獺兔是著名的裘皮用兔,主要產(chǎn)品是獺兔皮,具有重要的經(jīng)濟價值。被毛密度是評定獺兔皮張質量的重要指標之一。近年來,如何提高獺兔皮張質量中的被毛密度成為獺兔研究中的熱點。被毛由毛囊生成,毛囊是皮膚附屬器官,由表皮和真皮相互作用形成,能夠控制被毛生長,且具有獨特的生理結構和周期性生長的特性。毛囊的形成與分化過程中,有毛乳頭、毛母質、內(nèi)根鞘、外根鞘等20多種不同類型的細胞參與。毛乳頭細胞是動物皮膚中的一類特異化的間充質來源的細胞,在毛囊周期生長變化過程中發(fā)揮重要調控作用,是整個毛囊中直接參與毛囊周期生長調控的關鍵組分。miRNA是大小約為20²4個核苷酸的一類非編碼小分子RNA,近年的研究報道m(xù)iRNA在小鼠、大鼠、山羊和綿羊等多種哺乳動物毛囊形態(tài)發(fā)生,毛囊干細胞增殖分化和凋亡中發(fā)揮了重要的調控作用。本課題首先對獺兔皮膚毛乳頭細胞進行分離培養(yǎng)鑒定,然后對不同被毛密度獺兔毛乳頭細胞進行差異表達的miRNA篩選,最后對維生素B6通過miRNA調控獺兔毛囊發(fā)育作用機制進行研究,以期為提高獺兔皮張質量提供新的思路和線索。研究的主要內(nèi)容如下:1.獺兔皮膚毛乳頭細胞的分離培養(yǎng)及鑒定選取... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：169 頁

【學位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 獺兔生產(chǎn)現(xiàn)狀及皮張質量評定
        1.1.1 獺兔生產(chǎn)現(xiàn)狀
        1.1.2 獺兔皮張質量評定
    1.2 毛乳頭細胞在毛囊發(fā)育中作用
        1.2.1 皮膚毛囊結構及功能
        1.2.2 毛乳頭細胞與毛囊發(fā)育
        1.2.3 毛乳頭細胞與毛囊周期性生長
    1.3 毛囊體外培養(yǎng)的研究模型及研究現(xiàn)狀
        1.3.1 毛囊體外培養(yǎng)的研究模型
        1.3.2 毛囊體外培養(yǎng)的研究現(xiàn)狀
    1.4 毛乳頭細胞分離培養(yǎng)及鑒定
        1.4.1 毛乳頭細胞分離培養(yǎng)
        1.4.2 毛乳頭細胞鑒定方法
    1.5 小RNA研究概述
        1.5.1 miRNA生物合成
        1.5.2 miRNA生物學功能
        1.5.3 miRNA在動物毛囊發(fā)育中的研究現(xiàn)狀
    1.6 維生素B6 的生物學作用及在動物生產(chǎn)上研究進展
        1.6.1 維生素B6 的生物學作用
        1.6.2 維生素B6 在動物生產(chǎn)上研究進展
    1.7 課題目的意義
2 材料與方法
    2.1 試驗設計
        2.1.1 獺兔皮膚毛乳頭細胞分離培養(yǎng)與鑒定
        2.1.2 不同被毛密度獺兔毛乳頭細胞差異miRNA篩選
        2.1.3 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞影響的研究
        2.1.4 ocu-miR-205 對獺兔皮膚組織影響的研究
        2.1.5 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞影響的研究
        2.1.6 維生素B6 對獺兔毛囊毛干生長影響的研究
        2.1.7 維生素B6 對獺兔生產(chǎn)性能及毛囊發(fā)育影響的研究
    2.2 試驗材料
        2.2.1 主要試劑耗材
        2.2.2 主要儀器參數(shù)
        2.2.3 主要數(shù)據(jù)庫及分析軟件
        2.2.4 熒光定量PCR引物序列
    2.3 試驗方法
        2.3.1 獺兔毛乳頭細胞分離培養(yǎng)鑒定方法
        2.3.2 小RNA文庫構建及測序分析方法
        2.3.3 ocu-miR-205 過表達及干擾表達腺病毒載體構建生產(chǎn)及轉染方法
        2.3.4 獺兔毛乳頭細胞的細胞增殖、周期和凋亡的測定方法
        2.3.5 獺兔觸須毛囊分離培養(yǎng)方法
        2.3.6 獺兔生產(chǎn)性能指標測定方法
        2.3.7 獺兔皮膚毛囊密度測定方法
        2.3.8 獺兔毛囊發(fā)育基因及miRNA表達量測定方法
        2.3.9 獺兔毛囊發(fā)育蛋白表達量測定方法
    2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計
