發(fā)布時間：2022-12-25 12:42

　　玉米作為重要食用和飼用作物,在我國北方地區(qū)種植普遍。玉米收獲后,產(chǎn)生大量秸稈副產(chǎn)物。目前青貯是這種廢棄物利用的主要形式,其過程是在厭氧條件下,利用秸稈表面附生的乳酸菌,轉(zhuǎn)化可溶性碳水化合物,生成以乳酸為主的有機酸,降低飼料的pH值,抑制腐敗微生物生長繁殖,從而保持秸稈的營養(yǎng)品質(zhì),青貯飼料是反芻動物越冬飼料的重要來源。目前青貯多采用傳統(tǒng)方法,即依賴植物表面天然存在微生物的代謝活動,最后形成以乳酸菌為優(yōu)勢菌群的生物質(zhì)轉(zhuǎn)化過程,鑒于作物種類及其營養(yǎng)成分含量的不同,致使發(fā)酵周期長、飼料質(zhì)量不穩(wěn)定。因此,在青貯過程中添加青貯劑提高飼料品質(zhì)逐漸被養(yǎng)殖行業(yè)接受。常用細菌接種劑中多選用同型發(fā)酵乳酸菌以快速啟動發(fā)酵,隨著接種劑應用的普及,其弊端逐漸暴露,乳酸的大量產(chǎn)生易于引起開窖后的二次發(fā)酵,因此異型發(fā)酵乳酸菌在青貯中的應用受到重視。此外,為了改善青貯飼料的營養(yǎng)品質(zhì)和消化利用率,經(jīng)常在接種劑中復配木質(zhì)纖維素降解酶。但是外源添加異型發(fā)酵乳桿菌以及木質(zhì)纖維素降解酶或產(chǎn)木質(zhì)纖維素降解酶的菌株對青貯過程中細菌群落組成的影響及青貯品質(zhì)的作用研究還很有限。本論文以分析玉米秸稈自然青貯過程中核心微生物動態(tài)變化為基礎,... 

