水貂是世界上最重要的毛皮動(dòng)物品種。水貂養(yǎng)殖廣泛分布于北美、北歐、俄羅斯、阿根廷、烏克蘭以及中國(guó)等國(guó)家。隨著集約化、規(guī)�；潭鹊奶岣�,在降低養(yǎng)殖成本的同時(shí),高密度養(yǎng)殖也帶來了細(xì)菌性疾病的蔓延傳播,給水貂養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其中,由銅綠假單胞菌引起的出血性肺炎,死亡率較高,是水貂養(yǎng)殖過程中一種重要的細(xì)菌傳染性疾病。噬菌體是感染細(xì)菌的病毒,是自然界分布最廣的一種生物類群,具有存在廣泛、研發(fā)時(shí)間短、成本低；增殖快；安全有效；無殘留等優(yōu)點(diǎn),作為抗生素的替代品,具有廣闊的研發(fā)前景。近年來,抗生素的過量使用以及超級(jí)細(xì)菌的出現(xiàn),噬菌體作為抗菌制劑的研發(fā)又開始受到國(guó)內(nèi)外專家的普遍關(guān)注,并相繼有一些在食品加工過程中控制食源性致病菌的噬菌體制劑產(chǎn)品面市。本論文以水貂源銅綠假單胞菌為宿主,分離其裂解性噬菌體,研究應(yīng)用噬菌體對(duì)水貂出血性肺炎的控制作用。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與結(jié)果如下：1.采集出血性肺炎水貂的肺部樣品,使用銅綠假單胞菌選擇性培養(yǎng)基,分離得到5株銅綠假單胞菌疑似菌株,經(jīng)生理生化指標(biāo)及16S rDNA分子生物學(xué)鑒定,PA1-1、 PA5-1-1、 PA5-1-2、 PA5-2-1、 PA5-2-25株... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：138 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１?ｐｈｉＫＭＶ?Ｉｔ菌體基因組結(jié)構(gòu)［１４８］??Ｆｉｇ．?１．１?Ｇｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｐｈｉＫＭＶ?ｐｈａｇｅ??

能夠?qū)C(jī)體器官和組織造成極大危害，是銅綠假單胞菌最主要的致病因子［１７７］。??釆用ＥＬＩＳＡ方法，比較２０１２年與２００２年銅綠假單胞菌菌株的銅綠假單胞菌外毒素Ａ??水平，結(jié)果如圖２．５所示。結(jié)果顯示，與２００２年水貂源的銅綠假單胞菌比較，２０１２年??菌株的外毒素表達(dá)水平顯著提高（Ｐ＜０．０５），暗示銅綠假單胞菌的致病性逐漸增強(qiáng)。??１．１２?－?—??＞?－Ｔ?■??Ｋ?Ｉ?Ｉ??Ｉｒ?Ｉ?，?Ｉ??圖２．５不同年份銅綠假單胞菌分離株外毒素Ａ水平比較??＊表不差異顯著（Ｐ＜０．０５）。??Ｆｉｇ．２．５?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｅｘｏｔｏｘｉｎ?Ａ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｒ?ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｙｅａｒ??＊ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ，Ｐ＜０．０５．??２．４．７絲裂霉素Ｃ誘導(dǎo)裂解實(shí)驗(yàn)??絲裂霉素Ｃ又稱自力霉素，是從頭狀鏈霉菌培養(yǎng)液中分離提取的一種抗腫瘤抗生素，??具有裂解細(xì)胞ＤＮＡ、干擾ＤＮＡ復(fù)制以及破壞或抑制細(xì)胞壁的形成，造成細(xì)胞壁缺陷型??細(xì)菌的功能。在分離哩菌體前，首先要確定宿主菌不能為溶源性細(xì)菌。目前普遍釆用的??是應(yīng)用絲裂霉素誘導(dǎo)裂解方法處理宿主菌，如宿主菌為溶源性細(xì)菌，就會(huì)導(dǎo)致原嗟菌體??活化

?２．４．１１?一步生長(zhǎng)曲線??ＰＰＡ０２０５和ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ?２種噬菌體的？步生長(zhǎng)曲線如圖２．９所示。可以看出，職??菌體ＰＰＡ０２０５、ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ潛伏期分別為３０?ｍｉｎ和２５?ｍｉｎ，裂解期分別為４０?ｍｉｎ和??３５ｍｉｎ，裂解量分別為７０?ＰＦＵ／?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｃｅｌｌ和１１５?ＰＦＵ／?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｃｅｌｌ，即每個(gè)感染的細(xì)胞??大約可以釋放７０和１１５個(gè)子代噬菌體。與睡菌體ＰＰＡ０２０５相比較，噬菌體ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ??的潛伏期和裂解期較短，裂解量較大。??１０?ｒ??—＾ＰＰＡ０：０５?ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ??■??＾??Ｓ?‘?？?‘?■?？?？?‘??０?１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０?ＳＯ?９０??ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??圖２．９?■菌體一步生長(zhǎng)曲線??Ｆｉｇ?２．９?Ｏｎｅ－ｓｔｅｐ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??２．４．１２?１１菌體的體外抑菌實(shí)驗(yàn)??應(yīng)用噬菌體在動(dòng)物體內(nèi)控制致病菌實(shí)驗(yàn)前，需要考察在體外條件下噬菌體對(duì)致病菌??的裂解能力。噬菌體按照不同的感染復(fù)數(shù)加入到銅綠假單胞菌的培養(yǎng)液，在不同的時(shí)間??點(diǎn)檢測(cè)培養(yǎng)液的ＯＤｅｏｏ值，可以反應(yīng)各個(gè)處理銅綠假單胞菌的生長(zhǎng)情況。結(jié)果如圖２．１０??和圖２．１１所示

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3496849