3 結果與分析
    3.1 獺兔皮膚毛乳頭細胞分離培養(yǎng)及鑒定
        3.1.1 形態(tài)學觀察
        3.1.2 姬姆薩染色
        3.1.3 特異標記物表達
        3.1.4 毛乳頭細胞生長曲線繪制
        3.1.5 不同代次毛乳頭細胞增殖特性變化
        3.1.6 不同代次毛乳頭細胞周期性變化
        3.1.7 毛乳頭細胞凍存及復蘇能力
    3.2 不同被毛密度獺兔皮膚毛囊密度統(tǒng)計及毛乳頭細胞RNA質量檢測
        3.2.1 不同被毛密度獺兔皮膚毛囊密度統(tǒng)計結果
        3.2.2 不同被毛密度獺兔毛乳頭細胞RNA質量檢測結果
    3.3 不同被毛密度獺兔毛乳頭細胞小RNA測序結果
        3.3.1 測序數(shù)據(jù)過濾
        3.3.2 小RNA分類注釋
        3.3.3 小RNA表達分析
        3.3.4 差異表達小RNA篩選
        3.3.5 差異表達miRNA層次聚類
        3.3.6 miRNA靶基因預測
        3.3.7 差異表達miRNA靶基因富集分析
    3.4 不同被毛密度獺兔毛乳頭細胞ocu-miR-205 測序結果
        3.4.1 ocu-miR-205 序列及結構信息
        3.4.2 ocu-miR-205 在不同被毛密度獺兔毛乳頭細胞中的表達
        3.4.3 ocu-miR-205-5p在獺兔不同組織中的表達
    3.5 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞影響的研究
        3.5.1 ocu-miR-205 轉染獺兔毛乳頭細胞效果觀察
        3.5.2 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞細胞增殖的影響
        3.5.3 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞細胞周期的影響
        3.5.4 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞細胞凋亡的影響
        3.5.5 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞細胞周期及凋亡基因表達的影響
        3.5.6 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞毛囊發(fā)育相關基因表達的影響
        3.5.7 ocu-miR-205 對獺兔毛乳頭細胞毛囊發(fā)育相關蛋白表達的影響
    3.6 ocu-miR-205 對獺兔皮膚組織影響的研究
        3.6.1 ocu-miR-205 轉染獺兔皮膚組織效果觀察
        3.6.2 ocu-miR-205 對獺兔皮膚毛囊發(fā)育相關基因表達的影響
        3.6.3 ocu-miR-205 對獺兔皮膚毛囊發(fā)育相關蛋白表達的影響
        3.6.4 ocu-miR-205 對獺兔毛囊密度的影響
    3.7 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞影響的研究
        3.7.1 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞細胞增殖的影響
        3.7.2 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞細胞周期的影響
        3.7.3 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞細胞凋亡的影響
        3.7.4 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞細胞增殖及凋亡基因表達的影響
        3.7.5 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞ocu-miR-205-5p表達的影響
        3.7.6 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞毛囊發(fā)育相關基因表達的影響
        3.7.7 維生素B6 對獺兔毛乳頭細胞毛囊發(fā)育相關蛋白表達的影響
    3.8 維生素B6 對獺兔毛囊毛干生長的影響
    3.9 維生素B6 對獺兔生產(chǎn)性能及毛囊發(fā)育的影響
