發(fā)布時(shí)間：2023-05-07 19:14

　　單體異源染色體附加系(MAALs)是作物育種中物種間轉(zhuǎn)移有利基因和性狀的重要橋梁材料,也是解析供體種基因組、探究物種親緣關(guān)系的重要工具。前人通過甘藍(lán)型油菜(Brassica napus L.,2n=38,AACC)與藥用植物菘藍(lán)(Isatis indigotica Fort.,2n=14,II)的體細(xì)胞雜種與甘藍(lán)型油菜的連續(xù)回交,一方面培育出雄蕊心皮化的甘藍(lán)型油菜“菘油”細(xì)胞質(zhì)雄性不育系(inap CMS),另一方面創(chuàng)建了附加單條菘藍(lán)染色體的一整套甘藍(lán)型油菜-菘藍(lán)單體異附加系(MAALs Ma-Mg),并發(fā)現(xiàn)MAAL Me的菘藍(lán)染色體攜帶有“菘油”CMS的恢復(fù)基因。本研究從形態(tài)、細(xì)胞學(xué)、分子標(biāo)記等方面對MAAL Me的自交后代進(jìn)行分析,以選育菘藍(lán)染色體上的恢復(fù)基因滲入甘藍(lán)型油菜而產(chǎn)生的“菘油”CMS的恢復(fù)系;另外,通過白菜(Brassica rapa L.,2n=20,AA)與黑芥(B.nigra(L.)Koch,2n=16,BB)的三倍體雜種(AAB)與白菜連續(xù)回交,創(chuàng)建整套的白菜-黑芥單體異附加系。主要結(jié)果如下:1. 甘藍(lán)型油菜inap CMS恢復(fù)系的培育將甘藍(lán)型油菜-菘藍(lán)單體附加...

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物遠(yuǎn)緣雜交與異源多倍體
    1.2 蕓薹屬遠(yuǎn)緣雜交研究進(jìn)展
        1.2.1 蕓薹屬簡介
        1.2.2 甘藍(lán)型油菜遠(yuǎn)緣雜交育種研究進(jìn)展
            1.2.2.1 遠(yuǎn)緣雜交人工合成甘藍(lán)型油菜
            1.2.2.2 遠(yuǎn)緣雜交轉(zhuǎn)入抗性基因
            1.2.2.3 遠(yuǎn)緣雜交導(dǎo)入優(yōu)良農(nóng)藝性狀
            1.2.2.4 遠(yuǎn)緣雜交創(chuàng)建細(xì)胞質(zhì)雄性不育系
    1.3 細(xì)胞質(zhì)雄性不育系及恢復(fù)系
        1.3.1 細(xì)胞質(zhì)雄性不育基因
        1.3.2 細(xì)胞質(zhì)雄性不育系恢復(fù)基因
    1.4 植物單體異附加系研究概況
        1.4.1 單體異附加系
        1.4.2 單體異附加系的培育方法
        1.4.3 單體異附加系的鑒定
            1.4.3.1 形態(tài)學(xué)鑒定
            1.4.3.2 生化標(biāo)記鑒定
            1.4.3.3 分子標(biāo)記鑒定
            1.4.3.4 細(xì)胞學(xué)標(biāo)記鑒定
        1.4.4 單體異附加系的應(yīng)用策略
    1.5 本研究的目的和意義
2 以附加系為橋梁選育甘藍(lán)型油菜inap CMS的恢復(fù)系
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 細(xì)胞學(xué)觀察
        2.2.3 花粉育性觀察
        2.2.4 小孢子培養(yǎng)
            2.2.4.1 選蕾
            2.2.4.2 消毒
            2.2.4.3 抽提小孢子
            2.2.4.4 加倍培養(yǎng)
            2.2.4.5 胚誘導(dǎo)培養(yǎng)
            2.2.4.6 再生苗培養(yǎng)
            2.2.4.7 倍性檢測
        2.2.5 田間實(shí)驗(yàn)與性狀考察
        2.2.6 基因組DNA的提取
        2.2.7 原位雜交
            2.2.7.1 探針標(biāo)記和封阻DNA的制備
            2.2.7.2 原位雜交制片
            2.2.7.3 原位雜交
            2.2.7.4 拍照保存和圖片處理
        2.2.8 SSR分析
            2.2.8.1 PCR反應(yīng)體系
            2.2.8.2 PCR程序及瓊脂糖凝膠檢測
        2.2.9 AFLP分析
            2.2.9.1 DNA酶切與連接
            2.2.9.2 預(yù)擴(kuò)增
            2.2.9.3 選擇性擴(kuò)增
            2.2.9.4 聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳檢測
        2.2.10 品質(zhì)分析
        2.2.11 恢復(fù)基因的BSA重測序
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 “菘油”CMS恢復(fù)系的選育
        2.3.2 恢39的表型特征
            2.3.2.1 恢39的苗期形態(tài)特征
            2.3.2.2 恢39的成株期形態(tài)特征及產(chǎn)量相關(guān)農(nóng)藝性狀
            2.3.2.3 恢39的花器官形態(tài)及自交結(jié)實(shí)
        2.3.3 恢39的普通細(xì)胞學(xué)和原位雜交分析
        2.3.4 恢39的SSR和 AFLP分析
        2.3.5 恢39種子脂肪酸及硫苷組成分析
        2.3.6 恢復(fù)基因的遺傳模式分析和初定位
    2.4 討論
        2.4.1 甘藍(lán)型油菜inap CMS恢復(fù)系的創(chuàng)建
        2.4.2 恢復(fù)系恢39中來自菘藍(lán)的性狀
        2.4.3 甘藍(lán)型油菜inap CMS恢復(fù)系恢39 的應(yīng)用
3 全套白菜-黑芥單體異附加系的創(chuàng)建及分析
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 基因組DNA的提取
        3.2.3 SSR分子標(biāo)記鑒定
            3.2.3.1 PCR反應(yīng)體系
            3.2.3.2 PCR程序及瓊脂糖凝膠檢測
        3.2.4 染色體計(jì)數(shù)和染色體行為觀察
        3.2.5 花粉育性觀察
        3.2.6 莖尖培養(yǎng)
        3.2.7 原位雜交
            3.2.7.1 探針的制備
            3.2.7.2 雙色原位雜交
        3.2.8 表型考察
        3.2.9 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 白菜-黑芥單體附加系的創(chuàng)建
        3.3.2 黑芥染色體的雌雄配子傳遞率
        3.3.3 MAALs的細(xì)胞學(xué)分析
        3.3.4 黑芥B基因組rDNA位點(diǎn)定位
        3.3.5 白菜-黑芥MAALs的表型特征
        3.3.6 B3植株的紫色表型
    3.4 討論
        3.4.1 白菜-黑芥MAALs的創(chuàng)建
        3.4.2 黑芥染色體在MAALs中的染色體行為及傳遞率
        3.4.3 黑芥一些性狀的染色體定位
        3.4.4 白菜-黑芥MAALs的應(yīng)用
4 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
附錄 Ⅰ
附錄 Ⅱ
致謝



本文編號：3811174