技術(shù)子代印記基因PEG10、L3MBTL1的表達(dá)和甲基化狀態(tài)研究[D];鄭州大學(xué);2013年

10 朱芳;二惡英對(duì)小鼠在位子宮內(nèi)膜孕酮受體亞型，，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-1表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

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