發(fā)布時(shí)間：2022-07-07 12:30

　　金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl.）為蘭科石斛屬（Dendrobium）珍稀藥用植物,早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載,為中國(guó)瀕危物種,具有滋陰生津、潤(rùn)肺明目、抗癌防老等功效。近年來,由于金釵石斛的大規(guī)模開發(fā)利用,致使其野生資源遭到毀滅性的破壞,并導(dǎo)致了金釵石斛混淆品的泛濫。因此,務(wù)須加強(qiáng)對(duì)金釵石斛野生資源種質(zhì)的研究與保護(hù),并建立有效的金釵石斛種質(zhì)鑒別的可靠手段。本論文開展了金釵石斛的種質(zhì)保存工作。發(fā)明了一種提高金釵石斛傳粉結(jié)實(shí)率的方法及專用處理劑,申請(qǐng)了專利。專用處理劑為含有Ca（NO3）2、H3BO3、蔗糖、尿素、赤霉素及2,4-D的水溶液。主要流程包括：親本選取、對(duì)傳粉時(shí)間的選取、人工傳粉、套袋處理、金釵石斛種子的收集、無激素的組織培養(yǎng)。上述一種提高金釵石斛傳粉結(jié)實(shí)率的方法及專用處理劑可以明顯提高金釵石斛的結(jié)實(shí)成功率,提高種子產(chǎn)量,而且操作簡(jiǎn)便,易于掌握,可以在大規(guī)模人工育種中推廣應(yīng)用。本論文采用磁珠富集法對(duì)金釵石斛微衛(wèi)星進(jìn)行了開發(fā)。共設(shè)計(jì)了53對(duì)微衛(wèi)星引物,利用云南、貴州和廣西3省4個(gè)居群的45個(gè)樣本,篩選了10對(duì)多態(tài)性位點(diǎn)豐富的引物。分析表明：這10對(duì)微衛(wèi)... 

