由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani Kühn AG-1 IA)引起的水稻紋枯病是世界上非常重要的水稻真菌病害之一,對(duì)水稻生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。立枯絲核菌主要以菌絲或菌核的形態(tài)存在于土壤中,菌核中黑色素的含量會(huì)影響其抗逆性,并且黑化的真菌能夠表現(xiàn)出對(duì)寄主較強(qiáng)的毒力和抵抗多種不良環(huán)境。為了闡明水稻紋枯病菌黑色素形成的分子機(jī)制及其在致病過程中的作用,本論文圍繞水稻紋枯病菌黑色素開展了一系列的研究與分析�，F(xiàn)將主要研究結(jié)果報(bào)道如下:1.評(píng)估了4組化學(xué)物質(zhì),即化學(xué)肥料組(500μg/mL K₂SO₄、NaH₂PO₄、CO(NH₂)₂溶液)、金屬離子組(5μg/mL CuSO₄、FeSO₄、ZnSO₄溶液)、抗氧化劑組(5μg/mL槲皮素、桑色素、維生素C溶液)和對(duì)照組(300μg/mL莨菪堿、50μg/mL兒茶酚)對(duì)水稻紋枯病菌生長速率、菌核數(shù)量、菌核分布情況、菌核鮮重和干重以及黑色...

【文章頁數(shù)】：174 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞及英漢對(duì)照表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 水稻紋枯病的研究進(jìn)展
        1.1.1 水稻紋枯病的分布與危害
        1.1.2 水稻紋枯病的癥狀
        1.1.3 水稻紋枯病的傳播途徑
        1.1.4 水稻紋枯病菌的分類地位及其研究進(jìn)展
        1.1.5 水稻紋枯病的防治
    1.2 黑色素的研究進(jìn)展
        1.2.1 黑色素的類型及其合成途徑
        1.2.2 黑色素的形成過程
        1.2.3 植物病原菌黑色素的研究進(jìn)展
        1.2.4 黑色素的開發(fā)利用
    1.3 真核酵母細(xì)胞遺傳轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展
    1.4 高通量轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的研究進(jìn)展
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄組及轉(zhuǎn)錄組學(xué)
        1.4.2 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的進(jìn)展
        1.4.3 轉(zhuǎn)錄組測序在真菌上的應(yīng)用
    1.5 熒光定量qRT-PCR的研究進(jìn)展
        1.5.1 熒光定量qRT-PCR的原理
        1.5.2 熒光定量qRT-PCR的應(yīng)用
    1.6 本研究的目的和意義
    1.7 本研究技術(shù)路線
第2章 化學(xué)物質(zhì)對(duì)水稻紋枯病菌黑色素形成的影響及黑色素的鑒定
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 供試菌株的培養(yǎng)和培養(yǎng)基配制
        2.2.3 化學(xué)物質(zhì)對(duì)水稻紋枯病菌菌絲生長速率的影響
        2.2.4 化學(xué)物質(zhì)對(duì)水稻紋枯病菌菌核形成的影響
        2.2.5 水稻紋枯病菌黑色素的提取和純化
        2.2.6 紫外可見光譜分析
        2.2.7 傅里葉紅外光光譜分析
        2.2.8 液相色譜-質(zhì)譜分析
        2.2.9 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 化學(xué)物質(zhì)對(duì)水稻紋枯病菌菌絲生長的影響
        2.3.2 化學(xué)物質(zhì)對(duì)菌核形態(tài)分布及菌核數(shù)量的影響
        2.3.3 化學(xué)物質(zhì)對(duì)水稻紋枯病菌菌核重量的影響
        2.3.4 紫外-可見光譜分析
        2.3.5 化學(xué)物質(zhì)對(duì)水稻紋枯病菌黑色素含量的影響
        2.3.6 傅里葉紅外光譜測定
        2.3.7 液相色譜-質(zhì)譜分析
    2.4 結(jié)論與討論
第3章 水稻紋枯病菌菌絲體和發(fā)酵液氨基酸含量與差異分析
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 供試菌株和培養(yǎng)基
        3.2.2 主要儀器和試劑
        3.2.3 水稻紋枯病菌培養(yǎng)
        3.2.4 水稻紋枯病菌菌絲體和發(fā)酵液樣品的收集
        3.2.5 樣品的前處理
        3.2.6 氨基酸的定性和定量分析
        3.2.7 檢測條件
        3.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 水稻紋枯病菌菌絲體重量的分析
        3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及標(biāo)準(zhǔn)氨基酸含量
        3.3.3 菌絲體氨基酸含量與組成差異分析
        3.3.4 發(fā)酵液氨基酸含量與組成差異分析
    3.4 結(jié)論與討論
第4章 兒茶酚對(duì)水稻紋枯病菌生長、抗氧化酶活性和黑色素合成基因表達(dá)的影響.