【文章頁數(shù)】：140 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫詞表
第一章 緒論
    1.1 玉米秸稈青貯
    1.2 青貯過程的動態(tài)變化
    1.3 青貯過程中的微生物
        1.3.1 乳酸菌
        1.3.2 腸桿菌
        1.3.3 梭菌和芽孢桿菌
        1.3.4 酵母菌和霉菌
    1.4 微生物分析方法
        1.4.1 傳統(tǒng)方法
        1.4.2 變性梯度凝膠電泳
        1.4.3 16S rDNA測序分析
    1.5 青貯飼料指標測定
        1.5.1 感官評價
        1.5.2 pH值
        1.5.3 干物質(zhì)
        1.5.4 可溶性碳水化合物
        1.5.5 乳酸
        1.5.6 揮發(fā)性脂肪酸
    1.6 青貯飼料發(fā)酵劑
        1.6.1 青貯飼料接種劑
        1.6.2 酶制劑
    1.7 本論文研究內(nèi)容
第二章 玉米秸稈自然青貯過程中細菌群落的動態(tài)變化
    2.1 材料和方法
        2.1.1 菌株、培養(yǎng)基和試劑
        2.1.2 植物材料和實驗室水平青貯實驗
        2.1.3 玉米秸稈青貯過程中發(fā)酵品質(zhì)的變化
        2.1.4 宏基因組提取
        2.1.5 16S rDNA擴增子測序
        2.1.6 測序結(jié)果分析
        2.1.7 青貯飼料中乳酸菌的分離鑒定
        2.1.8 乳酸菌生長特性研究
        2.1.9 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 玉米秸稈青貯過程中發(fā)酵特性變化
        2.2.2 16S rDNA測序結(jié)果及微生物組多樣性分析
        2.2.3 玉米秸稈青貯飼料中細菌群體組成
        2.2.4 玉米秸稈青貯過程中優(yōu)勢乳酸菌的動態(tài)變化
        2.2.5 青貯飼料中乳酸菌的分離鑒定
        2.2.6 分離乳酸菌的生長特性
    2.3 討論
第三章 異型發(fā)酵乳酸菌對玉米秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)和細菌群落的影響
    3.1 材料和方法
        3.1.1 菌株、培養(yǎng)基和試劑
        3.1.2 類谷糠乳桿菌轉(zhuǎn)化乳酸成乙酸和1,2-丙二醇
        3.1.3 青貯飼料制備
        3.1.4 玉米秸稈發(fā)酵品質(zhì)
        3.1.5 16S rDNA宏基因組分析
        3.1.6 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 類谷糠乳桿菌SDMCC050300轉(zhuǎn)化乳酸成乙酸和1,2-丙二醇
        3.2.2 異型發(fā)酵接種劑對玉米秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的作用
        3.2.3 玉米秸稈青貯過程乳酸菌和腸桿菌數(shù)量變化
        3.2.4 16S rDNA測序分析細菌群落多樣性
        3.2.5 異型發(fā)酵接種劑對細菌群落變化影響
        3.2.6 青貯過程中主要乳酸菌的動態(tài)變化
    3.3 討論
第四章 乳酸菌產(chǎn)阿魏酸酯酶對玉米秸稈的水解作用及其分泌特性
    4.1 材料和方法
        4.1.1 菌株、培養(yǎng)基和試劑
        4.1.2 產(chǎn)阿魏酸酯酶乳桿菌的篩選
        4.1.3 阿魏酸酯酶在大腸桿菌中的表達和純化
        4.1.4 阿魏酸酯酶活性測定
        4.1.5 對四種標準底物水解作用比較
        4.1.6 降解玉米秸稈釋放酚酸
        4.1.7 植物乳桿菌和大腸桿菌穿梭載體構建
        4.1.8 阿魏酸酯酶及其突變體構建
        4.1.9 阿魏酸酯酶在植物乳桿菌和大腸桿菌中的定位
        4.1.10 阿魏酸酯酶及其N端序列轉(zhuǎn)運異源蛋白
        4.1.11 數(shù)據(jù)分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 產(chǎn)阿魏酸酯酶乳桿菌的篩選
        4.2.2 阿魏酸酯酶序列分析
        4.2.3 阿魏酸酯酶性質(zhì)比較分析
        4.2.4 對模式底物水解能力
        4.2.5 酶解玉米秸稈釋放酚酸
        4.2.6 阿魏酸酯酶的分泌表達
        4.2.7 阿魏酸酯酶N端序列在其分泌中起關鍵作用
        4.2.8 阿魏酸酯酶及其N端序列轉(zhuǎn)運異源蛋白
    4.3 討論
第五章 產(chǎn)木質(zhì)纖維素降解酶菌株對乳酸菌的促生長作用
    5.1 材料與方法
        5.1.1 菌株、培養(yǎng)基和試劑
        5.1.2 青貯飼料中產(chǎn)木質(zhì)纖維素降解酶菌株的篩選與鑒定
        5.1.3 菌株SDMCC050309胞外酶譜
        5.1.4 酶的鑒定、克隆和表達純化
        5.1.5 酶的性質(zhì)研究
        5.1.6 纖維寡糖和木寡糖的制備
        5.1.7 纖維寡糖對乳酸菌的促生長作用
        5.1.8 木寡糖對乳酸菌的促生長作用
        5.1.9 數(shù)據(jù)分析
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 分離鑒定內(nèi)切葡聚糖酶和內(nèi)切木聚糖酶產(chǎn)生菌
        5.2.2 內(nèi)切葡聚糖酶的鑒定
        5.2.3 克隆表達純化內(nèi)切木聚糖酶
        5.2.4 酶的生化特性分析
        5.2.5 乳酸菌靜息細胞對纖維寡糖的利用
        5.2.6 纖維寡糖對乳酸菌生長的作用
        5.2.7 木聚糖水解產(chǎn)物分析
        5.2.8 木寡糖對乳酸菌生長的作用
    5.3 討論
第六章 復合接種劑在玉米秸稈青貯和黃貯中應用效果評價
    6.1 材料與方法
        6.1.1 菌株、培養(yǎng)基和試劑
        6.1.2 復合接種劑的制備
        6.1.3 不同青貯劑應用效果的比較
        6.1.4 復合接種劑在黃貯中的應用
        6.1.5 纖維素酶和木聚糖酶對黃貯品質(zhì)的影響
        6.1.6 數(shù)據(jù)分析
    6.2 結(jié)果
        6.2.1 不同青貯劑應用效果的比較
        6.2.2 接種劑和酶制劑在黃貯中應用效果
        6.2.3 纖維素酶和木聚糖酶對黃貯飼料中乳酸/乙酸的調(diào)節(jié)
    6.3 討論
全文總結(jié)與展望
參考文獻
攻讀博士學位論文期間(待)發(fā)表論文
致謝
外文寫作
附件



本文編號：3726644