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 藥用植物的分子鑒定
    1.2 遺傳多樣性
        1.2.1 遺傳多樣性的概念
        1.2.2 影響遺傳多樣性的因素
        1.2.3 遺傳多樣性的研究方法
    1.3 葉綠體基因組的研究進(jìn)展
    1.4 石斛屬的遺傳學(xué)研究進(jìn)展
        1.4.1 石斛屬的概況
        1.4.2 石斛屬種質(zhì)保護(hù)的遺傳學(xué)研究
        1.4.3 石斛屬植物種質(zhì)保護(hù)面臨的挑戰(zhàn)
    1.5 金釵石斛的研究現(xiàn)狀
    1.6 研究的目的與意義
第2章 金釵石斛的種質(zhì)保存
    2.1 材料和方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 結(jié)果和分析
        2.2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)
        2.2.2 交實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)
        2.2.3 組織培養(yǎng)
    2.3 討論
        2.3.1 各因素水平對(duì)金釵石斛結(jié)實(shí)率的影響
        2.3.2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)在金釵石斛結(jié)實(shí)率提高中的應(yīng)用
        2.3.3 種質(zhì)保存的意義
第3章 金釵石斛野生居群的遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料與保存
        3.2.2 微衛(wèi)星數(shù)據(jù)的獲取及質(zhì)量控制
        3.2.3 遺傳多樣性分析
        3.2.4 居群遺傳結(jié)構(gòu)分析
        3.2.5 離隔離格局檢驗(yàn)
        3.2.6 瓶頸效應(yīng)及遺傳障礙檢測(cè)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 居群遺傳多樣性
        3.3.2 居群的遺傳結(jié)構(gòu)
        3.3.3 基因流
        3.3.4 瓶頸效應(yīng)和奠基者效應(yīng)
    3.4 討論
        3.4.1 遺傳多樣性以及居群結(jié)構(gòu)
        3.4.2 最近的統(tǒng)計(jì)事件
        3.4.3 金釵石斛保護(hù)和管理策略
第4章 金釵石斛葉綠體比較基因組學(xué)研究
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 DNA的提取和純化
        4.2.3 測(cè)序文庫的構(gòu)建、序列的組裝
        4.2.4 基因標(biāo)注
        4.2.5 金釵石斛葉綠體基因組提交至DDBJ
        4.2.6 金釵石斛葉綠體基因組的比較
        4.2.7 金釵石斛cpSSR的開發(fā)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 金釵石斛的測(cè)序結(jié)果
        4.3.2 金釵石斛的葉綠體基因組結(jié)構(gòu)分析
        4.3.3 金釵石斛葉綠體基因組的比較分析
        4.3.4 金釵石斛的cpSSR
    4.4 討論
        4.4.1 葉綠體比較基因組學(xué)在蘭科植物中的應(yīng)用
        4.4.2 石斛屬比較基因組的應(yīng)用前景
第5章 基于葉綠體基因組片段和real-time PCR技術(shù)鑒別金釵石斛藥材
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 樣本的采集與保存
        5.2.2 方法
            5.2.2.1 DNA提取
            5.2.2.2 ycf1和trnL-trnF序列的獲得
            5.2.2.3 系統(tǒng)發(fā)生分析與特異性位點(diǎn)的獲得
            5.2.2.4 葉綠體片段預(yù)擴(kuò)增體系及反應(yīng)條件
            5.2.2.5 基于SYBR Green Ⅰ的real-time PCR擴(kuò)增體系及反應(yīng)條件
    5.3 結(jié)果和分析
        5.3.1 ycf1和trnL-trnF序列
        5.3.2 鑒定金釵石斛的特異性位點(diǎn)
    5.4 討論
        5.4.1 real-time PCR技術(shù)與種質(zhì)鑒別
        5.4.2 葉綠體基因組片段在real-time PCR技術(shù)中的應(yīng)用
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]等滲NaCl和Ca（NO3）2脅迫對(duì)黃瓜幼苗生長(zhǎng)和生理特性的影響[J]. 周珩,郭世榮,邵慧娟,陳新斌,魏斌,胡榮,姜冬晨,鄭智航,孫錦.  生態(tài)學(xué)報(bào). 2014(07)
[2]16S rRNA基因序列分析法鑒定病原細(xì)菌[J]. 朱飛舟,陳利玉,陳漢春.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(10)
[3]應(yīng)用正交實(shí)驗(yàn)法研究瀕危中藥白及成苗因子[J]. 房慧勇,李旻輝,堯建勛,史琳,賈彩鳳,趙清.  醫(yī)學(xué)研究與教育. 2012(04)
[4]金釵石斛莖的化學(xué)成分研究[J]. 汪代芳,侴桂新,趙寧毅,張婷,徐紅.  中草藥. 2012(08)
[5]TaqMan探針與SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物外源基因拷貝數(shù)的差異分析[J]. 李敏,汪洋,張銀萍,李娟,陳學(xué)平.  安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(04)
[6]六種杜鵑花屬植物花粉活力測(cè)定方法的比較研究[J]. 張超儀,耿興敏.  植物科學(xué)學(xué)報(bào). 2012(01)
[7]中國(guó)國(guó)家級(jí)濕地自然保護(hù)區(qū)保護(hù)成效初步評(píng)估[J]. 鄭姚閩,張海英,牛振國(guó),宮鵬.  科學(xué)通報(bào). 2012(04)
[8]SSR分子標(biāo)記技術(shù)在生物遺傳學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用[J]. 楊文柱,焦燕.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(02)
[9]川滇地區(qū)麻瘋樹遺傳多樣性及親緣關(guān)系的cpSSR研究[J]. 蒲光蘭,周蘭英,向倩,馬永志.  中國(guó)中藥雜志. 2012(01)
[10]人工授粉對(duì)火龍果果實(shí)發(fā)育的影響[J]. 梁桂東,胡子有,李立志,唐志鵬,鄧儉英,Sommay CHANTHAVILATH.  廣西植物. 2011(06)

博士論文
[1]鐵皮石斛種質(zhì)資源的鑒定與評(píng)價(jià)研究[D]. 包英華.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[2]中國(guó)特有瀕危植物明黨參的保護(hù)生物學(xué)研究[D]. 邱英雄.浙江大學(xué) 2003

碩士論文
[1]溪黃草藥材HPLC指紋圖譜鑒別與質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[D]. 朱德全.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2013
[2]杉科五種植物染色體核型分析[D]. 熊海燕.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]金釵、鐵皮、馬鞭、鼓槌、迭鞘五種不同基源石斛的藥效學(xué)評(píng)價(jià)研究[D]. 朱麗娜.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2012
[4]金釵石斛化學(xué)成分和降血糖作用初步研究[D]. 蔡偉.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2011



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