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 供試菌株和培養(yǎng)基配制
        4.2.2 水稻紋枯病菌生長速率測定
        4.2.3 供試菌株的培養(yǎng)和菌絲體的收集
        4.2.4 酶液提取
        4.2.5 酶液蛋白質(zhì)濃度的測定
        4.2.6 兒茶酚對(duì)水稻紋枯病菌抗氧化酶酶活測定
        4.2.7 RNA的提取
        4.2.8 黑色素相關(guān)基因RNA水平表達(dá)模式
        4.2.9 致病力的測定
    4.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 兒茶酚誘導(dǎo)水稻紋枯病菌黑化
        4.4.2 兒茶酚對(duì)水稻紋枯病菌抗氧化酶的影響
        4.4.3 黑色素相關(guān)基因RNA水平表達(dá)模式分析
        4.4.4 致病力的測定
    4.5 結(jié)論與討論
第5章 水稻紋枯病菌RsPhm基因的克隆及其表達(dá)分析
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 供試菌株和培養(yǎng)基配制
        5.2.2 主要試劑
        5.2.3 菌絲體的培養(yǎng)與收集
        5.2.4 DNA和RNA的提取
        5.2.5 RsPhm基因DNA和cDNA克隆
        5.2.6 RsPhm基因的生物信息學(xué)分析
        5.2.7 RsPhm基因定量表達(dá)分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 RsPhm基因核苷酸和氨基酸序列分析
        5.3.2 RsPhm蛋白氨基酸序列系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
        5.3.3 兒茶酚誘導(dǎo)下RsPhm基因相對(duì)定量表達(dá)分析
    5.4 結(jié)論與討論
第6章 水稻紋枯病菌RsCat基因的克隆及其表達(dá)分析
    6.1 前言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 供試菌株和培養(yǎng)基配制
        6.2.2 主要試劑
        6.2.3 供試菌株的培養(yǎng)和菌絲體的收集
        6.2.4 DNA和RNA的提取
        6.2.5 RsCat基因DNA和cDNA克隆
        6.2.6 RsCat基因的生物信息學(xué)分析
        6.2.7 RsCat基因定量表達(dá)分析
        6.2.8 CAT酶活測定
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 RsCat基因的克隆
        6.3.2 RsCat蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
        6.3.3 兒茶酚脅迫下RsCat基因相對(duì)定量表達(dá)分析
        6.3.4 兒茶酚脅迫下水稻紋枯病菌CAT酶活性變化
    6.4 結(jié)論與討論
第7章 水稻紋枯病菌黑色素形成的轉(zhuǎn)錄組分析
    7.1 引言
    7.2 材料與方法
        7.2.1 供試菌株和培養(yǎng)基配制
        7.2.2 樣品的收集
        7.2.3 主要試劑
        7.2.4 RNA的提取和質(zhì)量檢測
        7.2.5 分析流程
        7.2.6 基因組注釋整理及表達(dá)量分析
        7.2.7 表達(dá)差異基因分析
        7.2.8 表達(dá)差異GO富集分析和KO分析
        7.2.9 差異表達(dá)基因聚類分析
        7.2.10 熒光定量qRT-PCR驗(yàn)證
        7.2.11 水稻紋枯病菌生長速率測定
        7.2.12 活性氧(ROS)測定
        7.2.13 致病力的測定
