繁殖障礙性疾病對奶牛生產造成巨大損失,盡早診斷妊娠狀況能夠有效避免奶牛生產過程中的無效飼養(yǎng)、繁殖周期延長等問題。因此,探索奶牛正常妊娠相關的分子標記物對進一步理解母胎免疫耐受機制,指導奶牛實際生產具有非常重要的意義。由于絕大多數細胞均能夠分泌外泌體,并且其分泌量和內容物（核酸、蛋白質和脂質等）在正常及病理狀態(tài)下會存在顯著差異,因此外泌體備受科研工作者關注�；谕饷隗w的分子診斷技術被認為是一項非常有前景的新型疾病診療手段。哺乳動物（包括人）妊娠期間大量胎盤源外泌體差異性攜帶miRNA進入母體血液循環(huán),構成母體血液循環(huán)中外泌體主要成分,研究這些差異分揀的miRNA或可反映妊娠進展和胎兒的生長發(fā)育情況。此外,外泌體miRNA也可能參與調節(jié)哺乳動物妊娠期間胎兒免疫耐受的機制,但是其在奶牛妊娠過程中的功能研究鮮有報道。本文以不同妊娠時期荷斯坦奶牛為研究對象,運用高通量測序技術比較未孕（gestational day,G_D 0）以及正常妊娠早期（G_D 60）、中期（G_D150）和晚期（G_D 240）奶牛外周血漿... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

外泌體的鑒定

華中農業(yè)大學2020屆博士研究生學位（畢業(yè)）論文52圖5-2妊娠早期（G_D60），中期（G_D150）和晚期（G_D240）奶牛妊娠外泌體miRNAs差異分析。a.miRNA熱圖分析，紅色和綠色分別表示上調和下調表達；b.組間miRNA維恩圖。Fig.5-2DifferentialabundanceofmiRNAsinexosomesisolatedfromdairycowsduringearly(G_D60),mid(G_D150)andlatepregnancy(G_D240).a.HeatmapofthedifferentialabundanceofmiRNAs,Redandgreencolorsindicateup-anddownregulatedtranscripts,respectively;b.VenndiagramofthenumberofmiRNAsbetweengroups.表5-1妊娠各個時期顯著富集的外泌體miRNAsTable5-1ThespecificexosomalmiRNAsduringeachpregnantstageb

華中農業(yè)大學2020屆博士研究生學位（畢業(yè)）論文84表明，bta-miR-499可能是妊娠早期外泌體中調節(jié)子宮局部免疫微環(huán)境的關鍵因子。圖5-3奶牛早期妊娠外泌體對TNF-α和IL-6表達的影響。a.外泌體攝取實驗。PKH-67標記外泌體后與BEND細胞孵育，激光共聚焦顯微鏡觀察；綠色熒光：PKH-67標記的外泌體，藍色：BEND細胞核；b.qPCR檢測外泌體孵育后BEND細胞TNF-α和IL-6表達，GAPDH為內參；c.qPCR檢測奶牛未孕和妊娠早期血漿外泌體中bta-miR-499富集水平，U6為內參。結果以均數±標準差表示，和對照組相比，#P<0.05，##P<0.01；和LPS組相比，*P<0.05，**P<0.01。Fig.5-3Theeffectofp-EXOorn-EXOontheexpressionofTNF-αandIL-6.a.p-EXOwaslabeledbyPKH67(green),incubatedwithBENDcells,andthenobservedbyconfocalmicroscopy,cellnuclei(blue),exosomes(green);b.Theeffectofp-EXOorn-EXOonthemRNAlevelsoftheproinflammatorycytokinesTNF-αandIL-6;GAPDHwasusedastheinternalcontrol;c.Exosomalbta-miR-499levelswereanalyzedbyqPCR;U6wasusedastheinternalcontrol.G_D0andG_D60representedunpregnantandearlypregnantdairycows,respectively.Thevalueswerepresentedasmean±S.E.M.,#P<0.05,##P<0.01vs.Control;*P<0.05,**P<0.01vs.LPS.


本文編號：3568804