豬流感病毒(SIV)是一種正黏病毒科,流感病毒屬,有囊膜、分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒,是引起流感的主要病原之一。影響流感病毒感染的主要因素包括病毒、宿主和傳播途徑。越來(lái)越多的調(diào)查發(fā)現(xiàn),不同地區(qū)或者同一地區(qū)不同豬場(chǎng)/豬群對(duì)同一SIV的易感性和感染程度存在很大差異,使人們認(rèn)識(shí)到外界環(huán)境和宿主營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)抵抗SIV感染的重要性。黃曲霉毒素B1(AFB1)是目前最常見(jiàn)的一種霉菌毒素,廣泛存在于發(fā)霉的玉米、小麥和花生等農(nóng)作物中,具有影響宿主免疫和降低生長(zhǎng)性能等作用。所以,在本研究中我們提出AFB1可能促進(jìn)SIV復(fù)制,并深入探討其作用機(jī)理�？紤]到豬在SIV傳播中的重要地位以及AFB1的廣泛暴露,找到一種能夠防止豬群免受AFB1暴露和SIV侵害的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)變得尤為重要。α-甘露寡糖又稱為甘露低聚糖,是從酵母培養(yǎng)細(xì)胞壁中提取的一類新型抗原活性物質(zhì),可通過(guò)物理吸附或直接結(jié)合霉菌毒素,消除毒素對(duì)機(jī)體的有害影響,同時(shí)具有增強(qiáng)免疫、促生長(zhǎng)及抗病毒等生物學(xué)功能。所以,本研究通過(guò)體內(nèi)、體外添加α-MOS來(lái)研究其對(duì)AFB1促進(jìn)SIV復(fù)制的干預(yù)作用及其作用機(jī)理。一、AFB1對(duì)SIV復(fù)制的影響研究本試驗(yàn)中,我們首先檢測(cè)不同...

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【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)與縮略語(yǔ)
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 黃曲霉毒素B₁的研究進(jìn)展
        1. 霉菌毒素概述
        2. 黃曲霉毒素B₁(AFB₁)概述
            2.1 AFB₁的來(lái)源
            2.2 AFB₁的分布
            2.3 AFB₁的作用機(jī)制
            2.4 AFB₁在動(dòng)物體內(nèi)的代謝和影響因素
        3. AFB₁的危害
            3.1 AFB₁對(duì)機(jī)體的危害
            3.2 AFB₁對(duì)經(jīng)濟(jì)的危害
        4. AFB₁的防治
            4.1 AFB₁的人為管控
            4.2 AFB₁的化學(xué)防治
            4.3 AFB₁的生物防治
            4.4 AFB₁的其他防治方法
        參考文獻(xiàn)
    第二章 豬流感病毒的研究進(jìn)展
        1. 流感病毒概述
        2. 豬流感病毒(SIV)概述
            2.1 SIV的易感動(dòng)物
            2.2 SIV感染的癥狀
            2.3 影響SIV感染的因素
        3. SIV感染的防治策略
            3.1 SIV感染的預(yù)防策略
            3.2 SIV感染的治療策略
        參考文獻(xiàn)
    第三章 甘露寡糖的研究進(jìn)展
        1. 甘露寡糖概述
        2. 酵母來(lái)源甘露寡糖(A-MOS)概述
            2.1 α-MOS的來(lái)源和制備
            2.2 α-MOS的應(yīng)用
            2.3 α-MOS的作用機(jī)制
        3. A-MOS對(duì)機(jī)體的影響
            3.1 α-MOS對(duì)仔豬生產(chǎn)性能的影響
            3.2 α-MOS對(duì)腸道形態(tài)和微生物的影響
            3.3 α-MOS對(duì)免疫功能的影響
            3.4 α-MOS對(duì)霉菌毒素毒性的影響
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第四章 黃曲霉毒素B₁對(duì)豬流感病毒復(fù)制的影響研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗(yàn)儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            1.6 病毒培養(yǎng)和擴(kuò)增
            1.7 細(xì)胞活力測(cè)定
            1.8 細(xì)胞乳酸脫氫酶檢測(cè)
            1.9 細(xì)胞凋亡測(cè)定
            1.10 病毒滴度檢測(cè)
            1.11 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.12 HE染色試驗(yàn)
            1.13 熒光定量PCR檢測(cè)
            1.14 免疫印跡試驗(yàn)
            1.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 不同濃度AFB₁對(duì)MDCK、A549和PAMs活性的影響
            2.2 AFB₁促進(jìn)SIV在MDCK、A549和PAMs上復(fù)制
            2.3 AFB₁加劇SIV在小鼠肺臟中感染
            2.4 AFB₁加劇SIV感染所致肺組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的TLRS通路研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗(yàn)儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            1.6 病毒培養(yǎng)和擴(kuò)增
            1.7 熒光定量PCR檢測(cè)
            1.8 免疫印跡試驗(yàn)
            1.9 小RNA干擾
            1.10 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.11 HE染色試驗(yàn)
            1.12 免疫組化染色
            1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 AFB₁上調(diào)SIV感染的PAMs上的TLR4-NFκB-TNFα表達(dá)
