哺乳動物的卵母細(xì)胞在個(gè)體出生前后,就進(jìn)入第一次減數(shù)分裂,并被阻滯在第一次減數(shù)分裂前期的雙線期,這種阻滯可能長達(dá)數(shù)月、數(shù)年甚至數(shù)十年之久,直到在排卵前促黃體素(LH)峰的刺激下,成熟卵泡中的卵母細(xì)胞才會恢復(fù)并完成減數(shù)分裂,成為具備受精和后續(xù)發(fā)育能力的成熟卵母細(xì)胞。在雌性哺乳動物的每個(gè)發(fā)情周期中,雌激素分泌波總是伴隨著LH峰的出現(xiàn),并在雌激素分泌波和LH峰出現(xiàn)之后發(fā)生成熟卵母細(xì)胞的排卵。而關(guān)于雌激素分泌波和LH峰調(diào)控卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的具體機(jī)制及其二者之間的調(diào)控關(guān)系尚不十分明確。雌激素通過激活其核受體(ERs)和其膜受體(GPR30),進(jìn)而通過受體發(fā)揮不同的生物學(xué)效應(yīng)。不同的雌激素受體與雌激素的親和力不同,ERs與雌激素的親和力較高,較低濃度雌激素即可激活ERs;而GPR30與雌激素親和力較低,激活GPR30需要更高的雌激素濃度。本論文作者所在研究團(tuán)隊(duì)的前期研究顯示,低濃度雌激素能夠通過激活ERs信號通路增強(qiáng)CNP維持卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的作用,而高濃度雌激素卻能通過激活GPR30信號通路促進(jìn)減數(shù)分裂恢復(fù)。因此,本研究主要聚焦于排卵前雌激素分泌波和LH峰調(diào)控卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體卵丘細(xì)胞擴(kuò)展的具體...

【文章頁數(shù)】：138 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 哺乳動物卵母細(xì)胞生長發(fā)育與成熟研究進(jìn)展
        1.1 卵子發(fā)生與卵泡發(fā)育
            1.1.1 卵子發(fā)生
            1.1.2 卵泡發(fā)育
        1.2 減數(shù)分裂阻滯的維持與相關(guān)分子機(jī)制
            1.2.1 哺乳動物第一次減數(shù)分裂阻滯
            1.2.2 維持卵母細(xì)胞減數(shù)分裂阻滯的分子機(jī)制
        1.3 卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)與后續(xù)發(fā)育潛能的獲得
            1.3.1 卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)
            1.3.2 卵母細(xì)胞的后續(xù)發(fā)育潛能
        1.4 卵丘擴(kuò)展
            1.4.1 卵丘細(xì)胞
            1.4.2 卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞的互作調(diào)控
            1.4.3 卵丘細(xì)胞擴(kuò)展
        1.5 小結(jié)
    第二章 雌激素及其受體在卵巢中的功能研究進(jìn)展
        2.1 雌激素
            2.1.1 雌激素的定義、生物合成與代謝
            2.1.2 雌激素的生理功能
        2.2 雌激素核受體與雌激素的基因組效應(yīng)
            2.2.1 雌激素核受體的分子結(jié)構(gòu)
            2.2.2 雌激素核受體信號的調(diào)控機(jī)制
        2.3 雌激素膜受體與雌激素的非基因組效應(yīng)
            2.3.1 雌激素膜受體的分子結(jié)構(gòu)
            2.3.2 雌激素膜受體的定位與表達(dá)
            2.3.3 雌激素膜受體功能預(yù)測
        2.4 雌激素對卵丘擴(kuò)展的調(diào)控作用
        2.5 小結(jié)
    第三章 表皮生長因子信號通路參與調(diào)控卵母細(xì)胞成熟過程的機(jī)制研究進(jìn)展
        3.1 表皮生長因子與受體概述
            3.1.1 表皮生長因子與受體
            3.1.2 表皮生長因子信號通路的功能
        3.2 表皮因子受體信號通路在卵母細(xì)胞成熟過程中的作用
            3.2.1 LH上調(diào)顆粒細(xì)胞中類表皮樣生長因子表達(dá)
            3.2.2 EGFR信號通路在卵母細(xì)胞成熟過程中的作用
        3.3 小結(jié)
        3.4 本研究的目的和意義
試驗(yàn)研究
    第四章 促黃體素對卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體中GPR30水平的調(diào)控作用及其作用機(jī)制研究
        4.1 材料和方法
            4.1.1 研究對象
            4.1.2 試驗(yàn)材料
            4.1.3 液體配制
            4.1.4 小鼠COCs的回收與體外培養(yǎng)
            4.1.5 表皮生長因子受體抑制小鼠模型的制備與超數(shù)排卵處理
            4.1.6 山羊卵泡與COCs的回收與體外培養(yǎng)
            4.1.7 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
            4.1.8 蛋白免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)
            4.1.9 免疫熒光染色
            4.1.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        4.2 試驗(yàn)結(jié)果
            4.2.1 LH/h CG對小鼠COC中 GPR30 基因表達(dá)的調(diào)控作用
            4.2.2 LH/h CG對小鼠COC中 GPR30 蛋白水平的調(diào)控作用
            4.2.3 LH/h CG誘導(dǎo)類表皮樣生長因子表達(dá)調(diào)控小鼠COCs中 GPR30 水平
            4.2.4 EGF下調(diào)體外培養(yǎng)的小鼠COCs中 GPR30 基因表達(dá)水平
            4.2.5 EGF上調(diào)體外培養(yǎng)的小鼠COCs中 GPR30 蛋白水平
            4.2.6 EGF通過激活小鼠卵丘細(xì)胞上的EGF受體上調(diào)GPR30 蛋白水平
            4.2.7 LH對山羊卵泡COC中GPR30基因表達(dá)的調(diào)控作用
