蛋白質(zhì)組學和后基因組學技術(shù)在繁殖生物學和生殖學研究中的應用日益增多。精子發(fā)生和成熟對雄性生殖至關(guān)重要。野生型p53誘導的磷酸酶1(WIP1)缺失的小鼠在繁殖器官表現(xiàn)出缺陷。本研究旨在了解WIP1缺失影響精子發(fā)生或成熟的潛在分子機制。組織表達譜顯示W(wǎng)IP1在雄性野生型小鼠的生殖器官睪丸和附睪組織中高表達。我們采用Wip1-/-小鼠為研究模型,該小鼠表現(xiàn)出附睪組織萎縮和明顯的精子減少。我們對附睪(包含體組織及其中的精子)進行了無凝膠iTRAQ LC-MS/MS定量蛋白質(zhì)組學分析。結(jié)果鑒定了總共8763種蛋白質(zhì),其中在Wip1缺失的小鼠和野生型小鼠之間鑒定出了 91種顯著差異表達蛋白質(zhì)(DEPs)。通過Western Blotting四種與生殖相關(guān)的差異表達蛋白(PRM2,ODF1,PIWIL1和KLHL10)得到了驗證。生物學過程分析表明,Smac/Diablo介導的細胞凋亡途徑和SERPINA3介導的炎癥過程可能是導致附睪萎縮和精子數(shù)量明顯減少的潛在分子途徑。與生殖相關(guān)的差異表達蛋白的網(wǎng)絡分析揭示了可能的影響精子成熟的與WIP1互作的途徑,例如WIP1缺失可能通過p53降低ODF1和PR...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表(Abbreviations)
第一章 前言
    1.1 雄性不育與精子發(fā)生和精子成熟
    1.2 WIP1及其在雄性生殖中的作用
    1.3 蛋白質(zhì)組學在附睪研究中的應用
    1.4 研究目的和意義
第二章 材料和方法
    2.1 附睪樣本
    2.2 蛋白質(zhì)樣品制備和定量蛋白質(zhì)組學分析
    2.3 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索和蛋白質(zhì)定量
    2.4 Western Blotting、蘇木-精伊紅染色、免疫熒光染色及免疫組織化學染色
第三章 結(jié)果
    3.1 WIP1在附睪中的表達及其缺失對附睪的影響
    3.2 Wip1^-/-小鼠附睪和野生型小鼠附睪的差異表達蛋白
    3.3 差異表達蛋白的驗證
    3.4 差異表達蛋白的富集分析及與生殖的相關(guān)性分析
    3.5 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡分析
    3.6 在睪丸中驗證與精子發(fā)生相關(guān)的DEPs: PRM2和PIWIL1
第四章 討論
第五章 結(jié)論
致謝
參考文獻
附表
作者簡介



本文編號：3912552