            2.2 TLR4干擾和NFκB抑制劑阻礙AFB₁促進(jìn)SIV在PAMs上復(fù)制
            2.3 AFB₁上調(diào)SIV感染小鼠脾臟中的TLR4-NFκB-TNFα表達(dá)
            2.4 TLR4敲除和抑制劑削弱AFB₁促進(jìn)的SIV感染及其所致炎癥和肺組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第六章 黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的巨噬細(xì)胞極化機(jī)制研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗(yàn)儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
            1.6 病毒培養(yǎng)和擴(kuò)增
            1.7 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.8 小鼠肺支氣管灌洗
            1.9 HE染色試驗(yàn)
            1.10 熒光定量PCR檢測(cè)
            1.11 免疫印跡試驗(yàn)
            1.12 MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖活性
            1.13 流式測(cè)定細(xì)胞凋亡情況
            1.14 病毒滴度檢測(cè)
            1.15 免疫熒光
            1.16 試劑盒檢測(cè)NO、TNF-α和IL-10
            1.17 掃描電鏡觀察細(xì)胞極化
            1.18 流式細(xì)胞術(shù)鑒定巨噬細(xì)胞極化
            1.19 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 低劑量AFB₁加劇SIV感染所致肺組織損傷
            2.2 低劑量AFB₁促進(jìn)SIV在小鼠肺臟中復(fù)制
            2.3 低劑量AFB₁加劇SIV感染所致炎癥和脾組織損傷
            2.4 低劑量AFB₁促進(jìn)SIV感染的小鼠肺泡巨噬細(xì)胞向M2極化
            2.5 不同濃度AFB₁和LPS對(duì)PAMs活性的影響
            2.6 低濃度AFB₁促進(jìn)SIV在PAMs上復(fù)制
            2.7 低濃度AFB₁促進(jìn)SIV感染的PAMs向M2型極化
            2.8 LPS刺激逆轉(zhuǎn)M2極化從而降低AFB₁促進(jìn)的SIV復(fù)制
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第七章 甘露寡糖對(duì)黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的干預(yù)作用研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗(yàn)儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞和病毒培養(yǎng)
            1.6 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.7 HE染色試驗(yàn)
            1.8 MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖活性
            1.9 中性紅法測(cè)定細(xì)胞吞噬作用
            1.10 DAPI染色測(cè)定細(xì)胞活性
            1.11 病毒滴度檢測(cè)
            1.12 免疫熒光試驗(yàn)
            1.13 熒光定量PCR檢測(cè)
            1.14 免疫印跡試驗(yàn)
            1.15 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 不同濃度α-MOS對(duì)PAMs活性的影響
            2.2 α-MOS阻礙AFB₁促進(jìn)SIV在PAMs上復(fù)制
            2.3 α-MOS削弱AFB₁促進(jìn)SIV在小鼠肺臟中復(fù)制
            2.4 α-MOS緩解AFB₁促進(jìn)SIV復(fù)制所致小鼠肺和脾組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
    第八章 甘露寡糖干預(yù)黃曲霉毒素B₁促進(jìn)豬流感病毒復(fù)制的機(jī)理研究
        1. 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 主要試劑
            1.3 試驗(yàn)儀器
            1.4 工作溶液的配置
            1.5 細(xì)胞和病毒培養(yǎng)
            1.6 動(dòng)物試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.7 病毒滴度檢測(cè)
            1.8 免疫熒光試驗(yàn)
            1.9 免疫組化染色
            1.10 熒光定量PCR檢測(cè)
            1.11 免疫印跡試驗(yàn)
            1.12 試劑盒檢測(cè)TNF-α
            1.13 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        2. 結(jié)果
            2.1 α-MOS阻礙AFB₁上調(diào)TLR4-NFκB通路在SIV感染的PAMs上表達(dá)
            2.2 TLR4過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)α-MOS對(duì)AFB₁促進(jìn)的SIV感染及其炎性反應(yīng)的抑制性作用
            2.3 TNF-α體外添加對(duì)AFB₁促進(jìn)的SIV復(fù)制無(wú)顯著影響
            2.4 α-MOS降低AFB₁上調(diào)TLR4-NFκB通路在SIV感染的小鼠脾臟和肺臟中表達(dá)
            2.5 α-MOS以TLR4依賴性方式減輕AFB₁促進(jìn)的SIV感染和組織損傷
        3. 討論
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
本文創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間科研成果



本文編號(hào)：3930970