喜馬拉雅紫茉莉(Mirabilis himalaica),藏語名“巴朱”,為常用珍稀瀕危藏藥材,其根為藥用部位。魚藤酮是從喜馬拉雅紫茉莉中分離的代表性天然產(chǎn)物,具有抗腫瘤等廣泛生物活性。本文建立了喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)培養(yǎng)體系,考察了多個(gè)因素對(duì)喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)培養(yǎng)及魚藤酮積累的影響；從喜馬拉雅紫茉莉中克隆了魚藤酮合成途徑上的苯丙氨酸解氨酶(MhPAL). 查爾酮合成酶 (MhCHS)和查爾酮異構(gòu)酶(MhCHI)三個(gè)基因,采用重組蛋白質(zhì)或基于發(fā)根的轉(zhuǎn)基因方法研究了它們的功能。用農(nóng)桿菌C58C1(pRiA4)誘導(dǎo)喜馬拉雅紫茉莉產(chǎn)生發(fā)根,對(duì)影響喜馬拉雅紫茉莉誘導(dǎo)發(fā)根頻率的不同因素進(jìn)行了考察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同因素對(duì)喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)率影響較大：喜馬拉雅紫茉莉幼嫩葉片發(fā)根誘導(dǎo)率最高,達(dá)到32%,葉片是誘導(dǎo)發(fā)根的理想外植體；喜馬拉雅紫茉莉幼嫩葉片預(yù)培養(yǎng)2-3d,發(fā)根誘導(dǎo)率為26-32%,預(yù)培養(yǎng)2-3d有利于葉片誘導(dǎo)出發(fā)根；農(nóng)桿菌浸染時(shí)間為20 min時(shí),喜馬拉雅紫茉莉幼嫩葉片發(fā)根誘導(dǎo)率最高,為34%。PCR鑒定結(jié)果表明,能夠從Ri質(zhì)粒和喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根基因組中擴(kuò)增出423 bp的rolB和...

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
1 緒論
    1.1 課題的背景和意義
    1.2 國內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.2.1 藥用植物發(fā)根培養(yǎng)研究進(jìn)展
        1.2.2 植物代謝工程研究進(jìn)展
        1.2.3 苯丙氨酸解氨酶、查爾酮合成酶和查爾酮異構(gòu)酶研究進(jìn)展
2 喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)條件優(yōu)化
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 儀器和設(shè)備
        2.1.3 研究方法
    2.2 結(jié)果與討論
        2.2.1 外植體類型對(duì)喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)率的影響
        2.2.2 預(yù)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)率的影響
        2.2.3 侵染時(shí)間對(duì)喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)率的影響
        2.2.4 喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根誘導(dǎo)培養(yǎng)與誘導(dǎo)發(fā)根相關(guān)基因的PCR檢測
        2.2.5 不同液體培養(yǎng)基對(duì)喜馬拉雅紫茉莉發(fā)根生長及魚藤酮合成的影響
    2.3 本章小結(jié)
3 喜馬拉雅紫茉莉PAL、CHS和CHI基因克隆與分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 儀器和設(shè)備
        3.1.3 研究方法
    3.2 結(jié)果與討論
        3.2.1 喜馬拉雅紫茉莉PAL基因克隆與分析
        3.2.2 喜馬拉雅紫茉莉CHS基因克隆與分析
        3.2.3 喜馬拉雅紫茉莉CHI基因克隆與分析
        3.2.4 MhPAI、MhCHS和MhCHI組織表達(dá)分析
    3.3 本章小結(jié)
4 喜馬拉雅紫茉莉PAL蛋白質(zhì)功能研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 儀器和設(shè)備
        4.1.3 研究方法
    4.2 結(jié)果與討論
    4.3 本章小結(jié)
5. 喜馬拉雅紫茉莉轉(zhuǎn)MHCHS/MHCHI基因研究
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 儀器和設(shè)備
        5.1.3 研究方法
    5.2 結(jié)果與分析
    5.3 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
縮寫詞表
個(gè)人簡介
導(dǎo)師簡介
獲得成果目錄
致謝



本文編號(hào)：3836616