水泡性口炎（Vesicular stomatitis）是一種由水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus,VSV）感染引起的牛、馬、豬等多種動物和人以口炎為主要特征的人獸共患性傳染病。臨床特征表現(xiàn)為唇、舌、牙齦、乳頭、蹄匣等部位出現(xiàn)水泡或潰瘍。由于VSV在許多國家的流行蔓延造成世界肉類市場的混亂,同時使感染動物（如豬和牛）的生產(chǎn)能力下降而造成嚴重的經(jīng)濟損失。因此,該病對養(yǎng)殖業(yè)的潛在危害不容忽視,被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須通報的動物疫病。病毒感染是對人類威脅最大的病原微生物感染性疾病之一,天然免疫系統(tǒng)作為防御病原微生物感染的第一道防線,在抵御病毒感染的過程中發(fā)揮著極為重要的作用。而許多病毒在進化過程中產(chǎn)生抑制或逃逸宿主抗病毒反應的能力,大量的研究證實,水泡性口炎病毒基質(zhì)（M）蛋白可以通過抑制宿主細胞轉(zhuǎn)錄、細胞mRNA由胞核向胞漿的轉(zhuǎn)運、宿主蛋白的翻譯等方式抑制宿主抗病毒蛋白的表達,從而阻斷宿主的抗病毒反應以利于自身復制。其中有關M蛋白抑制細胞mRNA由胞核向胞漿的轉(zhuǎn)運以及宿主細胞蛋白翻譯的機制已有大量的研究報道,而M蛋白抑制宿主細胞轉(zhuǎn)錄的機制鮮有研究。... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

PCR擴增Flag-M、T7-IRES以及T7-IRES-Flag-M序列電泳圖

第二篇 研究內(nèi)容 第一章 VSV 及 M 蛋白對 BSR-T7/5 細胞轉(zhuǎn)錄抑制的研究白真核表達載體的構(gòu)建及優(yōu)化由于可以抑制宿主基因和自身的表達，因此常用的真核表達表達出 M 蛋白。為了克服上述問題，我們選用 T7 表達系統(tǒng)來將 T7 表達系統(tǒng)不同元件組合，構(gòu)建出 pT-M1、pT-M2、pT-體，通過將這三個真核表達載體轉(zhuǎn)染 BSR-T7/5 細胞后通過 M 蛋白的表達情況，如圖 1.2 所示，pT-M1 未能夠成功的表2 雖有少量的表達但不能滿足后續(xù)試驗的要求。將 pT-M2 進T-M3，該優(yōu)化步驟顯著的提升了 M 蛋白的表達量。因此該質(zhì)并進一步命名為 pT-M（圖 1.2）。

Real-time PCR 檢測 VSV 對宿主細胞的轉(zhuǎn)錄抑驗獨立重復 3 次，n=3, *** p<0.01，n.s.:差異re 1.3 Detection the inhibitory effect on transc VSV using Real-time PCR. The data were averaent experiments. （n=3, *** p<0.01，n.s., no si制 BSR-T7/5 細胞的轉(zhuǎn)錄確定 VSV-M 蛋白是否也可以抑制 BSR-T7/5 ciferase 和 pT-M 質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染細胞，于轉(zhuǎn)染后總 RNA,反轉(zhuǎn)錄后以 GAPDH 為內(nèi)參，通過 qP用 spss 軟件中的獨立樣本 T 檢驗分析數(shù)據(jù)，結(jié) 4h 顯著的抑制了 luciferase 基因的轉(zhuǎn)錄。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]The nucleocapsid of vesicular stomatitis virus[J]. LUO Ming Department of Microbiology, the University of Alabama at Birmingham, Birmingham 35294, USA.  Science China（Life Sciences）. 2012(04)



本文編號：3568917