稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）是研究植物與病原菌相互作用的重要模式病原真菌,由其引起的稻瘟病是一種世界性的病害。Mps1位于稻瘟病菌MoMck1-MoMkk1-Mps1 MAPK信號(hào)通路的最下游,是稻瘟病菌附著胞侵入和擴(kuò)展所必需的,通過磷酸化作用來調(diào)控稻瘟病菌的致病性。Mps1通過與其上游的激酶激酶MoMKK1和磷酸酶Pmp1的相互作用來調(diào)節(jié)其磷酸化水平。目前,Mps1及其在其他真菌中同源蛋白質(zhì)的三維空間結(jié)構(gòu)尚未見報(bào)道,且與上游激酶激酶和磷酸酶之間相互作用的機(jī)制及其調(diào)控磷酸化作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)均不清楚。為此,作者開展了與Mps1相關(guān)的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究,主要取得了以下結(jié)果:1.開展了 Mps1目標(biāo)蛋白質(zhì)的重組表達(dá)與純化,制備了純度較高、穩(wěn)定性較好、狀態(tài)較為均一的目標(biāo)蛋白質(zhì)樣品:采用座滴式氣相擴(kuò)散法對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行了晶體生長條件的篩選與優(yōu)化,獲得了大小合適、可用于衍射的Mps1蛋白質(zhì)晶體;通過X-射線衍射收到了高分辨率的蛋白質(zhì)晶體衍射數(shù)據(jù),并以同源蛋白質(zhì)（ERK2）的結(jié)構(gòu)為模板采用分子置換的方法得到了分辨率為1.99 A的Mps1蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)。2.通過分析Mps1的蛋白質(zhì)晶體... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：138 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【圖文】：

圖１－Ｉ稻瘟病菌的侵染循環(huán)（Ｄｅａｎ扣ａ／．，?２０１２）??Ｆｉｇ．?１－１?Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｉｃｅ?ｂｌａｓｔ?ｆｕｎｇｕｓ?（Ｄｅａｎ?ｅｔ?ａ／．，?２０１２）??在真核生物體內(nèi)普遍存在ＭＡＰＫ信號(hào)通路，它主要是通過對(duì)蛋白質(zhì)激酶中的絲氨酸（Ｓｅｒｉｎｅ，??Ｓｅｒ／Ｓ）或蘇氨酸（Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ，Ｔｈｒ／Ｔ）?／酪氨酸（Ｔｙｒｏｓｉｎｅ，?Ｔｙｒ／Ｙ）等磷酸化位點(diǎn)的磷酸化作用，??．

）??會(huì)甲＋Ｐ?？?＾?＾??（ＰＫＡ）?（＾）?（ｇ）＠）??Ａｃｔｉｎ?＾（＠）?＼?／??ＪＴ?Ｉ?ＣｅＨＰＣａｍｙ?｜?（ｇ）??？（Ｓｔｅ？）?（ｓｗ）?（Ｍｋｋｌ）＾Ｓ）??Ｉ?＾?１??Ｖｊ？〇?＾?ｏ??＾＾??Ｉ?士士士?士??Ｍａｔｉｎｇ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ?Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ?ｇｒｏｗｔｈ?Ｃｅｌｌ?ｗａｌｌ?ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ?Ｃｅｌｌ?ｃｙｃｌｅ?Ｏｓｍｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ??Ｓｔｒｅｓｓ?ｒｅｓｐｏｎｓｅ??圖１－３釀酒酵母中的ＭＡＰＫ信號(hào)通路（Ｑｉ＾ｆｌ／．，２００５）??圖中所有Ｓ．ｃｅｒｅＷ如ｅ屮的ＭＡＰＫ信號(hào)通路均通過遺傳學(xué)角度進(jìn)行了鑒定；盡管不同信號(hào)通路中存在？些共同的信號(hào)元件，但是其??在調(diào)控過程中卻不會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤。??Ｆｉｇ．?１－３?ＭＡＰ?ｋｉｎａｓｅ?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｉｎ?Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ?ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ?（Ｑｉ?ｅｔ?ａｌ．，?２００５）??Ａｌｌ?Ｓ．?ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ?ＭＡＰ?ｋｉｎａｓｅ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｗｅｒｅ?ｄｅｆｉｎｅｄ?ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ．?Ａｌｔｈｏｕｇｈ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?ａｒｅ?ｓｈａｒｅｄ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐａｔｈｗａｙｓ，?ｅｒｒｏｎｅｏｕｓ??ｃｒｏｓｓｔａｌｋ?ｄｏｅｓ?ｎｏｔ?ｏｃｃｕｒ．??１．２蛋白質(zhì)激酶磷酸化的機(jī)制及其調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)聚集狀態(tài)與活性的機(jī)理??蛋白質(zhì)激酶是胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要參與者，絕大多數(shù)的蛋白質(zhì)激酶主要是通過可逆的磷酸化??作用在細(xì)胞中通過催化蘇氨酸或酪氨酸、絲氨酸殘基來調(diào)節(jié)胞內(nèi)信號(hào)，進(jìn)而影響或調(diào)控相應(yīng)的功??能（

質(zhì)在含有較高咪唑濃度的緩沖液（２０?ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０?ｍＭ?ＮａＣｌ，?２００?ｍＭ咪??挫；２０ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０ｍＭ?ＮａＣｌ，?３００ｍＭ?咪唑：２０ｍＭ?ＰＢＳ，?１５０ｍＭＮａＣｌ，?５００ｍＭ?咪唑）中??能夠洗脫下來，且在?２０?ｍＭ?ＰＢＳ、１５０?ｍＭ?ＮａＣｌ、２００?ｍＭ?咪唑和?２０?ｍＭ?ＰＢＳ、１５０ｍＭ?ＮａＣｌ、??３００?ｍＭ咪唑緩沖液中能夠獲得大量的目標(biāo)蛋白質(zhì)樣品，即通過親和層析技術(shù)可以獲得純度較高、??穩(wěn)定性較好的Ｍｐｓ?１目標(biāo)蛋白質(zhì)樣品（圖３－２）。??對(duì)照?ｉ秀導(dǎo)上消沉淀穿出?丨丨ｒｋｃｒ?２（丨?４０?“?（丨?２（Ｍ＞?川（丨?５００?ｋｌ）？??■Ｕｓ?龜二?－??—??著?一２？??零??圖３－２稻瘟病菌Ｍｐｓｌ親和層析后的１５％?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ檢測膠圖??Ｆｉｇ．?３－２?１５％?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?Ｍｐｓｌ?ａｆｔｅｒ?ａｆｆｉｎｉｔｙ??ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ??４５??

【參考文獻(xiàn)】：
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