蛋雞的產(chǎn)蛋性能主要取決于卵巢中生殖細(xì)胞以及卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育水平,而卵泡發(fā)育的調(diào)控是蛋禽繁殖的核心問題。家禽卵巢中只有不超過5%的卵泡可完成發(fā)育過程,最后成熟排卵。卵母細(xì)胞被排出后,遺留下來的組織被稱為排卵后卵泡(postovulatory follicle,POF),在完成排卵之后,POF開始逐漸退化。而另外超過95%沒有完成發(fā)育至成熟排卵的卵泡,最終都發(fā)生退化,這部分卵泡稱閉鎖卵泡(atretic follicle)。POF與閉鎖卵泡組成了家禽卵巢中兩種退化卵泡(regressed follicle)。本實(shí)驗(yàn)以海蘭白蛋雞為研究對(duì)象,一方面以研究POF調(diào)節(jié)蛋雞卵泡發(fā)育的分子機(jī)制,另一方面探究延緩卵泡閉鎖的方法。利用POF調(diào)節(jié)成雞卵泡發(fā)育和減緩卵泡閉鎖的雙重措施,使蛋雞的生殖細(xì)胞得以充分利用,為退化卵泡對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能調(diào)節(jié)作用提供理論依據(jù)。1.凋亡與自噬活動(dòng)參與蛋雞POF的退化哺乳動(dòng)物成熟卵泡排卵后形成黃體,通過分泌高水平的孕酮(progesterone,P4)來調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的發(fā)育、胚胎附植以及早期胚胎的發(fā)育。然而,鳥類的卵泡排卵后不形成黃體,僅作為POF而逐漸退化。目前,POF的功能和退化...

【文章頁(yè)數(shù)】：134 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 家禽卵泡發(fā)育的基本過程
        1.1 家禽卵巢發(fā)育過程
        1.2 家禽卵泡的形成
    第二節(jié) 家禽的退化卵泡
        2.1 排卵后卵泡(POF)
            2.1.1 POF的形成與退化
            2.1.2 POF功能的概況
        2.2 POF/黃體的比較生理學(xué)
            2.2.1 魚類的POF
            2.2.2 兩棲類的POF
            2.2.3 爬行類的POF
            2.2.4 哺乳動(dòng)物黃體的形成
            2.2.5 哺乳動(dòng)物黃體的退化機(jī)制
            2.2.6 哺乳動(dòng)物黃體的功能
        2.3 閉鎖卵泡
            2.3.1 閉鎖卵泡的形成及機(jī)理
            2.3.2 顆粒細(xì)胞凋亡是卵泡閉鎖的主要原因
            2.3.3 自噬與卵泡閉鎖
            2.3.4 壞死與卵泡閉鎖
    第三節(jié) 調(diào)節(jié)家禽卵泡生長(zhǎng)發(fā)育和閉鎖的因素
        3.1 胰島素樣生長(zhǎng)因子
        3.2 表皮生長(zhǎng)因子
        3.3 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β超家族
            3.3.1 TGFβ家族
            3.3.2 抑制素/激活素家族
            3.3.3 BMP家族
        3.4 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族
            3.4.1 FGF1
            3.4.2 FGF2/bFGF
            3.4.3 FGF7
            3.4.4 FGF8
            3.4.5 FGF9
            3.4.6 FGF10
        3.5 其它調(diào)節(jié)家禽卵泡生長(zhǎng)發(fā)育和閉鎖的因素
    第四節(jié) 本研究的目的和內(nèi)容
        4.1 研究的目的和意義
        4.2 研究的目標(biāo)和內(nèi)容
        4.3 技術(shù)路線
第二章 凋亡與自噬活動(dòng)參與蛋雞POF的退化
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 主要器材
        2.2.3 主要試劑及配制
        2.2.4 組織采集
        2.2.5 石蠟切片制作和HE形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.6 冰凍切片制作
        2.2.7 免疫熒光染色
        2.2.8 油紅O染色
        2.2.9 TUNEL檢測(cè)
        2.2.10 透射電鏡和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察
        2.2.11 P4水平測(cè)定
        2.2.12 RNA提取
        2.2.13 cDNA合成
        2.2.14 RT-PCR和qRT-PCR
        2.2.15 WB分析
        2.2.16 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 POF的形態(tài)學(xué)觀察
        2.3.2 POF顆粒層的鑒定
        2.3.3 POF6的空泡樣細(xì)胞是由脂肪樣變性導(dǎo)致
        2.3.4 POF的脂肪樣變性開始于POF3
        2.3.5 POF退化過程中P₄合成關(guān)鍵酶在mRNA的表達(dá)水平變化
        2.3.6 POF退化過程中CYP11A1的表達(dá)水平變化