        7.2.14 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    7.3 結(jié)果與分析
        7.3.1 總RNA的質(zhì)量檢測
        7.3.2 原始數(shù)據(jù)整理、過濾及質(zhì)量評(píng)估
        7.3.3 比對(duì)到基因組
        7.3.4 同源基因群eggNOG聚類分析
        7.3.5 GO功能富集分析
        7.3.6 KEGGpathway功能富集性分析
        7.3.7 差異表達(dá)基因聚類分析
        7.3.8 可變剪接(AS)分析
        7.3.9 熒光定量qRT-PCR驗(yàn)證
        7.3.10 生長速率的測定
        7.3.11 活性氧(ROS)測定
        7.3.12 致病力測定
    7.4 結(jié)論與討論
第8章 水稻紋枯病菌黑色素合成途徑關(guān)鍵酶基因的克隆與功能分析
    8.1 前言
    8.2 材料與方法
        8.2.1 供試菌株和培養(yǎng)基配制
        8.2.2 主要試劑
        8.2.3 供試菌株的培養(yǎng)和菌絲體的收集
        8.2.4 菌絲體DNA和RNA的提取
        8.2.5 黑色素合成途徑關(guān)鍵酶基因DNA和cDNA克隆
        8.2.6 黑色素合成途徑關(guān)鍵酶基因的生物信息學(xué)分析
        8.2.7 黑色素合成途徑關(guān)鍵酶基因定量表達(dá)分析
    8.3 結(jié)果與分析
        8.3.1 黑色素合成途徑關(guān)鍵酶基因的克隆
        8.3.2 兒茶酚脅迫下黑色素合成途徑關(guān)鍵酶基因相對(duì)定量表達(dá)分析
    8.4 結(jié)論與討論
第9章 水稻紋枯病菌RsCao和RsPhs對(duì)畢赤酵母色素形成的影響
    9.1 引言
    9.2 材料與方法
        9.2.1 供試菌株和培養(yǎng)基配制
        9.2.2 貯存液的配制
        9.2.3 主要試劑
        9.2.4 供試菌株的培養(yǎng)和菌絲體的收集
        9.2.5 RsCao和RsPhs基因的cDNA克隆
        9.2.6 RsCao和RsPhs基因的真核表達(dá)
        9.2.7 RsCao和RsPhs蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        9.2.8 黑色素形成測定
        9.2.9 細(xì)胞膜損傷的測定
        9.2.10 RsCao和RsPhs基因定量表達(dá)分析
        9.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    9.3 結(jié)果與分析
        9.3.1 RsCao和RsPhs基因的克隆
        9.3.2 轉(zhuǎn)化子的PCR驗(yàn)證
        9.3.3 RsCao和RsPhs蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        9.3.4 黑色素形成測定
        9.3.5 細(xì)胞膜損傷的測定
        9.3.6 兒茶酚脅迫下RsCao和RsPhs基因相對(duì)定量表達(dá)分析
    9.4 結(jié)論與討論
第10章 全文結(jié)論與討論
    10.1 水稻紋枯病菌黑色素形成的影響及其鑒定
    10.2 水稻紋枯病菌轉(zhuǎn)錄組測序
    10.3 水稻紋枯病菌黑色素合成途徑相關(guān)基因的克隆
    10.4 水稻紋枯病菌氨基酸差異分析
    10.5 黑色素合成相關(guān)基因RsCao和RsPhs的真核表達(dá)
    10.6 本研究的主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    10.7 下一步的研究設(shè)想
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄：攻讀博士學(xué)位期間取得的科研成果



本文編號(hào)：3859685