發(fā)布時間：2022-12-22 02:45

　　Luman又稱CREB3或LZIP,屬于基礎(chǔ)亮氨酸拉鏈（basic leucine-zipper,bZIP）轉(zhuǎn)錄因子。在結(jié)構(gòu)上它與轉(zhuǎn)錄激活因子6（Activating transcription factor 6,ATF6）相似,具有跨膜結(jié)構(gòu)域,能夠與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)合,且同時具有轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域和bZIP結(jié)構(gòu)域。Luman廣泛表達于動物的多種組織器官,在雌性小鼠的卵巢、輸卵管和子宮中以及雄性小鼠的睪丸間質(zhì)細(xì)胞和精子中均有Luman的表達。研究表明,在雌性小鼠卵巢和子宮中Luman的表達隨著發(fā)情周期呈現(xiàn)規(guī)律性變化,且Luman干擾后雌性小鼠母性下降且產(chǎn)仔數(shù)下降,因此Luman可能在卵巢功能以及早期妊娠過程中起到重要作用。本研究利用RNAi干擾技術(shù),實時熒光定量PCR,western blot,細(xì)胞免疫熒光技術(shù),CCK-8細(xì)胞計數(shù),ELISA和流式細(xì)胞術(shù),對Luman在卵巢和子宮中顆粒細(xì)胞及子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞功能調(diào)節(jié)中的作用進行研究。得到以下結(jié)果:1.設(shè)計3對針對Luman基因的干擾片段,并分別構(gòu)建其慢病毒干擾載體pCD513B-U6-Luman 1、2、3。將3對目的載體分別和包裝質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染2... 