        3.9.1 維生素B6 對獺兔生長性能的影響
        3.9.2 維生素B6 對獺兔屠宰性能的影響
        3.9.3 維生素B6 對獺兔皮張質量的影響
        3.9.4 維生素B6 對獺兔皮膚毛囊密度的影響
        3.9.5 維生素B6 對獺兔皮膚ocu-miR-205-5p表達的影響
        3.9.6 維生素B6 對獺兔皮膚毛囊發(fā)育相關基因表達的影響
        3.9.7 維生素B6 對獺兔皮膚毛囊發(fā)育相關蛋白表達的影響
4 討論
    4.1 毛乳頭細胞分離培養(yǎng)及形態(tài)特征
        4.1.1 毛乳頭細胞分離培養(yǎng)
        4.1.2 毛乳頭細胞形態(tài)特征
    4.2 miRNA通過信號通路參與毛囊發(fā)育的分子機制
        4.2.1 miRNA通過Wnt信號通路參與毛囊發(fā)育
        4.2.2 miRNA通過Notch信號通路參與毛囊發(fā)育
        4.2.3 miRNA通過BMP信號通路參與毛囊發(fā)育
    4.3 miRNA通過細胞因子參與毛囊發(fā)育的分子機制
    4.4 miR-205 參與動物毛囊發(fā)育的分子機制
    4.5 維生素B6 對獺兔毛囊毛干生長的影響分析
    4.6 維生素B6 對獺兔生產(chǎn)性能影響機制的分析
        4.6.1 維生素B6 對獺兔生長性能影響機制的分析
        4.6.2 維生素B6 對獺兔屠宰性能影響機制的分析
        4.6.3 維生素B6 對獺兔皮張質量影響機制的分析
        4.6.4 維生素B6 對獺兔被毛密度影響機制的分析
5 結論
6 參考文獻
7 附錄
8 致謝
基金資助
9 攻讀博士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]長毛兔毛乳頭細胞的分離培養(yǎng)及生長特性研究[J]. 白莉雅,孫海濤,呼紅梅,楊麗萍,高淑霞,姜文學.  家畜生態(tài)學報. 2017(10)
[2]不同代次人胎盤間充質干細胞的生物活性比較研究[J]. 章毅,許惠利,王鋒,王哲,李春麗,陳亮.  中國醫(yī)藥生物技術. 2016(05)
[3]維生素B6與畜禽蛋白質代謝[J]. 黨曉鵬.  江西飼料. 2016(01)
[4]飼糧維生素B6添加水平對3～5月齡生長獺兔消化代謝和抗氧化性能的影響[J]. 劉公言,孫超然,尚隨民,吳振宇,王春陽,李福昌.  動物營養(yǎng)學報. 2015(11)
[5]飼糧泛酸添加水平對3～5月齡獺兔生產(chǎn)性能和抗氧化功能的影響[J]. 趙楠,劉公言,劉磊,朱巖麗,李福昌.  動物營養(yǎng)學報. 2015(08)
[6]飼糧維生素B6添加水平對生長獺兔生長性能及維生素B6代謝的影響[J]. 劉公言,趙楠,朱巖麗,劉磊,梁才芝,李福昌.  動物營養(yǎng)學報. 2015(07)
[7]飼糧核黃素添加水平對生長獺兔生長性能、毛皮質量、血液指標及抗氧化功能的影響[J]. 鄭琛,李春燕,隋嘯一,趙楠,劉公言,李福昌.  動物營養(yǎng)學報. 2015(03)
[8]飼糧煙酸添加水平對生長獺兔生長性能、毛皮品質、血脂代謝及血清抗氧化指標的影響[J]. 李春燕,鄭琛,隋嘯一,趙楠,劉公言,李福昌.  動物營養(yǎng)學報. 2015(03)
[9]不同被毛密度獺兔皮膚差異表達基因的研究[J]. 李冰,李福昌,朱巖麗,王雪鵬,王春陽.  畜牧獸醫(yī)學報. 2014(10)
[10]miR-let7a及其靶基因IGF-1R在絨山羊毛囊發(fā)育周期中的表達[J]. 江倩,李建平,曲海娥,姜懷志,張巧靈.  中國獸醫(yī)學報. 2014(10)

博士論文
[1]藏綿羊毛囊不同發(fā)育時期miRNAs表達變化研究[D]. 唐曉惠.華中農(nóng)業(yè)大學 2012
[2]大黃魚、鱸魚主要B族維生素和礦物質—磷的營養(yǎng)生理研究[D]. 張春曉.中國海洋大學 2006

碩士論文
[1]FGF10和Spry4基因的克隆及其在綿羊皮膚中的表達[D]. 袁楓.新疆農(nóng)業(yè)大學 2015
[2]MiR-125b在細毛羊與絨山羊皮膚組織中差異表達及其靶基因的篩選與鑒定[D]. 曲海娥.吉林大學 2014
[3]維生素C和B6對皺紋盤鮑（Haliotis discus hannai Ino）代謝反應和貝殼生物礦化影響的研究[D]. 馮秀妮.中國海洋大學 2005
[4]內(nèi)蒙古白絨山羊皮膚毛囊活性的變化規(guī)律及生長激素受體在毛囊中的定位研究[D]. 張焱如.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2001



本文編號：3638004