            4.2.8 LH對山羊卵泡COC中GPR30蛋白水平的調(diào)控作用研究
            4.2.9 LH誘導(dǎo)山羊卵泡壁顆粒細(xì)胞表達(dá)類表皮樣生長因子,進(jìn)而上調(diào)山羊COCs中 GPR30 的水平
            4.2.10 山羊COCs體外成熟培養(yǎng)過程中GPR30 基因表達(dá)變化趨勢檢測
            4.2.11 EGF上調(diào)體外培養(yǎng)的山羊COCs中 GPR30 蛋白水平
            4.2.12 EGF通過激活山羊COCs的 EGF受體上調(diào)GPR30 蛋白水平
            4.2.13 EGF通過非基因組途徑調(diào)控山羊COCs中的GPR30 蛋白水平變化
            4.2.14 EGF激活EGFR上調(diào)GPR30 蛋白水平的作用發(fā)生在卵丘細(xì)胞上
        4.3 討論
            4.3.1 EGFR信號通路介導(dǎo)了LH上調(diào)COCs中 GPR30 蛋白水平的作用
            4.3.2 LH/EGF通過非基因組途徑調(diào)控COCs中 GPR30 的蛋白水平
            4.3.3 LH信號上調(diào)COCs中 GPR30 蛋白水平的作用發(fā)生在卵丘細(xì)胞上
        4.4 小結(jié)
    第五章 表皮生長因子受體信號通路調(diào)控顆粒細(xì)胞中GPR30蛋白降解的機(jī)制研究
        5.1 材料和方法
            5.1.1 研究對象
            5.1.2 試驗(yàn)材料
            5.1.3 液體配制
            5.1.4 小鼠原代卵泡顆粒細(xì)胞的收集與培養(yǎng)
            5.1.5 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
            5.1.6 蛋白免疫印跡試驗(yàn)(Western blot)
            5.1.7 免疫熒光染色
            5.1.8 細(xì)胞溶酶體活性檢測
            5.1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        5.2 試驗(yàn)結(jié)果
            5.2.1 EGF通過激活EGFR上調(diào)原代卵泡顆粒細(xì)胞中GPR30 蛋白水平
            5.2.2 EGFR激活延長了卵泡顆粒細(xì)胞中GPR30 蛋白的半衰期
            5.2.3 卵泡顆粒細(xì)胞中GPR30蛋白降解途徑檢測
            5.2.4 EGFR激活降低了卵泡顆粒細(xì)胞中的溶酶體活性
            5.2.5 EGFR激活減少了卵泡顆粒細(xì)胞中溶酶體的數(shù)量
        5.3 討論
        5.4 小結(jié)
    第六章 雌激素通過GPR30信號通路調(diào)節(jié)卵丘細(xì)胞中表皮生長因子受體水平的機(jī)制研究
        6.1 材料和方法
            6.1.1 研究對象
            6.1.2 試驗(yàn)材料
            6.1.3 液體配制
            6.1.4 小鼠COCs的回收與體外培養(yǎng)
            6.1.5 山羊卵泡與COCs的回收與體外培養(yǎng)
            6.1.6 蛋白免疫印跡試驗(yàn)
            6.1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        6.2 試驗(yàn)結(jié)果
            6.2.1 體內(nèi)成熟過程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平檢測
            6.2.2 體外成熟培養(yǎng)過程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平檢測
            6.2.3 17β-E₂ 激活GPR30 信號通路上調(diào)小鼠COCs中 EGFR蛋白水平
            6.2.4 在卵泡中成熟的山羊COCs中 EGFR蛋白水平檢測
            6.2.5 體外成熟培養(yǎng)的山羊COCs中 EGFR蛋白水平檢測
            6.2.6 17β-E₂ 激活GPR30 信號通路上調(diào)山羊COCs中 EGFR蛋白水平
        6.3 討論
            6.3.1 17β-E₂ 激活GPR30 信號通路上調(diào)COCs中 EGFR蛋白水平
            6.3.2 較高的EGFR蛋白水平有助于維持EGFR的持續(xù)激活
        6.4 小結(jié)
    第七章 雌激素通過激活GPR30 通路增強(qiáng)LH/EGF信號促進(jìn)卵丘擴(kuò)展的研究
        7.1 材料和方法
            7.1.1 研究對象
            7.1.2 試驗(yàn)材料
            7.1.3 液體配制
            7.1.4 小鼠COCs的回收與體外培養(yǎng)
            7.1.5 山羊COCs的回收與體外培養(yǎng)
            7.1.6 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
            7.1.7 卵丘擴(kuò)展分級與擴(kuò)展指數(shù)統(tǒng)計(jì)
            7.1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
        7.2 試驗(yàn)結(jié)果
            7.2.1 GPR30信號通路激活加強(qiáng)了EGF促進(jìn)小鼠卵丘擴(kuò)展的作用
            7.2.2 17β-E₂通過GPR30信號通路促進(jìn)小鼠卵丘擴(kuò)展相關(guān)基因表達(dá)
            7.2.3 GPR30信號通路激活加強(qiáng)了EGF促進(jìn)山羊卵丘擴(kuò)展的作用
            7.2.4 17β-E₂通過GPR30信號通路促進(jìn)山羊卵丘擴(kuò)展相關(guān)基因表達(dá)
        7.3 討論
            7.3.1 E₂/GPR30信號通路激活加強(qiáng)了EGF促進(jìn)卵丘擴(kuò)展的作用
            7.3.2 E₂/GPR30信號通路激活加強(qiáng)了EGF上調(diào)卵丘擴(kuò)展相關(guān)基因的作用
        7.4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
縮略詞
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3834848