        2.3.7 POF退化過程中P₄分泌水平變化
        2.3.8 POF退化過程中caspase-3表達(dá)量的變化
        2.3.9 POF退化過程中顆粒層的退化速度慢于膜層的退化速度
        2.3.10 GRP78和BCL2主要表達(dá)于POF的顆粒細(xì)胞之上
        2.3.11 POF顆粒細(xì)胞退化過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體發(fā)生不同程度的退行性變化
        2.3.12 POF3經(jīng)歷最大程度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體凋亡
        2.3.13 POF膜層的退化可能與Beclin1介導(dǎo)的自噬有關(guān)
    2.4 討論
第三章 POF通過PGE₂-EP2信號(hào)促進(jìn)蛋雞等級(jí)前卵泡生長(zhǎng)
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.2.2 主要器材
        3.2.3 主要試劑及配制
        3.2.4 POF的培養(yǎng)
        3.2.5 POF與SWF共培養(yǎng)
        3.2.6 POF顆粒細(xì)胞的分離培養(yǎng)
        3.2.7 POF的顆粒細(xì)胞與SWF共培養(yǎng)
        3.2.8 SWF的培養(yǎng)與藥物的處理
        3.2.9 石蠟切片制作和HE形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.10 免疫組織化學(xué)染色
        3.2.11 BrdU的染色方法
        3.2.12 RNA提取、cDNA合成及RT-PCR和qRT-PCR
        3.2.13 WB分析
        3.2.14 ELISA的方法檢測(cè)PGE₂和PGF_2α水平
        3.2.15 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 POF體外培養(yǎng)模型的建立
        3.3.2 POF1促進(jìn)SWF外膜層的增殖
        3.3.3 POF顆粒細(xì)胞的分離與鑒定
        3.3.4 POF1顆粒細(xì)胞能促進(jìn)SWF外膜層增殖
        3.3.5 POF具有分泌前列腺素的能力
        3.3.6 PGE₂能促進(jìn)SWF外膜層的增殖
        3.3.7 POF1通過分泌PGE2促進(jìn)SWF外膜層的增殖
        3.3.8 POF通過PGE₂-EP2信號(hào)促進(jìn)SWF外膜層的增殖
    3.4 討論
第四章 蛋雞等級(jí)前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育和閉鎖相關(guān)基因的初篩
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.2.2 主要器材
        4.2.3 主要試劑及配制
        4.2.4 組織采集
        4.2.5 石蠟切片制作和形態(tài)學(xué)觀察
        4.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR
        4.2.7 數(shù)據(jù)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 等級(jí)前卵泡與閉鎖的等級(jí)前卵泡形態(tài)學(xué)觀察
        4.3.2 SYF與ASYF凋亡和抗凋亡基因表達(dá)的變化
        4.3.3 SYF與ASYF緊密連接相關(guān)基因表達(dá)的變化
        4.3.4 SYF與ASYF類固醇激素和前列腺素合成酶相關(guān)基因表達(dá)的變化
        4.3.5 SYF與ASYF激素受體相關(guān)基因表達(dá)的變化
        4.3.6 SYF與ASYF細(xì)胞因子受體相關(guān)基因表達(dá)的變化
        4.3.7 SWF與SYF細(xì)胞因子受體相關(guān)基因表達(dá)的變化
    4.4 討論
第五章 bFGF促進(jìn)蛋雞等級(jí)前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育與卵黃沉積機(jī)制的研究
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.2.2 主要器材
        5.2.3 主要試劑及配制
        5.2.4 SWF的培養(yǎng)與藥物的處理
        5.2.5 石蠟切片制作和免疫熒光染色
        5.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR
        5.2.7 BrdU摻入及檢測(cè)
        5.2.8 WB分析
        5.2.9 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果
        5.3.1 VLDLR在蛋雞等級(jí)前卵泡與等級(jí)卵泡中表達(dá)的變化
        5.3.2 bFGF通過FGFR1-AKT信號(hào)促進(jìn)SWF外膜層增殖
        5.3.3 bFGF通過促進(jìn)卵泡膜層的血管生成調(diào)節(jié)等級(jí)前卵泡卵黃沉積
        5.3.4 bFGF通過抑制卵泡顆粒層VLDLR的表達(dá)調(diào)節(jié)等級(jí)前卵泡卵黃沉積
    5.4 討論
第六章 提示和創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3836302