大腸埃希氏菌（Escherichia coli,E.coli）是一種革蘭氏陰性細(xì)菌,是人和其他哺乳動物正常腸道菌群的重要組成部分,同時也是一個高度多樣化甚至?xí)䦟?dǎo)致死亡的病原菌,能夠引起一系列疾病。模式識別受體（pattern recognition receptor,PRRs）包括 TOLL 樣受體（Toll-like receptor,TLRs）和 NODE 樣受體（Node-like receptor,NLRs）,在宿主對抗入侵病原體的早期應(yīng)答中識別特定的病原相關(guān)分子模式（Pathogen-associated molecular pattern,PAMPs）或損傷相關(guān)分子模式（Damage-associated molecular pattern,DAMPs）。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁成分脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）能夠激活巨噬細(xì)胞以及樹突狀細(xì)胞等免疫細(xì)胞的TLR4引起宿主炎癥反應(yīng)。大量證據(jù)表明TLR2作為一種PRR在介導(dǎo)多個微生物感染性疾病的發(fā)展過程中發(fā)揮廣泛的病理性作用。TLR2和TLR4在宿主對大腸桿菌感染的應(yīng)答中均發(fā)揮重要作用。NLRP3炎性小體是目前... 

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 大腸埃希氏菌概述
        1.1.1 大腸埃希氏菌的附著力
        1.1.2 大腸埃希氏菌分泌毒素
    1.2 天然免疫識別與免疫調(diào)控的分子機(jī)制研究進(jìn)展
    1.3 Toll樣受體家族
        1.3.1 TLR的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 哺乳動物TLR的配體
        1.3.3 TLR的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.4 TLRs在疾病中的作用
        1.3.5 TLRs的展望和未來前景
    1.4 NOD樣受體
        1.4.1 NLRP3炎性小體的生物學(xué)效應(yīng)
        1.4.2 NLRP3炎性小體的啟動
        1.4.3 翻譯后的NLRP3修飾
        1.4.4 NLRP3炎性小體的激活
        1.4.5 NLRP3活化的守恒元素
        1.4.6 以NLRP3為靶標(biāo)的藥物研究
        1.4.7 NLRP3激動劑用于疫苗和癌癥
        1.4.8 NLRs的展望和未來前景
    1.5 本研究的目的與意義
2 TLR2、TLR4和NLRP3在小鼠腹腔巨噬細(xì)胞感染大腸桿菌過程中的作用研究
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.4 試劑與耗材
        2.1.5 儀器設(shè)備
        2.1.6 溶液配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌種復(fù)蘇與洗滌
        2.2.2 BLP的提純
        2.2.3 小鼠原代腹腔巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.4 LPS、、BLP、E. coli DH5α及E. coli JE5505刺激WT、 TLR2~(-/-)和TLR4~(-/-)巨噬細(xì)胞后NLRP3的表達(dá)
        2.2.5 TLR2、TLR4和NLRP3對大腸桿菌感染的小鼠巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)的影響的研究
        2.2.6 TLR2、TLR4和NLRP3對大腸桿菌感染的小鼠巨噬細(xì)胞MAPK、NF-κ B及caspase-1信號通路激活的影響的研究
        2.2.7 TLR2、TLR4、NLRP3對大腸桿菌感染的小鼠巨噬細(xì)胞COX-2表達(dá)的影響研究
        2.2.8 NLRP3對巨噬細(xì)胞吞噬大腸桿菌作用的影響
        2.2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 細(xì)菌毒素和大腸桿菌感染對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中NLRP3表達(dá)的影響
        2.3.2 TLR2、TLR4和NLRP3對炎性刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中相關(guān)因子表達(dá)的影響
        2.3.3 TLR2、TLR4和NLRP3對炎性刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中MAPK和NF-κ B信號通路的影響
        2.3.4 TLR2、TLR4和NLRP3對炎性刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中caspase-1信號通路激活的影響
        2.3.5 TLR2、TLR4和NLRP3對炎性刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中COX-2的表達(dá)的影響
        2.3.6 NLRP3對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞殺傷E.coli過程的影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 TLR2、TLR4和NLRP3在小鼠感染大腸桿菌過程中作用的研究
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑和耗材
        3.1.5 儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 菌種復(fù)蘇與洗滌
        3.2.2 BLP的提純
        3.2.3 TLR2、TLR4和NLRP3對大腸桿菌感染的小鼠血清中細(xì)胞因子表達(dá)的影響的研究
        3.2.4 TLR2、TLR4和NLRP3對大腸桿菌感染的小鼠肝臟組織中HMGB1基因表達(dá)的影響研究
        3.2.5 免疫熒光法檢測TLR2、TLR4和NLRP3對大腸桿菌感染的小鼠肝臟組織中HMGB1蛋白表達(dá)的影響研究
        3.2.6 檢測AST和ALT在大腸桿菌感染的小鼠血清中的含量
        3.2.7 檢測大腸桿菌感染的小鼠肝臟組織損傷程度
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 TLR2、TLR4和NLRP3對炎性刺激小鼠血清中相關(guān)因子表達(dá)的影響
        3.3.2 TLR2、TLR4和NLRP3對炎性刺激小鼠肝臟中HMGB1的表達(dá)的影響
        3.3.3 TLR2、TLR4和NLRP3對E. coli感染小鼠肝臟損傷過程的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 全文討論
5 結(jié)論
6 本課題主要創(chuàng)新之處
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號：3723225