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
文獻綜述
    第一章 卵泡發(fā)育與胚胎附植的調(diào)節(jié)
        1.1 卵泡發(fā)育以及閉鎖的調(diào)節(jié)
            1.1.1 卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)
            1.1.2 卵泡閉鎖的調(diào)節(jié)
        1.2 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化的研究
            1.2.1 胚胎附植
            1.2.2 蛻膜化的調(diào)節(jié)
        1.3 類固醇激素與胚胎附植
            1.3.1 雌激素合成及其調(diào)節(jié)作用
            1.3.2 孕激素合成及其調(diào)節(jié)作用
        1.4 環(huán)境雌激素類似物對雌性動物生殖的影響
            1.4.1 環(huán)境中的雌激素類似物
            1.4.2 雙酚A
            1.4.3 雙酚A對雌性動物生殖的影響
        1.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激研究進展
            1.5.1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激概況
            1.5.2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡反應(yīng)
            1.5.3 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與雌性哺乳動物生殖
        1.6 Luman研究進展
            1.6.1 CREB3蛋白家族
            1.6.2 Luman的功能
            1.6.3 Luman與雌性哺乳動物生殖
試驗研究
    第二章 小鼠Luman基因shRNA慢病毒載體構(gòu)建和病毒包裝
        2.1 材料及儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 方法
            2.2.1 小鼠Luman基因慢病毒載體的構(gòu)建
            2.2.2 shLuman干擾慢病毒的包裝
            2.2.3 shLuman干擾慢病毒滴度測定
            2.2.4 shLuman干擾片段的篩選
        2.3 結(jié)果與分析
            2.3.1 Luman慢病毒干擾載體的鑒定
            2.3.2 shLuman干擾慢病毒包裝
            2.3.3 shLuman干擾慢病毒滴度測定
            2.3.4 shLuman干擾慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)NIH3T3細(xì)胞
            2.3.5 shLuman慢病毒干擾效率篩選
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 干擾Luman對小鼠顆粒細(xì)胞功能的影響
        3.1 材料及儀器
            3.1.1 主要試劑
            3.1.2 主要儀器
            3.1.3 實驗動物
        3.2 方法
            3.2.1 實驗小鼠的超數(shù)排卵
            3.2.2 小鼠顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)
            3.2.3 慢病毒的包裝
            3.2.4 shLuman干擾慢病毒在顆粒細(xì)胞中干擾效率的檢測
            3.2.5 顆粒細(xì)胞全蛋白提取和western blot檢測
            3.2.6 顆粒細(xì)胞RNA提取和RT-qPCR檢測
            3.2.7 細(xì)胞免疫熒光
            3.2.8 ELISA檢測小鼠顆粒細(xì)胞E2和P4的分泌
            3.2.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測顆粒細(xì)胞周期
            3.2.10 流式細(xì)胞術(shù)檢測顆粒細(xì)胞凋亡
        3.3 結(jié)果與分析
            3.3.1 原代小鼠顆粒細(xì)胞的分離培養(yǎng)
            3.3.2 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)小鼠顆粒細(xì)胞效率檢測
            3.3.3 總RNA質(zhì)量鑒定
            3.3.4 shLuman慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒細(xì)胞干擾效率檢測
            3.3.5 干擾Luman對小鼠顆粒細(xì)胞激素分泌以及相關(guān)因子的影響
            3.3.6 干擾Luman對小鼠顆粒細(xì)胞周期以及相關(guān)因子的影響
            3.3.7 干擾Luman對小鼠顆粒細(xì)胞凋亡以及相關(guān)因子的影響
            3.3.8 干擾Luman對小鼠顆粒細(xì)胞功能的影響
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 Luman干擾后小鼠子宮內(nèi)細(xì)胞蛻膜化差異基因的篩選
        4.1 材料及儀器
            4.1.1 主要試劑
            4.1.2 主要儀器
            4.1.3 實驗動物
        4.2 方法
            4.2.1 小鼠合籠處理
            4.2.2 小鼠原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            4.2.3 細(xì)胞免疫熒光檢測
            4.2.4 shLuman慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)原代基質(zhì)細(xì)胞并對其進行體外誘導(dǎo)蛻膜化
            4.2.5 轉(zhuǎn)錄組測序及分析
            4.2.6 Luman直接調(diào)控基因的鑒定
        4.3 結(jié)果與分析
            4.3.1 小鼠原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            4.3.2 小鼠原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞純度鑒定
            4.3.3 小鼠原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的體外誘導(dǎo)蛻膜化
            4.3.4 小鼠原代子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞體外成功誘導(dǎo)蛻膜化的鑒定
            4.3.5 Luman在體外誘導(dǎo)蛻膜化的基質(zhì)細(xì)胞中的表達
            4.3.6 shLuman慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)原代基質(zhì)細(xì)胞干擾效率鑒定
            4.3.7 shLuman慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞對蛻膜化的影響
            4.3.8 干擾Luman,蛻膜基質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組變化
            4.3.9 RNA-seq數(shù)據(jù)的驗證
            4.3.10 干擾Luman對蛻膜化基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的影響
            4.3.11 干擾Luman對基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化功能相關(guān)基因表達的影響
            4.3.12 干擾Luman對蛻膜化基質(zhì)細(xì)胞周期的影響
            4.3.13 Luman對蛻膜化基質(zhì)細(xì)胞作用信號通路分析
            4.3.14 Luman調(diào)控基因的預(yù)測
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 Luman在BPA影響蛻膜細(xì)胞功能變化中的調(diào)節(jié)作用
        5.1 材料及儀器
            5.1.1 主要試劑
            5.1.2 主要儀器
            5.1.3 實驗動物
        5.2 方法
            5.2.1 小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及體外蛻膜誘導(dǎo)
            5.2.2 BPA對小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞活力的影響
            5.2.3 BPA處理蛻膜細(xì)胞
            5.2.4 shLuman慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜細(xì)胞
        5.3 結(jié)果與分析
            5.3.1 BPA對小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜細(xì)胞活力的影響
            5.3.2 BPA對基質(zhì)細(xì)胞增殖的影響
            5.3.3 BPA對蛻膜細(xì)胞功能的影響
            5.3.4 BPA對蛻膜細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的的影響
            5.3.5 BPA對蛻膜細(xì)胞中Luman表達的影響
            5.3.6 Luman干擾效率檢測
            5.3.7 干擾Luman后BPA對蛻膜功能的影響
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點
下一步研究計劃
參考文獻
致謝
作者簡介



本文編號：3723286