發(fā)布時(shí)間：2023-10-17 17:45

　　胚胎附植對(duì)雌性家畜受孕起決定性的作用。胚胎附植成功的兩個(gè)不可或缺的因素是胚胎的質(zhì)量和容受性的子宮內(nèi)膜,相關(guān)研究表明,超過60%的體外授精胚胎植入失敗是由子宮內(nèi)膜容受性異常引起的,胚胎植入失敗會(huì)給動(dòng)物生產(chǎn)造成重大的損失。本課題組前期研究表明,mi RNAs和circ RNAs可能調(diào)控奶山羊容受性子宮內(nèi)膜的建立。然而,mi RNAs和circ RNAs在奶山羊容受性子宮內(nèi)膜中的作用和分子調(diào)控機(jī)理還需深入研究。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室前期建立的數(shù)據(jù)庫,得到奶山羊容受前期(PE,D5)和容受期(RE,D15)子宮內(nèi)膜組織中差異性表達(dá)的mi RNAs。由于ESCs在子宮內(nèi)膜容受期主要發(fā)揮增殖的作用,本試驗(yàn)通過采用雙熒光素酶基因報(bào)告系統(tǒng)、RNA干擾、過表達(dá)、免疫熒光等技術(shù),研究circ RNA、mi RNA和m RNA在奶山羊胚胎植入期對(duì)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的調(diào)控作用及分子調(diào)控機(jī)理,獲得以下研究結(jié)果:1.miR-100-5p對(duì)ESCs增殖的調(diào)控作用mi R-100-5p在RE中的表達(dá)量與PE相比顯著下調(diào)(p<0.05)。在體外,mi R-100-5p mimic處理48 h后,降低ESCs的活力,抑制ES...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
文獻(xiàn)綜述
    第一章 子宮內(nèi)膜容受性的研究進(jìn)展
        1.1 前言
        1.2 子宮內(nèi)膜研究
        1.3 胚胎植入研究
        1.4 子宮內(nèi)膜蛻膜化研究
        1.5 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞研究
            1.5.1 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的功能
            1.5.2 ESCs干細(xì)胞研究
        1.6 ESCs的增殖和分化研究
            1.6.1 ESCs周期的激素調(diào)節(jié)
            1.6.2 ESC增殖和分化的重要控制因素
            1.6.3 參與ESC增殖和分化的轉(zhuǎn)錄因子
        1.7 miRNAs調(diào)控子宮內(nèi)膜的研究進(jìn)展
            1.7.1 成熟miRNAs的起源
            1.7.2 miRNAs的作用機(jī)制
            1.7.4 miRNAs在奶山羊子宮內(nèi)膜中的研究進(jìn)展
            1.7.5 miR-100的研究進(jìn)展
        1.8 circ RNAs調(diào)控子宮內(nèi)膜的研究進(jìn)展
            1.8.1 真核生物中circ RNA的起源
            1.8.2 真核生物中circ RNAs的數(shù)量
            1.8.3 真核生物中circ RNAs的功能
            1.8.4 circ RNAs在動(dòng)物生產(chǎn)中的研究進(jìn)展
            1.8.5 circ RNAs在胚胎植入中的研究進(jìn)展
        1.9 研究目的與意義
        1.10 試驗(yàn)思路與方法
試驗(yàn)研究
    第二章 miR-100-5p調(diào)控奶山羊ESCs增殖作用的研究
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 試驗(yàn)儀器
            2.2.2 材料試劑
            2.2.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            2.2.4 培養(yǎng)及鑒定奶山羊子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(ESCs)
            2.2.5 qPCR過程
            2.2.6 細(xì)胞增殖分析
            2.2.7 細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.2.8 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
            2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 奶山羊子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞(ESCs)的鑒定
            2.3.2 miR-100-5p在奶山羊子宮內(nèi)膜容受期(RE)和容受前期(PE)中的表達(dá)
            2.3.3 miR-100-5p在 ESCs中的表達(dá)效率
            2.3.4 miR-100-5p對(duì) ESCs活力的影響
            2.3.5 miR-100-5p對(duì) ESCs增殖的影響
            2.3.6 miR-100-5p對(duì) ESCs周期的影響
            2.3.7 miR-100-5p對(duì) ESCs凋亡的影響
            2.3.8 miR-100-5p對(duì) ESCs凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 miR-100-5p通過靶基因HOXA1 調(diào)控ESCs增殖的作用研究
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 試驗(yàn)儀器
            3.2.2 材料試劑
            3.2.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            3.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
            3.2.5 RT-q PCR
            3.2.6 構(gòu)建雙熒光素酶報(bào)告載體
            3.2.7 HOXA1過表達(dá)載體構(gòu)建
            3.2.8 細(xì)胞增殖檢測(cè)
            3.2.9 細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            3.2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
            3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 miR-100-5p靶基因的鑒定
            3.3.2 奶山羊HOXA1基因的鑒定
            3.3.3 HOXA1在奶山羊容受期和容受前期子宮內(nèi)膜中的差異表達(dá)
            3.3.4 HOXA1過表達(dá)和干擾效率檢測(cè)
            3.3.5 HOXA1對(duì)ESCs活力的影響
            3.3.6 HOXA1對(duì)ESCs增殖的影響
            3.3.7 HOXA1對(duì)ESCs周期的影響
            3.3.8 HOXA1對(duì)ESCs凋亡的影響
            3.3.9 HOXA1對(duì)ESCs凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 circ-9110 在奶山羊子宮內(nèi)膜中的篩選及其對(duì)ESCs增殖的調(diào)控作用
        4.1 引言
        4.2 材料與方法
            4.2.1 試驗(yàn)儀器
            4.2.2 材料試劑
            4.2.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            4.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
            4.2.5 RT-q PCR
            4.2.6 雙熒光素酶報(bào)告載體構(gòu)建
            4.2.7 circ-9110過表達(dá)載體構(gòu)建
            4.2.8 細(xì)胞增殖檢測(cè)
            4.2.9 細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            4.2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)
            4.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 circ-9110的篩選
            4.3.2 circ-9110 作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA(ce RNA)結(jié)合miR-100-5p
            4.3.3 circ-9110 在奶山羊子宮內(nèi)膜容受期(RE)和容受前期(PE)中的表達(dá)水平
            4.3.4 circ-9110過表達(dá)和干擾效率檢測(cè)
            4.3.5 circ-9110對(duì)ESCs活力的影響
            4.3.6 circ-9110對(duì)ESCs增殖的影響
            4.3.7 circ-9110對(duì)ESCs周期的影響
            4.3.8 circ-9110對(duì)ESCs凋亡的影響
            4.3.9 circ-9110對(duì)ESCs凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 circ-9110/miR-100-5p/HOXA1 調(diào)控奶山羊子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的分子機(jī)理研究
        5.1 引言
        5.2 材料與方法
            5.2.1 試驗(yàn)儀器
            5.2.2 材料試劑
            5.2.3 試驗(yàn)動(dòng)物
            5.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
            5.2.5 蛋白提取和Western blot分析
            5.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 miR-100-5p對(duì) PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信號(hào)通路的影響
            5.3.2 HOXA1對(duì)PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信號(hào)通路的影響
            5.3.3 circ-9110對(duì)PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信號(hào)通路的影響
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
進(jìn)一步研究的問題
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3854713